敛毛细管电泳 及其在农药分析中的应用 徐娟理学院 050360002
高效毛细管电泳 及其在农药分析中的应用 徐娟 理学院 030360002
向题的提出 我国现有中药种类已达12807种,其中药用植物1146种 药用动物1581种,药用矿物80种、中草药在保护人民群众 健康方面起看重要作用、由于需求量大,野生中草药远远 不能满足市场的需求,目前大部分中草药都依赖人工栽 培、全国药材种植面积超过580万亩,药材生产基地600多 常年栽培的药材达200余种、为了保障种植药材的产 量,药农不得不频繁地使用各种农药、农药残留不仅影响 群众的健康,还影响我国名贵药材的出口创汇、如80年代 末云南省出口日本的三七大量退货,目前我国人参在海外 市场日益受韩国高丽参的排挤等,都有农药残留超标的原 因
一、问题的提出 我国现有中药种类已达12807种，其中药用植物11146种， 药用动物1581种，药用矿物80种．中草药在保护人民群众 健康方面起着重要作用．由于需求量大，野生中草药远远 不能满足市场的需求，目前大部分中草药都依赖人工栽 培．全国药材种植面积超过580万亩，药材生产基地600多 个，常年栽培的药材达200余种．为了保障种植药材的产 量，药农不得不频繁地使用各种农药．农药残留不仅影响 群众的健康，还影响我国名贵药材的出口创汇．如80年代 末云南省出口日本的三七大量退货，目前我国人参在海外 市场日益受韩国高丽参的排挤等，都有农药残留超标的原 因．
C的装置及基本原理 数据采集 毛细管人口 检测器 毛细管出 :1:L电解液储惰 电解液储檀 高压 图1毛细管电泳仪示意图
二、CE的装置及基本原理
用用 毛细管电泳仪在实验蜜中
毛细管电泳仪在实验室中
三、CE的特点:三高二少一广 高质量灵敏度:常用紫外检测器的检测限可达1013-1015mo,激 光诱导荧光检测器LF则达1019-1021 高分辦率每米理论塔板歉为几+万,高可达几百万玉几千 万 高速度:许多分析可在10分钟内完成,有的可在60秒内完成。 所需样品少:只需纳升(109升)的进样量。 成本低:只需少量(几毫升)的流动相和低廉的毛细笞。 应用范围广:除分离生物大分子(肽、蛋白、DNA和糖等)外, 还可用于小分子(氨基酸、药物等)及离子(无机及有机离子等),甚 至可分离各种颗粒(如硅胶颗粒等)
三、CE的特点 • 高质量灵敏度：常用紫外检测器的检测限可达10-13－10-15mol，激 光诱导荧光检测器(LIF)则达10-19 -10-21。。 • 高分辨率：每米理论塔板数为几十万，高者可达几百万乃至几千 万。 • 高速度：许多分析可在10分钟内完成，有的可在60秒内完成。 • 所需样品少：只需纳升(10-9升)的进样量。 • 成本低：只需少量(几毫升)的流动相和低廉的毛细管。 • 应用范围广：除分离生物大分子（肽、蛋白、DNA和糖等）外， 还可用于小分子(氨基酸、药物等)及离子(无机及有机离子等)，甚 至可分离各种颗粒(如硅胶颗粒等)。 ：三高二少一广
四、CE的分离模式 1毛细管区带电泳( capilary zone electrophoresis, CZE) C匹E的分离机理是基于各被分离物质的净电荷与质量比 (荷质比间的差异。应用范围包括氨基酸、肽、蛋白 离子分析、对映体拆分和很多其宅离子态物质的分析。 2胶束电动色谱( micellar electrokinetic capilla chromatography, MECO) MECC是唯一既能分离中性嵱质又能分离带电组分的CE 模式。采用表面活性剂(如十二烷基硫酸钠,SDS)在 作缓冲腋内形成有一疏水内核、外部带负电的胶束相。 利用嵱质具有不同的疏水性,在水相和胶束相(准固定 相)间分配的差异得以分离。主要用于小分子、中性化 合物,手性对映体、各种药物等
