实验一、植物病害症状 一、目的和要求 通过植物病害症状的观察，学习描述和记载植物病害症状的方法，掌握植物病 害的症状类型、特点以及了解症状在病害诊断中的作用。 二、材料和用具 1.准备下列病害的标本、照片或挂图等： 烟草花叶病黄瓜花叶病马铃薯晚疫病桃细菌性穿孔病 蔬菜幼苗猝倒病菜软腐病 甘薯线虫病 棉花枯、黄菱病 水稻恶苗病 桃缩叶病 马铃薯疮痂病 玉米瘤黑粉病 小麦白粉病 小麦秆锈病 葡萄霜霉病 茄子褐纹病 油菜菌核病麦类麦角病水稻稻曲病 水稻稻瘟病 番茄根结线虫病苋菜白锈病豇豆锈病 油菜菌核 大豆菟丝子 黄瓜根结线虫病水稻白叶枯病番茄条纹病毒病 2、扩大镜、小刀及记载用具： 3、水稻白叶枯病叶、脱脂棉、小烧杯、封口膜。 三、内容与方法 (一)仔细观察并记录陈列的植物病害标本的病状和病征。 1、病状类型： (1)变色 植物受到外来有害因素的影响后，常导致色洋的改变，如褪色、花叶、条点、白 化、色泽变深或变浅等，统称为变色。主要表现有： ①褪绿或黄化褪绿或黄化是由于植物叶绿素的减少而叶片表现为浅绿色或黄色 ②花叶与斑驳花叶是叶片颜色不均匀地变色，且不同变色部分的轮廓是很清楚 的，如烟卓花叶病。如果不同变色部分的轮廓不清楚则称为斑驳。 (2)坏死 坏死是由于病植物组织和细胞的死亡而引起的。主要表现有： ①斑点：根、茎、叶、花、果实的病部局部组织或细胞坏死，产生各种形状、大
小和颜色不同的斑点。 ②枯死：芽、叶、枝、花的局部或大部分组织发生变色、焦枯、死亡。 ③穿孔和落叶落果：在叶片病斑外围的组织形成离层，使病斑从健组织中脱落下 来，形成穿孔：有些植物的花、叶、果等受病后，在叶柄或果梗附近产生离层而 引起过早的落叶、落果等。 ④疮痂：果实、嫩茎、块茎等的病组织局部木栓化，表血粗糙，病部较浅，。 ⑤溃疡：多见于木本植物的枝干、叶片或果实上。病部面积大，中央凹陷，坏死 深入到皮层，周围的寄主细胞有时增生和木栓化。 ⑥猝倒和立枯：大多发生在各种植物的苗期，幼苗的茎基或根冠组织坏死，地上 部菱蕊以致死亡，坏死引起突然倒伏的称为猝倒：坏死而不倒伏的称为立枯。 (3)萎砻 指植物根部或茎部的维管束组织受到侵染而发生的枯菱现象，蒌蔫可以是局部 的也可以是全株性的 (4)腐烂 腐烂是较大血积植物组织的分解和破坏的表现，根据症状及失水快慢又分为干 腐和湿腐。 流胶也是腐烂的一种，桃树等木本植物受病菌为害后，内部组织坏死并腐烂分解， 从病部向外流出粘胶状物质。 (5)畸形 由于病组织或细胞的生长受阻或过度增生而造成的形态异常。植物病害的畸形 症状很多，常见的有： ①徒长：植株生长较正常的植株生长高大。 ②矮化、矮缩和从生：矮化是植株各个器官的长度成比例变短或缩小，病株比健 株矮小得多。矮缩则主要是节间缩短茎叶簇生在一起。丛生是枝条或根异常地增 多，导致丛枝或丛根。 ③瘤肿：病部的细胞或组织因受病原物的刺激而增生或增大，呈现出瘤肿。 ④卷叶：叶片卷曲与皱缩，有时病叶变厚、变硬，严重时呈卷筒状。 ⑤蕨叶：叶片发育不良，叶片变成丝状、线状或蕨叶状。双子叶植物受2,4一D
的药害也常变成蕨叶状。 ⑥花变叶：正常的花器变成叶片状结构，使植物不能正常开花结实。 2、病征类型： 粉状物：病原真菌在植物受害部位形成黑色、白色、铁锈色的粉状物。 霉状物：病原真菌在植物受害部位形成白色、褐色、黑色的霉层。 小黑点：病原真菌在植物受害部位形成的黑色小颗粒 菌核：病原真菌在植物受害部位形成大小不同的褐色或黑色颗粒。 锈状物：病原真菌在植物受害部位形成的白色瓷状或褐色铁锈状物。 菌脓：病原细菌在植物受害部位形成的粘波和胶状物，干燥后成膜状。 (二)细菌菌脓的诱导 ①将水稻白叶枯病叶片用酒精棉球表面檫拭消毒后剪成1-2c的小段。 ②在玻璃小烧杯中放入两个用水浸湿的棉球。 ③将小段的病叶片垂直插入烧杯里的棉球中间，使其直立，且相互之间不要靠在 一起。 ④用封口膜将烧杯口封好，并注意使叶片项端不要靠近封口膜。 ⑤将烧杯置于28C培养箱中保湿培养过夜后观察叶片上菌脓出现的情况（注意观 察菌脓的颜色、浑浊度以及有无真菌的菌丝体出现)。 四、实验作业与思考题 1.通过对实验课上陈列标本的观察，选择不同症状类型的病害，扼要描述其症 状特点，填入表1。 表1室内陈列植物病害症状记录 受害植物 病害名称 发病部位 病征 病状 2.观察校园植物上病害发生情况，按下表要求记录5-10种植物病害症状特征
