第2章 微生物的纯培养和显微镜技术 填空题 .个 群 2.纯 3,灭菌任何生物 4.稀释倒平板法涂布平板法平板划线法 5.分类鉴定 6.死十 污 变异 7.低（高） （差 8.放大 反差 分辨率 9.10001500× 10或15 90或100香柏油 10.被长振幅 11。紫外线 12. 光源 真空 荧光屏 照片 13.球状 杆状 螺旋状 14.菌丝体营养菌丝气生菌丝 蘩殖菌丝 15.原生动物 迷择题 (1 (1 1.( 5.(2 6. (2) 7. (3 8. (4) 9.(3) 10.(40 是非题 3 十 6. 11. 十 问答愿 1.培养极端嗜盐菌的培养平板需要添加很高浓度的氯化钠(25%)，实验室环境中的一般微 生物都不能在这种选择培养基上生长，因此在实验过程中即使不采取无菌操作技术，实验结 具仍不余受到昌影响 2.(1)根据选择分离的原理设计不含氨的培养基，在这种培养基上生长的细菌，其氨素应来 自固氮作用 (2》将环境样品（例如士样）稀释涂布到选择平板上，放置于厌氧罐中。对厌氧能采用物理、 化学方法除去氧气，保留氨气。培养后在平板上生长出来的细菌应是厌氧周氮菌或兼性厌氧 固氨菌 (3)挑取一定数量的菌落，对应点种到两块块氮的选择平板上，分别放置于厌氧罐内、外 保温培养。在厌氧罐内外均能生长的为兼性厌氧固氢菌，而在厌氧罐外的平板上不生长，在 厌氧罐内的平板上生长的即为可能的厌氧固氨菌。 ()对分离得到的厌氧固氨菌菌落样品进行系列稀释，涂布于相应的选择平板，重复上述 步骤直到获得厌氧周氨菌的纯培养
3.光学显微镜的分辨率受到光源波长及物镜性能的限制，在使用最短波长的可见光(50m) 作为光源时在油镜下可以达到的最大分辨率为0.18m。由于肉眼的正常分辨能力一般为 02 左右 因此光学显微镜有效的最高总放大倍数只能达到10001500倍。油镜的成大 倍数是100×，因此显微镜配置的日镜通常都是15×，选用更大放大倍数的日镜（如30×） 进一步提高显微镜的放大能力对观察效果的改善并无帮助。 1.()透射电子显微镜的成像原理类似于普通光学显微镜，作为光源的电子束在成像时要穿 透样品。由于电子束的穿诱力有限，因此在进行透射电错观察时要求样品一定要薄。而扫描 电镜的成像原理类似于电视或电传真照片，图像是通过收集样品表面被激发的二次电子形成 的，因此对样品的厚度并无特别的要求 (2)扫描电镜一般被用于观察样品的表面结构，但通过样品制备过程中的冰冻蚀刻技术， 用扫描电镜也可观察到样品的内部结构，获得立体的图像。 (3)透射电镜一般通讨超薄切片技术观察样品的内部结构，但通过样品制备过程中的复型 技术，用透射电镜也可对样品的表面结构进行观察 (1)电子束的穿透能力：电子束的穿透能力是十分有限的，超薄切片是基本的透射电镜实 验技术。相比之下，扫描电镜对样品的大小和厚度没有严格的要求。 (2)生物组织的特点：生物组织的主要成分之一是水，若生物样品不经处理直接放进电销 镜简中的高真空必然会使样品发生严重的脱水现象，失去样品原有的空间构型，所以一般都 不能用镜讲行生物样品的活体观。而日，由干生物样品很突易到破坏在对样品进 固定 干燥、染色及其他 一些处理过程中 也必须随 音 样品尽量保特生活状态下的精 细结构，而不严重失真。另外，在扫描电镜的使用中，除要求样品干燥外，还需要样品具 定的导电能力，以减少样品表面电荷的堆积并得到良好的二次电子信号。而生物样品一般都 是不导电的，所以在制备扫描电镜生物样品时，一般需在其表面镀上一层金属薄膜。 (3》增加样品的反差：显微观察时，只有样品且有一·定的反差，才能得到洁断的图像。光 学显微镜可以通过各种染色技术来增加样品的反差，并得到彩色的样品图像。而在电镜的使 用中，彩色染料是不采用的，因为两种不同的颜色在电镜中是不能区别的 电镜中生物样 不同结构之间反差的取得一殼是用重金属盐染色或喷暖，凡是喜金屑的结构，对电子的散别 与吸收的能力增强，易于形成明暗清晰的电子图像。而且，由于电子图像是靠不同电子密度 形成的亮度差异而构成，所以，电镜得到的电视或照相图像都是黑白的。 6.(1)首先应使用稀释涂布等方法对待检菌株的纯度、群落形态、生理特性等进行检查、确 认 (2)选用正常的新鲜培养基和新鲜培养物进行培养和观察，避免培养过程中一些物理、化 学条件的改变或培养时间过长等因素对细胞形态的影响。 (3)报告细胞大小时应选用多个细胞检测的平均敷，并记录所用的实验方法，包括培养条 件、培养时间、样品制各方法和染色方法第 ()可从大小和形态上对细菌、酵母苗和原生动物进行区分酵母苗、原生动物个体较大 般可用低倍镜观察，酵母苗细胞一般呈卵圆形、园形、圆柱形或柠檬形，不具运动性，原 动物、细胞形态多变，能够运动。相比较而言，细菌细胞一殺较小，需用高倍镜或油镜才能 看清