实验十四、食品中有机磷农药残留量 的测定气相色谱法 标准依据： GB/T5009.20-2003食品中有机磷农药残留量 的测定
实验十四、食品中有机磷农药残留量 的测定-气相色谱法 标准依据: GB/T 5009.20-2003 食品中有机磷农药残留量 的测定
一、目的与要求 1.掌握气相色谱仪的工作原理及使用方法。 2.学习食品中有机磷农药残留的气相色谱测定方法 二、原理 食品中残留的有机磷农药经有机溶剂提取并经净化 浓缩后，注入气相色谱仪，气化后在载气携带下于 色谱柱中分离，由火焰光度检测器检测。当含有机 磷的试样在检测器中的富氢焰上燃烧时，以HPO碎 片的形式，放射出波长为526m的特性光，这种光 经检测器的单色器（滤光片）将非特征光谱滤除后， 由光电倍增管接收，产生电信号而被检出。试样的 峰面积或峰高与标准品的峰面积或峰高进行比较定 量
一、目的与要求 1．掌握气相色谱仪的工作原理及使用方法。 2．学习食品中有机磷农药残留的气相色谱测定方法。 二、原理 ◼ 食品中残留的有机磷农药经有机溶剂提取并经净化、 浓缩后，注入气相色谱仪，气化后在载气携带下于 色谱柱中分离，由火焰光度检测器检测。当含有机 磷的试样在检测器中的富氢焰上燃烧时，以HPO碎 片的形式，放射出波长为526nm的特性光，这种光 经检测器的单色器（滤光片）将非特征光谱滤除后， 由光电倍增管接收，产生电信号而被检出。试样的 峰面积或峰高与标准品的峰面积或峰高进行比较定 量
三、仪器与试剂 (一)仪器 1.气相色谱仪： 附有火焰光度检测器(FPD)。 2. 电动振荡器 3. 组织捣碎机 m4. 旋转蒸发仪 (二)试剂 ■1.二氯甲烷： m2. 丙酮： ■3.无水硫酸钠： 在700C灼烧4h后备用： ■4. 中性氧化铝：在550°℃灼烧4h: ■5.硫酸钠溶液： ·6.有机磷农药标准贮备液： ■7.有机磷农药标准使用液；
三、仪器与试剂 ◼ （一）仪器 ◼ 1．气相色谱仪：附有火焰光度检测器（FPD）。 ◼ 2．电动振荡器 ◼ 3．组织捣碎机 ◼ 4．旋转蒸发仪 ◼ （二）试剂 ◼ 1．二氯甲烷； ◼ 2．丙酮； ◼ 3．无水硫酸钠：在700℃灼烧4h后备用； ◼ 4．中性氧化铝：在550℃灼烧4h； ◼ 5．硫酸钠溶液； ◼ 6．有机磷农药标准贮备液； ◼ 7．有机磷农药标准使用液；
四、实验步骤 (一)样品处理 1.蔬菜：取适量蔬菜擦净，去掉不可食部分后称取蔬菜试样，将蔬 菜切碎混匀。称取10.0g混匀的试样，置于250mL具塞锥形瓶中， 加30g~100g无水硫酸钠脱水，剧烈振摇后如有固体硫酸钠存在， 说明所加无水硫酸钠己够。加02g~0.8g活性炭脱色。加70mL二 氯甲烷，在振荡器上振摇0.5h,经滤纸过滤。量取35mL滤液，在 通风柜中室温下自然挥发至近干，用二氯甲烷少量多次研洗残渣， 移入10mL具塞刻度试管中，并定容至2mL,备用。 ■2.谷物：将样品磨粉（稻谷先脱壳），过20日筛，混匀。称取 10g置于具塞锥形瓶中，加入0.5g中性氧化铝（小麦、玉米再加 0.2g活性炭)及20mL二氯甲烷，振摇0.5h,过滤，滤液直接进样。 若衣药残留过低，则加30mL二氯甲烷，振摇过滤，量取15mL滤液 浓缩，并定容至2mL进样