表2校园内植物病害症状调查记录 编号寄主名受害部位 症状描述 病征 病状 3.观察和记录菌脓诱导实验结果。 4.症状和病征在植物病害诊断上有什么作用？ 5.根据水稻白叶枯病菌脓诱导结果，试分析在通过保湿诱导病征来进行病害诊断 时应注意什么问题？ 实验二、真菌一般形态观察和临时玻片制备 一、目的和要求 熟悉不同临时玻片制作方法：通过观察，认识病原真菌的营养体及其变态，认 识真菌的子实体、有性繁殖、无性繁殖产生的各种类型孢子。 二、实验用具 挑针、刀片、木板、酒精灯、火柴、载玻片、盖玻片、纱布、（棉蓝）乳酚油、 二甲苯、显微镜、擦镜纸、吸水纸等。 三、内容与方法 1.临时玻片的制作 临时玻片制作方法很多，如涂、撕、粘、挑和切片等，可以根据病原物的类型 选择使用。 (1)涂抹法：细菌和酵母菌的培养物常用涂抹法制片。将细菌或酵母菌的悬浮液 均匀地涂在洁净的载玻片上，在酒精灯火焰上烘干、固定，再加盖玻片封固。加 盖玻片前还可进行染色处理，使菌体或鞭毛着色而易于观察
(2)撕取法：用小金属镊子仔细撕下病部表皮或表皮毛制成临时玻片。 (3)粘贴法：将塑料胶带纸剪成边长5mm左右的小块（注意胶带上不要印有指 印)，使胶面朝下贴在病部，轻按一下后揭下制成玻片。 (4)挑取法：用挑针从病组织或基物（如培养基）上挑取表面的霉状物、粉状物 或孢子团制成玻片。 (5)组织透明法：将少量病组织材料切成细丝后放在载玻片上，滴加乳酚油后在 酒精灯上徐徐加热至蒸气出现。如此处理数次使组织透明，冷却后加盖玻片进行 镜检。此法可以观察到病原物在寄主内的原有状态。 (6)徒手切片：徒手切片时选取病状典型、病征明显的病组织材料，先在病征明 显处切取病组织小块（边长5一8mm),放在小木块上，用食指轻轻压住，随着 手指慢慢地后退，用刀片的刀尖将压住的病组织小块切成很薄的丝或片，用沾有 浮载剂的挑针或接种针挑取薄而合适的材料放在一干净载玻片上的浮载剂液滴中 央，盖上盖玻片，仔细擦去多余的浮载剂（注意浮载剂过多会使观察物出现晃动 不稳定现象)，即制成一张临时玻片。 浮载剂： 水：溢南、线虫活动、真菌孢子萌发、大小测量 优点：方便 缺点：产生气泡：易干燥 乳酚油：除上述外均可用。 优点：杀菌固定、孢子膨胀复原、组织透明 缺点：不易封固、有毒 取小麦白粉病叶片，分别用上述6种方法制片，观察白粉病菌的分生孢子梗、 分生孢子、菌丝和吸器。并比较每种方法分别适于观察白粉菌的什么形态特征 2.病原真菌的营养体 用挑针挑取平板上培养好的瓜果腐毒病菌(Pythium aphanidermatum)、立 枯丝核菌(Rhizoctonia solani)和链格孢菌(Alternaria sp.)的菌丝体，用蒸馏
水作浮载剂，制临时玻片镜检，观察菌丝有无隔膜？菌丝体直径变化是否明显？ 颜色有无差别？ 2.1真菌营养体的变态 (1)败器：吸器的形态有圆球状、棒状、裂片状、掌状、根状等。观察用撕取 法制片的小麦白粉病菌(Blumeria graminis)吸器形态，注意吸器的形状和在细 胞内的位置。为便于清楚观察，也可以用棉蓝乳酚油作为浮载剂。 (2)假根：是由菌丝分化的根状分枝。挑取甘薯软腐病菌(Rhizopus stolonifer) 平板培养物制片镜检，观察在孢囊梗基部的假根的形态和颜色。 (3)菌核：是菌丝体的菌丝纠结而成的坚同的颗粒状休眠体。观察油菜菌核病菌 (Sclerotium sclerotiorum)的菌核和小麦麦角病菌(Claviceps purpurea)的菌核标 本。比较两种菌核的大小、形状和色泽有何不同？ (4)根状菌索：许多菌丝体平行生长并纠结成绳索状，称为根状菌索。