第四章 种子制备与菌种保藏 • 第一节 种子制备（Inoculum development） 定义：由保藏的菌种开始，经过逐级扩大培养，最后 获得供生产车间发酵罐接种的的足够数量和优质质 量的种子
第四章 种子制备与菌种保藏 • 第一节 种子制备（Inoculum development） 定义：由保藏的菌种开始，经过逐级扩大培养，最后 获得供生产车间发酵罐接种的的足够数量和优质质 量的种子
生产菌种的必备条件： 1 生长快： 2 对环境条件要有比较大的承受能力 3 遗传表现型要稳定，不易退化 4 菌种要纯
生产菌种的必备条件： 1 生长快： 2 对环境条件要有比较大的承受能力 3 遗传表现型要稳定，不易退化 4 菌种要纯
斜面 沙土管 冷干管 液氮管 实验室种子制备 生产现场种子制备 生产种子制备的一般流程 二级斜面 一级斜面 米孢子 母瓶 子瓶 一级种子罐 发酵罐 二级种子罐 三级种子罐 菌种保藏
斜面 沙土管 冷干管 液氮管 实验室种子制备 生产现场种子制备 生产种子制备的一般流程 二级斜面 一级斜面 米孢子 母瓶 子瓶 一级种子罐 发酵罐 二级种子罐 三级种子罐 菌种保藏
• 几个概念 种子罐级数：种子在种子罐中需扩大培养的次数。 发酵级数：种子罐的级数加一。 接种量：放罐的种子罐的培养液体积除以接种后培 养液的体积的百分数。 种龄：生产种子的培养时间
• 几个概念 种子罐级数：种子在种子罐中需扩大培养的次数。 发酵级数：种子罐的级数加一。 接种量：放罐的种子罐的培养液体积除以接种后培 养液的体积的百分数。 种龄：生产种子的培养时间
一 斜面种子的制备 1.斜面种子：在试管或扁瓶内，以琼脂固化的培养基表面 上生长的菌种培养物。 2. 制备流程： 3. 制备过程注意事项 (1) 琼脂要完全浸没在营养液内,用量1.0%-2.5% ( 2) 营养液中最好不含易沉淀的固形物； (3) 装量掌握在斜面顶端不超过试管或扁平长度的2/3； (4) 灭菌后垂直放置至稍冷后再斜放，以减少冷凝水 (5) 微量元素先配制成一定的溶液，用移液管定量加入
一 斜面种子的制备 1.斜面种子：在试管或扁瓶内，以琼脂固化的培养基表面 上生长的菌种培养物。 2. 制备流程： 3. 制备过程注意事项 (1) 琼脂要完全浸没在营养液内,用量1.0%-2.5% ( 2) 营养液中最好不含易沉淀的固形物； (3) 装量掌握在斜面顶端不超过试管或扁平长度的2/3； (4) 灭菌后垂直放置至稍冷后再斜放，以减少冷凝水 (5) 微量元素先配制成一定的溶液，用移液管定量加入
在无菌间超净工作台进行接种操作
在无菌间超净工作台进行接种操作
3. 质量检查 (1) 外观检查 ( 2) 无菌检查 ( 3)摇瓶生产能力检查
3. 质量检查 (1) 外观检查 ( 2) 无菌检查 ( 3)摇瓶生产能力检查
4.影响斜面种子质量的因素 (1)原材料质量，水质，培养基pH， (2)灭菌条件， (3)接种量， (4)培养室温度、湿度、通风、 (5)培养时间， (6)有害气体或挥发物（培养室内不要安紫外灯） (7) 冷藏条件
4.影响斜面种子质量的因素 (1)原材料质量，水质，培养基pH， (2)灭菌条件， (3)接种量， (4)培养室温度、湿度、通风、 (5)培养时间， (6)有害气体或挥发物（培养室内不要安紫外灯） (7) 冷藏条件
二 、米粒种子（米孢子） • 1. 米孢子：将霉菌或放线菌接种到灭菌后的大米或 小米颗粒上，恒温培养一段时间后产生的分生孢子。 • 2 . 米孢子制备工艺流程 • 3. 制备过程注意事项 （1）浸泡时间及加营养液量应掌握在灭菌后米粒熟透 但不粘连； （2）分装量应掌握在平铺后有2-3粒米的厚度 （3）米粒不要碰到瓶塞； （4）培养前期应经常摇动米粒，使微生物在米粒表面 生长均匀，气生菌丝及孢子长成后不再摇动。 （5）保存：冰箱保存；真空干燥保存；10%-20%甘油 浸泡保存
二 、米粒种子（米孢子） • 1. 米孢子：将霉菌或放线菌接种到灭菌后的大米或 小米颗粒上，恒温培养一段时间后产生的分生孢子。 • 2 . 米孢子制备工艺流程 • 3. 制备过程注意事项 （1）浸泡时间及加营养液量应掌握在灭菌后米粒熟透 但不粘连； （2）分装量应掌握在平铺后有2-3粒米的厚度 （3）米粒不要碰到瓶塞； （4）培养前期应经常摇动米粒，使微生物在米粒表面 生长均匀，气生菌丝及孢子长成后不再摇动。 （5）保存：冰箱保存；真空干燥保存；10%-20%甘油 浸泡保存
大米或小米 水洗 沥干 营养液配制 分装 无菌蒸馏水 调节PH 混匀 ↓ 斜面孢子（或米孢子） 接种 孢子悬浮液 ↓ 摇匀 米孢子 米孢子的制备流程