四、实验步骤 ◼ （一）样品处理 ◼ 1．蔬菜：取适量蔬菜擦净,去掉不可食部分后称取蔬菜试样，将蔬 菜切碎混匀。称取10.0g混匀的试样，置于250mL具塞锥形瓶中， 加30g～100g无水硫酸钠脱水，剧烈振摇后如有固体硫酸钠存在， 说明所加无水硫酸钠已够。加0.2g～0.8g活性炭脱色。加70mL二 氯甲烷，在振荡器上振摇0.5h，经滤纸过滤。量取35mL滤液，在 通风柜中室温下自然挥发至近干，用二氯甲烷少量多次研洗残渣， 移入10mL具塞刻度试管中，并定容至2mL，备用。 ◼ 2．谷物：将样品磨粉（稻谷先脱壳），过20目筛，混匀。称取 10g置于具塞锥形瓶中，加入0.5g中性氧化铝（小麦、玉米再加 0.2g活性炭）及20mL二氯甲烷，振摇0.5h，过滤，滤液直接进样。 若农药残留过低，则加30mL二氯甲烷，振摇过滤，量取15mL滤液 浓缩，并定容至2mL进样
四、实验步聚 年 3.植物油：称取5.0g混匀的试样，用50L丙酮分次溶解并洗入分 液漏斗中，摇匀后，加10mL水，轻轻旋转振摇1min,静置1h以上 弃去下面析出的油层，上层溶液自分液漏斗上口倾入另一分液漏斗 中，当心尽量不使剩余的油滴倒入（如乳化严重，分层不清，则放 入50mL离心管中，于2500r/min转速下离心0.5h,用滴管吸出上层 清夜)。加30mL二氯甲烷，100mL50g/L硫酸钠溶液，振摇1min. 静置分层后，将二氯甲烷提取液移至蒸发皿中。丙酮水溶液再用 10L二氯甲烷提取一次，分层后，合并至蒸发皿中。自然挥发后， 如无水，可用二氯甲烷少量多次研洗蒸发皿中残液移入具塞量筒中， 并定容至5L。加2g无水硫酸钠振摇脱水，再加1g中性氧化铝、 0.2g活性炭（毛油可加0.5g)振荡脱油和脱色，过滤，滤液直接进 样。如自然挥发后尚有少量水，则需反复抽提后再如上操作
四、实验步骤 ◼ 3．植物油：称取5.0g混匀的试样，用50mL丙酮分次溶解并洗入分 液漏斗中，摇匀后，加10mL水，轻轻旋转振摇1min，静置1h以上， 弃去下面析出的油层，上层溶液自分液漏斗上口倾入另一分液漏斗 中，当心尽量不使剩余的油滴倒入（如乳化严重，分层不清，则放 入50mL离心管中，于2500r/min转速下离心0.5h，用滴管吸出上层 清夜）。加30mL二氯甲烷，100mL50g/L硫酸钠溶液，振摇1min。 静置分层后，将二氯甲烷提取液移至蒸发皿中。丙酮水溶液再用 10mL二氯甲烷提取一次，分层后，合并至蒸发皿中。自然挥发后， 如无水，可用二氯甲烷少量多次研洗蒸发皿中残液移入具塞量筒中， 并定容至5mL。加2g无水硫酸钠振摇脱水，再加1g中性氧化铝、 0.2g活性炭（毛油可加0.5g）振荡脱油和脱色，过滤，滤液直接进 样。如自然挥发后尚有少量水,则需反复抽提后再如上操作
(二)色谱条件 1.色谱柱：玻璃柱，内径3mm,长1.5m~2.0m。 (1)分离测定敌敌畏、乐果、马拉硫磷和对疏磷的色谱住 ①内装涂以2.5%SE一30和3%QF一1混合固定液的60目~80目 Chromosorb WAW DMCS: ■②内装涂以1.5%OV一17和2%QF-1混合固定液的60日~80目 Chromosorb WAW DMCS: ③内装涂以2%OV一101和2%QF一1混合固定液的60目~80目 Chromosorb WAW DMCS. (2)分离测定甲拌磷、稻瘟净、倍硫磷、杀螟硫磷及虫螨磷的色谱住 ■①内装涂以3%PEGA和5%QF-1混合固定液的60目~80目 Chromosorb WAW DMCS: ②内装涂以2%NPGA和3%QF一1混合固定液的60目~80目 Chromosorb WAW DMCS; 2.气流速度：载气为氮气80mL/min:空气50mL/min;氢气180 mL/min (氮气、空气和氢气之比按各仪器型号不同选择各自的最佳比例条 件)。 3.温度：进样口：220℃；检测器：240℃；柱温：180℃，但测定敌敌 畏为130C