在示范镜 下观察苹果或甘薯紫纹羽病菌(Helicobasidium purpureum)的根状菌索 (5)子座：由菌丝体或由菌丝体和寄主组织共同组成的着生子实体的垫状物。在 子座上形成无性或有性孢子。在显微镜下观察麦角病南(Claviceps purpurea)头 状子座的切片，注意其内部结构与菌核有何区别，或镜检大叶黄杨叶斑病菌或紫 荆叶斑病南(Cercospora sp.)的垫状子座。 3.病原真菌的繁殖体—子实体 3.1无性孢子 (1)游动孢子囊和游动孢子：鞭毛菌亚门真菌的无性繁殖器官是孢子囊。大多 数鞭毛南孢子囊可释放出具鞭毛、在水中能游动的游动孢子，故其孢子囊又称为 游动孢子囊。镜检腐每菌(Pythium sp.)和疫霉菌(Phytophthora sp.)的游动孢子囊 形态，注意孢囊梗与荫丝有无区别。 (2)孢子囊和孢囊孢子：接合菌亚门真菌的无性繁殖器官是孢囊孢子。镜检根霉 菌(Rhizopus spp.)、毛看南(Mucor spp..)、犁头毒菌(Absidia spp.)的孢子 囊、孢囊孢子。 (3)分生孢子：半知南亚门真南和子囊菌的无性世代繁殖时都可产生分生孢子 分生孢子多者生在分生孢子梗上。分生孢子梗有色或无色、散生或聚生，或着生
在分生孢子座、分生孢子盘或分生孢子器内。 采用挑、刮或切片的方法制作临时玻片，观察下列病原菌分生孢子的颜色、分隔： 分生孢子梗的形态、颜色，是否分枝及分枝的类型、着生位置等。 玉米小斑病菌(Bipolaris maydis) 花生黑斑病菌(Cercospora arachidicola》 小麦白粉病菌（无性世代）(Oidium monilioides》 柑桔青霉病菌(Penicillium italicum) 棉花黄菱病菌(Verticillium dahliae) 稻瘟病菌(Pyricularia oryzae) 马铃薯早疫病菌(Alternaria solani) (4)厚壁孢子：又称厚垣孢子。由菌丝中个别细胞膨大、细胞壁加厚而形成的 种厚壁孢子。对不良环境的抓抗能力较强。 挑取棉花枯菱病菌(Fusarium oxysporum)或樟疫霉(Phytophthora cinnarnomi 的培养物制片镜检，观察厚垣孢子的形状、颜色和孢子壁的厚度。 3.2有性孢子 (1)卵孢子：是鞭毛菌亚门真菌产生的有性孢子，常由形态、大小不同的雌、 雄性器官交配形成。卵孢子通常形成于藏卵器内，每个藏卵器内可包含1至多个 卵孢子，其数目因真菌种类不同而异。 挑取疫霉(Phytophthora sp.)的培养物（连同培养基）制片、镜检观察藏卵器的 形态、色洋、壁有无饰纹或光滑：雄器形态及其位置：卵孢子形态、每个藏卵器 内卵孢子的数目、卵孢子是否充满藏卵器 (2)接合孢子：是接合菌亚门真菌产生的有性孢子，由两个形状和大小相似的雌、 雄配子囊结合而成。 挑取根得(Rhizopus sp..)、毛得(Mucor sp.)或犁头霉(Absidia sp.)正、负 菌株在PDA培养基上交配7一10天后的培养物制片、镜检，观察接合孢子的形状、 表面的饰纹、色洋、配囊柄的形状及有无丝状附属物。 (3)子囊孢子：子囊菌亚门真菌的有性孢子，产生在子囊内。子囊孢子有色或无 色、单胞或多胞，具多种形状
采用挑、刮或切片的方法制作临时玻片或直接观察水久玻片，镜检下列病原物 观察子囊孢子的形态、颜色：子囊的形态：子囊果的类型。 桃缩叶病菌(Taphrina deformans) 小麦白粉病菌(Erysiphe graminis) 桑里白粉病菌(Phyllactinia corylea) 小麦赤毒病菌(Gibberella zeae) 苹果树腐烂病菌(Valsa mali) 麦角病菌(Claviceps purpurea） (4)担孢子：担子菌亚门真菌产生的有性孢子。担孢子产生在担子上 观察胶锈菌(Gymnosporangium sp.)冬孢子萌发形成的担子及担孢子的形态。 四、作业与思考题 (1)认识病原真菌菌丝、无性孢子、有性孢子有何意义？ (2)说明针对不同的病征类型在显微镜观察时应采用何种制片方法？ (3)填图，注明图1中各部分的名称。 图1病原真菌子实体形态图（填注各部分名称》 1.鞭毛菌2.接合菌3.子囊菌4.担子菌
