第五章小鼠腹水型肝癌淋巴道转移实验研究（一)形态学实验室2026年1月28日
2026年1月28日 1 第五章 小鼠腹水型肝癌淋巴 道转移实验研究（一） 形态学实验室
实验目的1：通过可移植性小鼠腹水癌淋巴道转移实验，从感性上认识肿瘤侵袭与转移的生物学特性，了解肿瘤动物实验模型建立的过程及意义。2.进一步了解抽取腹水、细胞计数、细胞接种的过程。3.加深对学生科研思想的培养及实验技能的训练。2026年1月28日2
2026年1月28日 2 1．通过可移植性小鼠腹水癌淋巴道转移实验，从 感性上认识肿瘤侵袭与转移的生物学特性，了解肿 瘤动物实验模型建立的过程及意义。 2．进一步了解抽取腹水、细胞计数、细胞接种的 过程。 3．加深对学生科研思想的培养及实验技能的训练。 实验目的
实验过程（一）实验材料1.研究对象（1）细胞系：高转移力小鼠腹水型肝癌细胞(Hca-F)，由大连医科大学病理教研室建株并保存。（2）实验动物：近交系615小鼠，雌雄兼用，6~8周龄，体重18-22g，由大连医科大学实验动物中心提供。2026年1月28日3
2026年1月28日 3 实验过程 （一）实验材料 1．研究对象 （1）细胞系： 高转移力小鼠腹水型肝癌细胞 (Hca-F)，由大连医科大学病理教研室建株并保存。 （2）实验动物： 近交系615小鼠，雌雄兼用，6~8 周龄，体重18-22g，由大连医科大学实验动物中心 提供
2.主要试剂及器皿塘瓷盆、温度计、离心管、1ml注射器、手术刀、眼科手术剪、眼科手术镊、乳胶手套、生理盐水、1%来苏儿溶液、75%酒精、棉、10%福尔马林固定液等。2026年1月28日
2026年1月28日 4 2．主要试剂及器皿 搪瓷盆、温度计、离心管、1ml注射器、手术 刀、眼科手术剪、眼科手术镊、乳胶手套、生理 盐水、1%来苏儿溶液、75%酒精、棉、10%福尔 马林固定液等
（二）研究方法1.细胞系获取（示教）从液氮罐中取出高转移力小鼠腹水型肝癌细胞(Hca-F)塑料冻存管，立即放入40℃的温水中，1分钟内使冻存液全部融化，立即送入无菌室中。取出细胞悬液放入离心管中，用生理盐水洗涤两次，离心，弃上清，再加1ml生理盐水吹打均匀。向小鼠腹腔内接种0.2mlHCa-F细胞悬液（约6×106个肿瘤细胞），于第六天无菌条件取腹水。计数细胞，用生理盐水配成密度为2×107个细胞/ML的细胞悬液。52026年1月28日
2026年1月28日 5 （二）研究方法 1．细胞系获取（示教） 从液氮罐中取出高转移力小鼠腹水型肝癌细胞 (Hca-F)塑料冻存管，立即放入40℃的温水中，1分钟 内使冻存液全部融化，立即送入无菌室中。取出细胞 悬液放入离心管中，用生理盐水洗涤两次，离心，弃 上清，再加1ml生理盐水吹打均匀。向小鼠腹腔内接 种0.2ml HCa-F细胞悬液（约6×106个肿瘤细胞）， 于第六天无菌条件取腹水。计数细胞，用生理盐水配 成密度为2×107个细胞/ML的细胞悬液
2.615小鼠皮下接种肿瘤细胞（学生操作）取615小鼠癌性腹水0.1ml，内含2×106个活瘤细胞，接种于615小鼠右腋中线皮下。局部严格消毒。注射针头进入皮下（真皮下），若针头能自由拔动无牵阻，注入注射液后形成小泡，则皮下无误。由于皮下组织较松，注射液很快扩散，一定时间小泡可消失。62026年1月28日
2026年1月28日 6 2．615小鼠皮下接种肿瘤细胞（学生操作） 取615小鼠癌性腹水0.1ml，内含2×106个活瘤 细胞，接种于615小鼠右腋中线皮下。局部严格 消毒。注射针头进入皮下（真皮下），若针头 能自由拔动无牵阻，注入注射液后形成小泡， 则皮下无误。由于皮下组织较松，注射液很快 扩散，一定时间小泡可消失
观察指标：定期检查右腋皮下肿瘤生长和同侧腋窝淋巴结及腹股沟淋巴结肿大情况，于接种后21天处死全部小鼠，取皮下瘤体及双侧有关淋巴结称重，同时观察肺、肝、肾等脏器。将上述组织固定于10%福尔马林固定液中，石蜡包理制片HE染色，显微镜检查。2026年1月28日
2026年1月28日 7 观察指标： 定期检查右腋皮下肿瘤生长和同侧腋窝淋巴结及腹股沟 淋巴结肿大情况，于接种后21天处死全部小鼠，取皮下瘤 体及双侧有关淋巴结称重，同时观察肺、肝、肾等脏器。 将上述组织固定于10%福尔马林固定液中，石蜡包埋制片， HE染色，显微镜检查