四、CE的分离模式 1 毛细管区带电泳(capilary zone electrophoresis,CZE) CZE的分离机理是基于各被分离物质的净电荷与质量比 (荷质比)间的差异。应用范围包括氨基酸、肽、蛋白、 离子分析、对映体拆分和很多其它离子态物质的分析。 2 胶束电动色谱(micellar electrokinetic capillary chromatography，MECC) MECC是唯一既能分离中性溶质又能分离带电组分的CE 模式。采用表面活性剂(如十二烷基硫酸钠，SDS)在操 作缓冲液内形成有一疏水内核、外部带负电的胶束相。 利用溶质具有不同的疏水性，在水相和胶束相(准固定 相)间分配的差异得以分离。主要用于小分子、中性化 合物，手性对映体、各种药物等
3毛细管凝胶电泳( capillary gel electrophoresis,CGE) cGE是将凝胶移到乇细答中作支持物进行的电泳。不同 体积的嵱质分子在起“分子筛”作用的凝胶中电泳分 离。常用于蛋白质、寡聚核苷酸、RNA、DNA片新分 离和测序及PCR产物分析。现在还有用无胶筛分方 法,同样可达分离目的。 4毛细管等电聚焦( capillary isoelectric focusing,CIEF) CIEF是用两性电解质在毛细管内建立pH梯度,使各种 具有不同等电点的蛋白质在电场作用下迁移到等电点 的位置,形成一非常窄的聚焦区带。已成功用于测定 蛋白质等电点,分离异构体或用其宅方法难于分离的 蛋白质
3毛细管凝胶电泳(capillary gel electrophoresis，CGE) CGE是将凝胶移到毛细管中作支持物进行的电泳。不同 体积的溶质分子在起“分子筛”作用的凝胶中电泳分 离。常用于蛋白质、寡聚核苷酸、RNA、DNA片断分 离和测序及PCR产物分析。现在还有采用无胶筛分方 法，同样可达分离目的。 4毛细管等电聚焦(capillary isoelectric focusing，CIEF) CIEF是用两性电解质在毛细管内建立pH梯度，使各种 具有不同等电点的蛋白质在电场作用下迁移到等电点 的位置，形成一非常窄的聚焦区带。已成功用于测定 蛋白质等电点，分离异构体或用其它方法难于分离的 蛋白质
5毛细管等速电泳( capillary isotachophoresis, CITP CIP采用先导电解质和尾随电解质,使嵱质按 其电詠淌度不同得以分离,是一种较老的方式。 现在可作为柱前浓缩方法用于富集样品。 6毛细管电色谱( capillary electrochromatography, CEC CEC是将HPLC中众多的固定相微粒填充到毛细 管中,以样品与固定相之间的相互作用为分离 机制,以电渗流为流动相驱动力的色谱过程。 虽然柱效有所下降,但增加了选择性,是一种 有发展前景的模式
5毛细管等速电泳(capillary isotachophoresis ， CITP) CITP采用先导电解质和尾随电解质，使溶质按 其电泳淌度不同得以分离，是一种较老的方式。 现在可作为柱前浓缩方法用于富集样品。 6毛细管电色谱(capillary electrochromatography， CEC) CEC是将HPLC中众多的固定相微粒填充到毛细 管中，以样品与固定相之间的相互作用为分离 机制，以电渗流为流动相驱动力的色谱过程。 虽然柱效有所下降，但增加了选择性，是一种 有发展前景的模式
五、在农药分析中的应用 1.定量分析研究安 2.在农药制剂和原药中有效成分的测定 3.在农药中杂质的分离和测定 4.手性农药分析
五、 在农药分析中的应用 1. 定量分析研究 2. 在农药制剂和原药中有效成分的测定 3. 在农药中杂质的分离和测定 4. 手性农药分析
六、应用实俐一毛拇管电泳法酐宠提 取剂对黄连一黄柏共煎剂中生物碱含 量的影响 1,样*品制备 粉碎一过筛-淚饱-回流-用水提取 提取剂提取 2.电泳分析 稳定仪器确定检测波长十选择缓冲嵱液 电泳检测
六、应用实例－ 毛细管电泳法研究提 取剂对黄连－黄柏共煎剂中生物碱含 量的影响 1. 样品制备 粉碎－过筛－浸泡－回流－用水提取 －提取剂提取 2. 电泳分析 稳定仪器－确定检测波长－选择缓冲溶液 －电泳检测