色谱技术 色谱法的分类 按照固定相与流动相物态分 相色谱:GC(GSC;GLC) 令液相色谱:(LSC;LLC) 超临界流体色谱:(SFC) 按照固定相使用形式分 柱色谱 平面色谱:在平面介质上进行组分分离的技术 薄层色谱:(TIC)薄层板和薄层棒 纸上色谱:(PC)圆形纸上色谱
色谱技术 v 色谱法的分类 v 一、按照固定相与流动相物态分 v 气相色谱： GC （GSC；GLC） v 液相色谱：（LSC；LLC） v 超临界流体色谱：（SFC） v 二、按照固定相使用形式分 v 柱色谱 v 平面色谱 ：在平面介质上进行组分分离的技术 薄层色谱：（TLC）薄层板和薄层棒 纸上色谱：（PC）圆形纸上色谱
三、按照分离机理分类 吸附色谱 2、分配色谱 3、离子交换色谱:(IC) 利用离子交换树脂作固定相分离离子型化合物的色谱 法。用高效掖相色谱技术和离子交换树脂柱,用含 有某种特定例子的水溶液作流动相,在降低流动相 背景信号的前提下进行离子分离;或通过调节流动 相的pH值以抑制试样作粉的电离,从而分离离子化 合物:(离子抑制色谱)
v 三、按照分离机理分类 v 1、吸附色谱 v 2、分配色谱 v 3、离子交换色谱：（IC） 利用离子交换树脂作固定相分离离子型化合物的色谱 法。用高效掖相色谱技术和离子交换树脂柱，用含 有某种特定例子的水溶液作流动相，在降低流动相 背景信号的前提下进行离子分离；或通过调节流动 相的pH值以抑制试样作粉的电离，从而分离离子化 合物：（离子抑制色谱）
4、离子排除色谱:(IEC)利用离子交换树脂对电 解质与非电解质的斥力不同而达到分离的色谱法 最常用的是粒径=15μm高效凝胶型磺化苯乙烯/二乙 烯苯离子交换树脂(强酸型)。树脂溶涨后在小球 中溪流的水是稳定的水相,小球间是流动的水相 离子交换树脂在两个水相间起半透膜作用。试样中 与离子交换树脂的离子带相同电荷的离子被排斥在 固定水相之外,弱酸一分子存在被固定水相滞留; 非离子组分不被滞留,在两相间进行分配,按照祖 坟与树脂官能团作用力大小不同分开
v 4、离子排除色谱：（IEC）利用离子交换树脂对电 解质与非电解质的斥力不同而达到分离的色谱法。 最常用的是粒径=15μm 高效凝胶型磺化苯乙烯/二乙 烯苯离子交换树脂（强酸型）。树脂溶涨后在小球 中溪流的水是稳定的水相，小球间是流动的水相。 离子交换树脂在两个水相间起半透膜作用。试样中 与离子交换树脂的离子带相同电荷的离子被排斥在 固定水相之外，弱酸一分子存在被固定水相滞留； 非离子组分不被滞留，在两相间进行分配，按照祖 坟与树脂官能团作用力大小不同分开
令5、离子对色谱法:(IPC)在流动相中加入与所要 分离的组分相反电荷的离子(称为离子对,即离子 试剂),与组分形成离子对,从而改变组分的保留 值和分离度。 6、凝胶色谱:空间排除色谱、分子排除色谱、分子 筛色谱、液体排除色谱、体积排除色谱等(GPC) 用于大分子分离,生化中水嘴流动相成为凝胶过滤 色谱;合成高聚物中用有机物作流动性成为凝胶渗 透色谱
v 5、离子对色谱法：（IPC）在流动相中加入与所要 分离的组分相反电荷的离子（称为离子对，即离子 试剂），与组分形成离子对，从而改变组分的保留 值和分离度。 v 6、凝胶色谱：空间排除色谱、分子排除色谱、分子 筛色谱、液体排除色谱、体积排除色谱等（GPC）。 用于大分子分离，生化中水嘴流动相成为凝胶过滤 色谱；合成高聚物中用有机物作流动性成为凝胶渗 透色谱
亲和色谱生物体内生物分子之间都具有亲和力, 能形成可逆络合物,利用这种可逆络和与解离原理 进行色谱分离,即把配基键和在不溶于水的惰性载 体上成为亲和物从而进行提纯的技术 如酶与基质、抑制剂、变构效应剂或辅酶;激素与细 胞受体;维生素与结合蛋白;基团与核酸;抗体与 抗原;外源凝集素与红细胞表面的抗原等都具有亲 和力