实验三、鞭毛菌灭门真菌及其所致病害 、目的和要求 通过实验要求了解鞭毛菌亚门真菌的主要形态特征，学握与植物病害有关重要 属的形态特征、分类依据及所致病害的症状特点，同时学习使用检索表来鉴定病 菌，为分类鉴定打下初步基础。实验分两次完成。 二、材料和用具 1实验材料： 植物病害标本或永久玻片 根肿菌属：芸苔根肿菌(Plasmodiophora brassicae)及病害 粉痂菌属：马铃薯粉痂菌(Spongospora subterranean)及病害 多粘毒属：禾谷多粘每(Polymyxa graminis)及病害 节壶菌属：玉米褐斑病菌(Physoderma maydis)及病者 绵毒属：水稻烂秧绵毒菌(Achlya spp.)及病害 腐霉属：瓜果腐霉南(Pythium aphanidermatum)及病害 疫霉属：致病疫霉(Phytophthora infestans)及病害 指梗霉属：粟白发病菌(Sclerospora graminicola)及病害 单轴霉属：葡萄霜霉病菌(Plasmopara viticola)及病害 假霜霉属：黄瓜霜霉病南(Pseudoperonospora cubensis)及病害 霜霉属：十字花科植物霜霉病菌(Peronospora parasitica)及病害 白锈属：十字花科蔬菜白锈病南(Albugo candida)及病害 2实验用具 显微镜、擦镜纸、浮载剂（蒸馏水或乳酚油）、载玻片、盖玻片、挑针、刀片、 小木块、吸水纸、酒精灯、火柴。 三、内容与方法 1根肿茵纲(Plasmodiophoromycetes) (I)根肿南属(Plasmodiophora)：观察芸蒸根肿病害标本的症状，注意受害植 株的根部是否肿大。镜检芸墓根肿菌永久玻片，观察休眠孢子的分布位置、形态
及有无细胞壁：有病菌侵害和没有病菌侵害植物细胞的大小及内含物。注意区分 原生质团和休眠孢子。 (2)粉痂菌属(Spongospora)：观察马铃薯粉痂病害(S.subterranean)标本 症状。镜检马铃薯粉痂病菌水久切片，观察休眠孢子的分布和形态特征，以及有 病菌的寄主细胞有无明显肿大。 (3)多粘菌属(Polymyxa):观察禾谷多粘菌(P.graminis)引起的小麦病害 症状。用解剖刀或镊子撕取小麦根基皮层，制成临时玻片，镜检。或镜检禾谷多 粘菌的水久玻片，观察病菌休眠孢子及排列特征。 2壶菌纲(Chytridiomycetes》 节壶属(Physoderma)：观察由玉蜀黍节壶菌(P.maydis)为害玉米引起的褐 斑病标本，注意受害部位病斑颜色及特点如何。用针挑取受害病组织内呈黄褐色 粉末状物制成临时玻片，或直接镜检玉蜀黍节壶菌的永久玻片，观察休眠孢子囊 的颜色和形态特征。 3卵菌纲(Oomycetes) 3.1水霉目通常生活于水中或潮湿土壤中，营腐生生活，仅少数与植物病害有 关，如寄生稻苗引起烂秧 (1)水霉属(Saprolegnia)：孢子囊圆筒形或棍棒状，新的孢子囊从老的孢子 囊内的基部长出.游动孢子具明显的两游现象（水稻烂秧水莓菌(S.monilifera)。 观看水看属真南游动孢子两游现象录象。 (2)绵霉属(Achlya)：观察水稻烂秧症状。用镊子取病苗放于盛有浅水的培 养皿中，直接在低倍镜下检查，或用镊子小心撕下病苗上的棉絮状物制成临时玻 片镜检。注意比较游动孢子囊和菌丝的形态有无显著区别？观察孢子囊的层出现 象是属于哪种层出类型？游动孢子释放是迅速离开孢子囊还是在排孢孔口处休 止、聚集？观察是否产生有性器官？仔细观察藏卵器、雄器和卵孢子的形态、雄 器的位置、藏卵器内卵球的数目。 根据所观察到的病原菌形态，并参照水荐属和绵霉属的分类依据，推测你所看到 的病南属于哪个属。 3.3.2霜霉日许多霜霉日真菌是重要的植物病原菌