实验一急性毒性实验
实验一 急性毒性实验
、 目的与要求 1、学习急性毒性试验的方法，掌握LD50的测定方法。 "2、观察马钱子的毒性反应。 ·二、实验原理 ■急性毒性试验是指受试动物在一次大剂量给药后所产生的 毒性反应和死亡情况。药物毒性的大小，常用动物的致死 量来表示，因为动物生与死的生理指标较其他指标明显、 客观、容易掌握。致死量的测定也较准确。在测定致死量 的同时，还应仔细观察动物是否出现耸毛、倦卧、耳壳苍 白或充血、突眼、步履蹒跚、肌肉瘫痪、呼吸困难、昏迷、 惊厥、大小便失禁等不良反应
◼ 一、目的与要求 ◼ 1、学习急性毒性试验的方法，掌握LD50的测定方法。 ◼ 2、观察马钱子的毒性反应。 ◼ 二、实验原理 ◼ 急性毒性试验是指受试动物在一次大剂量给药后所产生的 毒性反应和死亡情况。药物毒性的大小，常用动物的致死 量来表示，因为动物生与死的生理指标较其他指标明显、 客观、容易掌握。致死量的测定也较准确。在测定致死量 的同时，还应仔细观察动物是否出现耸毛、倦卧、耳壳苍 白或充血、突眼、步履蹒跚、肌肉瘫痪、呼吸困难、昏迷、 惊厥、大小便失禁等不良反应
致死量的测定常以半数致死量为标准。半数致死量是指能 够引起试验动物一半死亡的剂量，妈药物致死量对数值， 用符号LD50表示。由于LD50的测定较简便、可靠，而且 稳定，现已成为标志动物急性中毒程度的重要常数。 LD50测定的方法有多种，如Biss法、改进寇氏法、简化 机率单位法、累积插值法、机率单位-加权直线加归法等 等。以上方法虽各有特点，但都有共同的要求： ,(1)动物：均选用体重17~22克健康小鼠（同次试验体 重相差不得超过4克)，或选用体重120~150克（同次试 验体重相差不得超过10克)健康大鼠作实验动物。性别相 同或雌雄各半
◼ 致死量的测定常以半数致死量为标准。半数致死量是指能 够引起试验动物一半死亡的剂量，妈药物致死量对数值， 用符号LD50表示。由于LD50的测定较简便、可靠，而且 稳定，现已成为标志动物急性中毒程度的重要常数。 LD50测定的方法有多种，如Bliss法、改进寇氏法、简化 机率单位法、累积插值法、机率单位-加权直线加归法等 等。以上方法虽各有特点，但都有共同的要求： ◼ （1）动物：均选用体重17～22克健康小鼠（同次试验体 重相差不得超过4克），或选用体重120～150克（同次试 验体重相差不得超过10克）健康大鼠作实验动物。性别相 同或雌雄各半
(2)给药途径：要求采用两种给药途径，其中必须有一种与临 床所采用的相同。溶于水的药物沿须测定静脉注射的LD50。 值得提出的是，临床上虽然不用腹腔注射，但动物实验因腹 腔注射给药方便，吸收迅速，颇为常用。若供试药物在腹腔 内不引起强烈刺激或局部变化（如纤维性病变等），那么啮 齿类动物腹腔注射的LD50,参数很接近于静脉给药的LD50。 口服制剂无法通过注射给药途径时，可只用胃肠给药。 (3)试验周期和观察指标：给药后至少观察7天。观察期间应 逐日记录动物的毒性反应情况和死亡动物的分布
（2）给药途径：要求采用两种给药途径，其中必须有一种与临 床所采用的相同。溶于水的药物沿须测定静脉注射的LD50。 值得提出的是，临床上虽然不用腹腔注射，但动物实验因腹 腔注射给药方便，吸收迅速，颇为常用。若供试药物在腹腔 内不引起强烈刺激或局部变化（如纤维性病变等），那么啮 齿类动物腹腔注射的LD50，参数很接近于静脉给药的LD50。 口服制剂无法通过注射给药途径时，可只用胃肠给药。 （3）试验周期和观察指标：给药后至少观察7天。观察期间应 逐日记录动物的毒性反应情况和死亡动物的分布
(4)正式试验前，均须先用少量动物进行预试试验，大 致测出受试药物引起0%和100%死亡率的致死量范围，然 后安排正式试验。正式试验组数不得少于三个剂量组， 般选用4~5个剂量组，每组动物数为10~20只。 ·(5)报告LD50时需注明实验动物的种属及品系、性别、 体重范围、给药途径及每个剂量组动物数等，还需注明受 试药物的配制方法、给药剂量、各组剂量间的比值（一般 以0.65~0.85为宜)、给药容积、观察时间及计算方法。 还须标出LD50的95%可信限
◼ （4）正式试验前，均须先用少量动物进行预试试验，大 致测出受试药物引起0%和100%死亡率的致死量范围，然 后安排正式试验。正式试验组数不得少于三个剂量组，一 般选用4～5个剂量组，每组动物数为10～20只。 ◼ （5）报告LD50时需注明实验动物的种属及品系、性别、 体重范围、给药途径及每个剂量组动物数等，还需注明受 试药物的配制方法、给药剂量、各组剂量间的比值（一般 以0.65～0.85为宜）、给药容积、观察时间及计算方法。 还须标出LD50的95%可信限
