酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked imunosorbentassay,ELISA)
酶联免疫吸附试验 (Enzyme-linked imunosorbent assay,ELISA)
免疫标记技术：即用酶、同位素、荧光素、胶体金、发光物质等标记物作为追踪和放大物，标记抗体或抗原，进行的抗原抗体反应。免疫标记技术具有灵敏度和特异性高、快速、可定性、定量、定位检测的优点，是目前应用最为广泛的免疫学检测技术
免疫标记技术：即用酶、同位素、荧光素、 胶体金、发光物质等标记物作为追踪和放大物，标记抗 体或抗原，进行的抗原抗体反应。 免疫标记技术具有灵敏度和特异性高、快速、可定 性、定量、定位检测的优点，是目前应用最为广泛的免 疫学检测技术
免疫标记技术的种类免疫荧光技术（lmmunoflurescencetechnique），免疫酶技术（lmmunoenzymatictechnique）：同位素标记技术（lsotopelabellingtechnique免疫胶体金技术(lmmunogoldstaining)免疫发光分析（Luminescentimmunoassay）
免疫标记技术的种类 • 免疫荧光技术(Immunoflurescence technique） • 免疫酶技术(Immunoenzymatic technique) • 同位素标记技术(Isotope labelling technique) • 免疫胶体金技术(Immunogold staining) • 免疫发光分析(Luminescent immunoassay)
（或抗体）·免疫酶标技术：用酶标记的已知抗原来检测未知的抗体（或抗原）的一种免疫学标记技术。它同时利用了酶的高效催化效能及Ag-Ab反应的高度特异性，根据底物被酶分解后产物的显色及深浅可对待测样品中Ag、Ab进行定性、定量、定位检测。可分为酶联免疫吸附试验和酶免疫组化技术
• 免疫酶标技术：用酶标记的已知抗原（或抗体） 来检测未知的抗体（或抗原）的一种免疫学标记 技术。它同时利用了酶的高效催化效能及Ag-Ab反 应的高度特异性，根据底物被酶分解后产物的显 色及深浅可对待测样品中Ag、Ab进行定性、定量、 定位检测。 • 可分为酶联免疫吸附试验和酶免疫组化技术
常用于标记的酶常用的酶辣根过氧化物酶（horseradish_peroxidase，HRP)碱性磷酸酶(alkaline phosohatase，ALP)葡萄糖氧化酶、β-D-半乳糖苷酶和酶等Note：最好在受检标本中不存在与选用的酶相同的酶Returnz
常用于标记的酶 • 常用的酶 辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP) 碱性磷酸酶(alkaline phosohatase, ALP) 葡萄糖氧化酶、β-D-半乳糖苷酶和脲酶等。 • Note: 最好在受检标本中不存在与选用的酶相同的酶。 Return>>
HRP的底物JTMBTMB经HRP作用后产物显蓝色，自视对比鲜明。用HCL或H,SO.终止酶反应后，TMB产物由蓝色变成黄色，可在比色计中定量，最适吸收波长为405nm。TMB性质较稳定，可配成溶液试剂，只需与H202溶液混合即成应用液，可直接作底物使用，TMB具有无致癌性等优点，因此在ELISA中应用日趋广泛
HRP 的底物——TMB • TMB经HRP作用后产物显蓝色，目视对比鲜明。用 HCL或H2SO4终止酶反应后，TMB产物由蓝色变成黄 色，可在比色计中定量，最适吸收波长为405nm。 • TMB性质较稳定，可配成溶液试剂，只需与H2O2溶 液混合即成应用液，可直接作底物使用。 • TMB具有无致癌性等优点，因此在ELISA中应用日 趋广泛
免疫酶组化技术原immunohistochemistrytechnique)一以酶标抗体与组织或细胞的抗原进行反应，结合形态学检查，对抗原进行定性、定量或定位检测的技术。该方法主要用于检测组织或细胞表面的抗原。一常用的酶是辣根过氧化物酶（HRP）：选用二氨基联苯胺（DAB）为底物Immunohistochemistry可生成棕褐色沉淀物，使玻片标本上抗原所在部位呈色
• 原理： –以酶标抗体与组织或细胞的抗原进 行反应，结合形态学检查，对抗原 进行定性、定量或定位检测的技术。 该方法主要用于检测组织或细胞表 面的抗原。 –常用的酶是辣根过氧化物酶(HRP)； 选用二氨基联苯胺(DAB)为底物， 可生成棕褐色沉淀物，使玻片标本 上抗原所在部位呈色。 免疫酶组化技术 （immunohistochemistry technique）
（酶联免疫吸附试验）ELISA是固相吸附技术与免疫酶技术的结合，具有特异性高、敏感性强、稳定性好、操作简便等优点，是当前应用最广的一类酶免疫测定法。其中固相免疫技术即将已知的抗原或抗体用物理方法吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相载体表面进行用于检测可溶性的抗原或抗体
是固相吸附技术与免疫酶技术的结合，具有 特异性高、敏感性强、稳定性好、操作简便等优点， 是当前应用最广的一类酶免疫测定法。其中固相免 疫技术即将已知的抗原或抗体用物理方法吸附在固 相载体表面，使抗原抗体反应在固相载体表面进行， 用于检测可溶性的抗原或抗体。 ELISA（酶联免疫吸附试验）
原理与方法间接法竞争法双抗夹心法间接法竞争法双抗体夹心法AbAb包被物Ag酶标物AbAgAb2(抗抗体）待测物Ab1(一抗)多价大分子抗原抗原、半抗原等
间接法 双抗夹心法 竞争法 间接法 双抗体夹心法 竞争法 包被物 Ag Ab Ab 酶标物 Ab2(抗抗体) Ab Ag 待测物 Ab1(一抗) 多价大分子抗原 抗原、半抗原等 原理与方法
1.将抗体包被在固相载体上。酶2.如样品中含有抗原，则结合酶标记抗体为抗原抗体复合物抗体3.再加入酶标记抗体，则结合为抗体-抗原-酶标记抗体复合物。抗原4.酶催化底物并显色。抗体固相载体示意图(HBsAg、HBeAg等)双抗体夹心法
双抗体夹心法（HBsAg、HBeAg等）示意图 固相载体 抗体 抗原 酶 抗体 酶标记抗体 1.将抗体包被在固相载体上。 2.如样品中含有抗原，则结合 为抗原抗体复合物。 3.再加入酶标记抗体，则结合 为抗体-抗原-酶标记抗体复合 物。 4.酶催化底物并显色