（二）色谱条件 1．色谱柱：玻璃柱，内径3mm，长1.5m～2.0m。 （1）分离测定敌敌畏、乐果、马拉硫磷和对硫磷的色谱住 ◼ ①内装涂以2.5％SE－30和3％QF－1混合固定液的60目～80目 Chromosorb W AW DMCS； ◼ ②内装涂以1.5％OV－17和2％QF－1混合固定液的60目～80目 Chromosorb W AW DMCS； ◼ ③内装涂以2％OV－101和2％QF－1混合固定液的60目～80目 Chromosorb W AW DMCS。 （2）分离测定甲拌磷、稻瘟净、倍硫磷、杀螟硫磷及虫螨磷的色谱住 ◼ ①内装涂以3％PEGA和5％QF－1混合固定液的60目～80目 Chromosorb W AW DMCS； ◼ ②内装涂以2％NPGA和3％QF－1混合固定液的60目～80目 Chromosorb W AW DMCS； 2．气流速度：载气为氮气80mL/min；空气50mL/min；氢气180mL/min （氮气、空气和氢气之比按各仪器型号不同选择各自的最佳比例条 件）。 3．温度：进样口：220℃；检测器：240℃；柱温：180℃，但测定敌敌 畏为130℃
(三)测定 期 将有机磷农药标准使用液2L~5L分别注入 气相色谱仪中，可测得不同浓度有机磷标准溶 液的峰高，分别绘制有机磷农药质量-峰高标 准曲线。同时取试样溶液2L~5L注入气相 色谱仪中，测得峰高，从标准曲线图中查出相 应的含量
（三）测定 ◼ 将有机磷农药标准使用液2μL～5μL分别注入 气相色谱仪中，可测得不同浓度有机磷标准溶 液的峰高，分别绘制有机磷农药质量-峰高标 准曲线。同时取试样溶液2μL～5μL注入气相 色谱仪中，测得峰高，从标准曲线图中查出相 应的含量
五、结果计算 按下式计算： A X= m×1000 式中： X一试样中有机磷农药的含量，单位为mg/Kg: A一进样体积中有机磷农药的质量，由标准曲线中查得，单位为 ng; m一与进样体积(L)相当的试样质量，单位为g 计算结果保留两位有效数字
五、结果计算 ◼ 按下式计算： ◼ 式中： ◼ X——试样中有机磷农药的含量，单位为mg/Kg； ◼ A——进样体积中有机磷农药的质量，由标准曲线中查得，单位为 ng； ◼ m——与进样体积（μL）相当的试样质量，单位为g。 ◼ 计算结果保留两位有效数字。 1000 = m A X
六、注意事项 本法采用毒性较小且价格较为便宜的二氯甲烷 作为提取试剂，国际上多用乙氰作为有机磷农 药的提取试剂及分配净化试剂，但其毒性较大。 ■ 有些稳定性差的有机磷农药如敌敌畏因稳定性 差且易被色谱柱中的担体吸附，故本法采用降 低操作温度来克服上述困难。另外，也可采用 缩短色谱柱至1-1.3米或减少固定液涂渍的厚 度等措施来克服
六、注意事项 ◼ 本法采用毒性较小且价格较为便宜的二氯甲烷 作为提取试剂,国际上多用乙氰作为有机磷农 药的提取试剂及分配净化试剂,但其毒性较大。 ◼ 有些稳定性差的有机磷农药如敌敌畏因稳定性 差且易被色谱柱中的担体吸附，故本法采用降 低操作温度来克服上述困难。另外，也可采用 缩短色谱柱至1-1.3米或减少固定液涂渍的厚 度等措施来克服
七、思考题 ▣本实验的气路系统包括哪些，各有何作用？ 口电子捕获检测器及火焰光度检测器的原理及适用范 围？ 如何检验该实验方法的准确度？如何提高检测结果 的准确度？
七、思考题 ❑ 本实验的气路系统包括哪些，各有何作用？ ❑ 电子捕获检测器及火焰光度检测器的原理及适用范 围？ ❑ 如何检验该实验方法的准确度？如何提高检测结果 的准确度？