v 亲和色谱 生物体内生物分子之间都具有亲和力， 能形成可逆络合物，利用这种可逆络和与解离原理 进行色谱分离，即把配基键和在不溶于水的惰性载 体上成为亲和物从而进行提纯的技术。 如酶与基质、抑制剂、变构效应剂或辅酶；激素与细 胞受体；维生素与结合蛋白；基团与核酸；抗体与 抗原；外源凝集素与红细胞表面的抗原等都具有亲 和力
按照色谱的动力学过程分为 1、洗脱法组分在固定相和流动性反复的进行 分配和再分配,或吸附与解吸。由于各组分 的分配系数不同或吸附系数不同而分离 2、顶替法(置换法)直接用流动性作为顶替 剂,试样进入色谱柱后反复平衡。流动相在 在固定相上的溶度或吸附力比试样强和试样 中各组分的溶度与吸附力差异而分离
v 按照色谱的动力学过程分为 1、洗脱法 组分在固定相和流动性反复的进行 分配和再分配，或吸附与解吸。由于各组分 的分配系数不同或吸附系数不同而分离。 2、顶替法（置换法） 直接用流动性作为顶替 剂，试样进入色谱柱后反复平衡。流动相在 在固定相上的溶度或吸附力比试样强和试样 中各组分的溶度与吸附力差异而分离
令前沿法(迎头法)用试样本身或溶解在溶 剂中作为流动性。流动性通过色谱柱是按照 组分在固定相上的溶度或吸附力差别顺序流 出。最后流出的与通入试样的组分相同。只 用于简单混合物的分离
v 前沿法 （迎头法） 用试样本身或溶解在溶 剂中作为流动性。流动性通过色谱柱是按照 组分在固定相上的溶度或吸附力差别顺序流 出。最后流出的与通入试样的组分相同。只 用于简单混合物的分离
气相色谱(GC) 分离原理: 载气(如N2)通过进样器将样品带往色谱柱进行分 离,空气和H进入检测器燃烧升温。 令色谱柱和检测器温度由控温仪控制。样品经检测后 信号进入放大器放大,进入记录仪记录 气相色谱法分类: 气一固(GSC)只用于分离低分子物质 令气一液(GLC) 冷气源:提供载气(N2)H2、空气(燃烧) 令气流进化及控制流量系统
气相色谱（GC） v 分离原理： v 载气（如N2 ）通过进样器将样品带往色谱柱进行分 离 ，空气和H2进入检测器燃烧升温。 v 色谱柱和检测器温度由控温仪控制。样品经检测后 信号进入放大器放大，进入记录仪记录。 v 气相色谱法分类： v 气—固 （GSC）只用于分离低分子物质 v 气—液（GLC） v 气源：提供载气（N2）H2 、空气（燃烧） v 气流进化及控制流量系统
冷死时间tM:不被吸附成分通过色谱住停留的时间; 令保留时间tR被吸附成分通过色谱住停留的时间 令调整保留时间t'R=tR-tM由于吸附不被吸附成分多停的留 时间 死体积VM=tMF(流速×时间) 冷保留体积Vg=tgF 令调整保留体积Vg'=t.'RF=Vg-VM 冷相对保留值a=tR(2)/tR(1组分1对组分2相对保留值 分配系数K=C、Cm被分离组分在固相和在流动相的浓度之比
v 死时间t M：不被吸附成分通过色谱住停留的时间； v 保留时间t R被吸附成分通过色谱住停留的时间； v 调整保留时间t’ R = t R - t M由于吸附不被吸附成分多停的留 时间 v 死体积VM = tM.F（流速×时间） v 保留体积 VR=tR.F v 调整保留体积VR ’= t.’ RF=VR-VM v 相对保留值α = t’ R（2） / t’ R （1） 组分1对组分2相对保留值 v 分配系数K= Cs/Cm被分离组分在固相和在流动相的浓度之比
令色谱区域宽度:组分在色谱柱中谱带扩张函数。 令表示方法:标准偏差σ标准偏差0.607倍峰高处峰宽的一半。 令半峰宽度Y1(半宽度、区域宽度)峰高一半处的宽度。 令基线宽度Y色谱峰两侧拐点上的饿切线在基线上的截距。 冷Y=40;Y12=2.3540 今分配容量K=W柱内液体所占体积/柱内气体所占体积
v 色谱区域宽度：组分在色谱柱中谱带扩张函数。 v 表示方法：标准偏差σ 标准偏差0.607倍峰高处峰宽的一半。 v 半峰宽度 Y1/2（半宽度、区域宽度）峰高一半处的宽度。 v 基线宽度 Y 色谱峰两侧拐点上的饿切线在基线上的截距。 v Y= 4 σ ； Y1/2 = 2.354σ v 分配容量k=vl/vg 柱内液体所占体积/柱内气体所占体积