三、实验材料和试剂 ■ 动物：小鼠 药品：马钱子水煎液 ·器材：注射器、灌胃针头、鼠笼
三、实验材料和试剂 ◼ 动物：小鼠 ◼ 药品：马钱子水煎液 ◼ 器材：注射器、灌胃针头、鼠笼
四、操作方法 1、预试实验：预试实验目的是为了找出引起动物0%(Dn)和100% (D)死亡的剂量，以便安排正式实验。预试实验一般采用少量动 物(6~9只小鼠)进行，将动物随机分为3组，组间剂量比值一般以1： 0.5或1：0.7为宜。灌服或腹腔注射量以0.2ml/10g体重为度。预试实 验应进行到找出Dn和Dm后方可安排正式实验。 ■2、正式实验：在预试实验测得Dn和Dm的剂量范围内设4~6个剂量 组，最多10组。最理想的结果是使LD50的上下各有2~3组。组数愈 少，准确性愈差。各剂量组的动物要求相等，至少0只动物（分组时 应注意分层随机均匀化的原则)。本实验要求最大反应率为100%， 最小反应率为0%，或至少反应率接近100%或0%。组间剂量比值(1： K),常用1：0.8或1：0.75。如实验中出现相邻剂量有重复的100% 和0%反应率时，应将靠边的组弃去不计，使大剂量组只有一个100% 的反应率，小剂量组也只有一个0%的反应率
四、操作方法 ◼ 1、预试实验：预试实验目的是为了找出引起动物0%（Dn）和100% （Dm）死亡的剂量，以便安排正式实验。预试实验一般采用少量动 物（6～9只小鼠）进行，将动物随机分为3组，组间剂量比值一般以1： 0.5或1：0.7为宜。灌服或腹腔注射量以0.2ml/10g体重为度。预试实 验应进行到找出Dn和Dm后方可安排正式实验。 ◼ 2、正式实验：在预试实验测得Dn和Dm的剂量范围内设4～6个剂量 组，最多10组。最理想的结果是使LD50的上下各有2～3组。组数愈 少，准确性愈差。各剂量组的动物要求相等，至少10只动物（分组时 应注意分层随机均匀化的原则）。本实验要求最大反应率为100%， 最小反应率为0%， 或至少反应率接近100%或0%。组间剂量比值（1： K），常用1：0.8或1：0.75。如实验中出现相邻剂量有重复的100% 和0%反应率时，应将靠边的组弃去不计，使大剂量组只有一个100% 的反应率，小剂量组也只有一个0%的反应率
·分组完毕和各组剂量算出后，分组灌服或注射不同剂量的 受试药物。为能得到理想的结果，实验最好从中间剂量开 始，以便从最初几个剂量组动物接受药物后的反应来判断 两端剂量是否合适，便于调整剂量和组数。为了提高实验 的精确度和节省药物，受试药物可按“低比稀释法”配置。 即使每只动物的用药体积相等(0.2ml/10g),而溶质不 等。给药后逐日观察并记录中毒反应、死亡率和死亡情况
◼ 分组完毕和各组剂量算出后，分组灌服或注射不同剂量的 受试药物。为能得到理想的结果，实验最好从中间剂量开 始，以便从最初几个剂量组动物接受药物后的反应来判断 两端剂量是否合适，便于调整剂量和组数。为了提高实验 的精确度和节省药物，受试药物可按“低比稀释法”配置。 即使每只动物的用药体积相等（0.2ml/10g），而溶质不 等。给药后逐日观察并记录中毒反应、死亡率和死亡情况
五、实验结果记录与计算 组 剂量 Logd()死亡数 死亡率 P2 P-P2 别 g/kg(d) (P) 1 2 3 4
五、实验结果记录与计算 组 别 剂量 g/kg(d) Logd(X) 死亡数 死亡率 （P） P2 P-P2 1 2 3 4
公式1： (logLD50) X50=Xm-i(ΣP-05) 则LD50=log-1X50 公式2： Sx50=i* 公式3：LD50的95%可信限=lg-1(X50士1.96SX50 LD50的平均可信限=LD50士(LD50高限： LD50低限)/2 m:最大剂量组剂量的对数值 :相邻两组剂量(d)对数值之差，或相邻 两组高剂量与低剂量之比的对数。 P:各组动物的死亡率，用小数表示。 ΣP:为各组动物死亡率的总和。 n:4 每组动物数。 Sx50:1ogLD50的标准误
◼ 公式1: （logLD50） X50=Xm-i(ΣP-05) ◼ 则LD50=log-1 X50 ◼ 公式2： Sx50=i* ◼ 公式3：LD50的95%可信限=lg-1（X50±1.96S X50） ◼ LD50的平均可信限= LD50±（LD50高限- LD50低限）/2 ◼ Xm：最大剂量组剂量的对数值 ◼ i：相邻两组剂量（d）对数值之差，或相邻 两组高剂量与低剂量之比的对数。 ◼ P：各组动物的死亡率，用小数表示。 ◼ ΣP：为各组动物死亡率的总和。 ◼ n：每组动物数。 ◼ Sx50：logLD50的标准误