第九章 酶免疫技术 第一节 酶免疫技术的特点 一、酶和酶作用底物 二、酶标记抗体或抗原 三、固相载体
第九章 酶免疫技术 第一节 酶免疫技术的特点 一、酶和酶作用底物 二、酶标记抗体或抗原 三、固相载体
第二节酶免疫技术的分类 一、均相酶免疫测定 二、非均相酶免疫测定 第三节 酶联免疫吸附试验 一、基本原理 二、方法类型及反应原理 思考题 小结
第二节酶免疫技术的分类 一、均相酶免疫测定 二、非均相酶免疫测定 第三节 酶联免疫吸附试验 一、基本原理 二、方法类型及反应原理 思考题 小结
放 射 免 疫 技 术 发 光 免 疫 技 术 酶 免 疫 技 术 三大经典标记技术 三大经典标记技术
放 射 免 疫 技 术 发 光 免 疫 技 术 酶 免 疫 技 术 三大经典标记技术 三大经典标记技术
第一节 酶免疫技术的特点
第一节 酶免疫技术的特点
• 主要试剂: 酶标记的抗体或抗原 • 酶标物特点： 免疫学活性 酶对底物的催化活性 抗原抗体反应的特异性 + 酶高效催化反应的专一性 原理及特点
• 主要试剂: 酶标记的抗体或抗原 • 酶标物特点： 免疫学活性 酶对底物的催化活性 抗原抗体反应的特异性 + 酶高效催化反应的专一性 原理及特点
特点： ➢灵敏度高、特异性强、 准确性好 ➢酶标记试剂能够较长时 间保持稳定 ➢操作简便、对环境没有 污染。 ➢易与其它技术偶联 衍生出适用范围更广的 新方法。 原理： ➢酶标抗体（抗原）与抗原 （抗体）的特异性反应 ➢酶对底物的显色反应 ➢对抗原或抗体进行定位、 定性或定量的测定分析 原理及特点
特点： ➢灵敏度高、特异性强、 准确性好 ➢酶标记试剂能够较长时 间保持稳定 ➢操作简便、对环境没有 污染。 ➢易与其它技术偶联 衍生出适用范围更广的 新方法。 原理： ➢酶标抗体（抗原）与抗原 （抗体）的特异性反应 ➢酶对底物的显色反应 ➢对抗原或抗体进行定位、 定性或定量的测定分析 原理及特点
标记酶的要求： 活性高 性质稳定 专一性强 酶催化底物的显色信号易于判断和测量 方法敏感，重复性好，简单易行 酶的底物易于配制保存，酶及底物价廉 一、酶和酶作用底物
标记酶的要求： 活性高 性质稳定 专一性强 酶催化底物的显色信号易于判断和测量 方法敏感，重复性好，简单易行 酶的底物易于配制保存，酶及底物价廉 一、酶和酶作用底物
辣根过氧化物酶（HRP） 糖蛋白（主酶） 亚铁血红素（辅基） 主酶与酶活性无关 辅基是酶的活性中心 RZ值：403nm （辅基） 与275nm（主酶） OD值之比 RZ值与酶活性无关， 酶活性单位比RZ值 更为重要 ELISA中应用最为广 泛的标记用酶 常用酶 酶和酶作用底物
辣根过氧化物酶（HRP） 糖蛋白（主酶） 亚铁血红素（辅基） 主酶与酶活性无关 辅基是酶的活性中心 RZ值：403nm （辅基） 与275nm（主酶） OD值之比 RZ值与酶活性无关， 酶活性单位比RZ值 更为重要 ELISA中应用最为广 泛的标记用酶 常用酶 酶和酶作用底物
碱性磷酸酶（AP） 菌源性AP 肠粘膜AP β–半乳糖苷酶（β-Gal） 用于均相酶 免疫测定 常用酶 酶和酶作用底物
碱性磷酸酶（AP） 菌源性AP 肠粘膜AP β–半乳糖苷酶（β-Gal） 用于均相酶 免疫测定 常用酶 酶和酶作用底物
HRP的底物 DH2+H2O2→ → → D+2H2O HR P 供氢体DH2习惯上被称为底物，底物有多种 H2O2为受氢体，HRP对受氢体的专一性很 高 常用底物 酶和酶作用底物
HRP的底物 DH2+H2O2→ → → D+2H2O HR P 供氢体DH2习惯上被称为底物，底物有多种 H2O2为受氢体，HRP对受氢体的专一性很 高 常用底物 酶和酶作用底物