维生素B6测定 1、适用范围 本标准适用于所添加维生素B6的测定。测定范围为 0.08～3.5μg/mL。 2、 原理用水提取，在pH7条件下，用荧光法测定维生素 B6
维生素B6测定 1、适用范围 本标准适用于所添加维生素B6的测定。测定范围为 0.08～3.5μg/mL。 2、 原理用水提取，在pH7条件下，用荧光法测定维生素 B6
维生素B6测定 • 3、 试剂和溶液 • 3.1 pH7缓冲液称取29.3023g磷酸氢二钠（GB 1263） 和3.8115g柠檬酸，于100mL容量瓶中，用煮沸后冷却 的水，溶解并定容至刻度。混匀备用。 • 3.2 维生素B6标准贮备溶液称取40mg（中国药典参照 标准）维生素B6，或复合维生素（中国药典参照标准） B640mg， B1100mg，B250mg（精确至0.0001g）于 100mL容量瓶中，加水溶解定容至刻度，此液1mL含 400μg的维生素B6。 • 3.3 维生素B6标准工作溶液 • 吸取（3.2）贮备液1mL于100mL容量瓶中加水稀释 至刻度，混匀，此液1mL含4μg的维生素B6
维生素B6测定 • 3、 试剂和溶液 • 3.1 pH7缓冲液称取29.3023g磷酸氢二钠（GB 1263） 和3.8115g柠檬酸，于100mL容量瓶中，用煮沸后冷却 的水，溶解并定容至刻度。混匀备用。 • 3.2 维生素B6标准贮备溶液称取40mg（中国药典参照 标准）维生素B6，或复合维生素（中国药典参照标准） B640mg， B1100mg，B250mg（精确至0.0001g）于 100mL容量瓶中，加水溶解定容至刻度，此液1mL含 400μg的维生素B6。 • 3.3 维生素B6标准工作溶液 • 吸取（3.2）贮备液1mL于100mL容量瓶中加水稀释 至刻度，混匀，此液1mL含4μg的维生素B6
维生素B6测定 • 4 仪器设备 • 4.1 荧光分光光度计； • 4.2 分析天平：感量0.0001g。 • 4.3 实验室用器皿 • 容量瓶 1000mL，100mL，50mL，25mL。 • 刻度移液管 10mL，5mL，1mL
维生素B6测定 • 4 仪器设备 • 4.1 荧光分光光度计； • 4.2 分析天平：感量0.0001g。 • 4.3 实验室用器皿 • 容量瓶 1000mL，100mL，50mL，25mL。 • 刻度移液管 10mL，5mL，1mL
维生素B6测定 ⚫5 、分析步骤 ⚫5.1 试样的选取和制备 ⚫选取有代表性的试样，粉碎通过0.28mm孔筛， 用四分法缩减至100g，密封保存，以防试样维 生素B6变化或变质。 ⚫5.2 测定步骤 ⚫5.2.1 维生素B6的提取 ⚫称取试样0.5～2g，（精确至0.0001g）于100mL 容量瓶中，加水溶解后，定容至刻度，振荡1～ 2min，静置待沉清，或离心（400r/min）10min
维生素B6测定 ⚫5 、分析步骤 ⚫5.1 试样的选取和制备 ⚫选取有代表性的试样，粉碎通过0.28mm孔筛， 用四分法缩减至100g，密封保存，以防试样维 生素B6变化或变质。 ⚫5.2 测定步骤 ⚫5.2.1 维生素B6的提取 ⚫称取试样0.5～2g，（精确至0.0001g）于100mL 容量瓶中，加水溶解后，定容至刻度，振荡1～ 2min，静置待沉清，或离心（400r/min）10min
维生素B6测定 ⚫5.2.2 试样的测定 ⚫移取试样的上清液1mL（≤40μgVB6）于25mL容 量瓶中，加入（3.1）pH7缓冲液至刻度，混匀， 用1cm石英比色杯，置入荧光分光光度计内，于 激发波长326nm、发射波长395nm测定其荧光强 度。 ⚫同时做空白试验
维生素B6测定 ⚫5.2.2 试样的测定 ⚫移取试样的上清液1mL（≤40μgVB6）于25mL容 量瓶中，加入（3.1）pH7缓冲液至刻度，混匀， 用1cm石英比色杯，置入荧光分光光度计内，于 激发波长326nm、发射波长395nm测定其荧光强 度。 ⚫同时做空白试验
维生素B6测定 ⚫5.2.3 工作曲线的绘制 ⚫取0.00，0.50，1.00，1.50，2.00，2.50mL维生 素B6标准工作液（3.3）分别于25mL容量瓶中， 加入pH7缓冲液（3.1）至刻度，混匀，用1cm石 英比色杯，置入荧光分光光度计内，于激发波长 326nm、发射波长395nm测定其荧光强度，以荧 光强度为纵坐标，维生素B6量为横坐标，绘制 工作曲线
维生素B6测定 ⚫5.2.3 工作曲线的绘制 ⚫取0.00，0.50，1.00，1.50，2.00，2.50mL维生 素B6标准工作液（3.3）分别于25mL容量瓶中， 加入pH7缓冲液（3.1）至刻度，混匀，用1cm石 英比色杯，置入荧光分光光度计内，于激发波长 326nm、发射波长395nm测定其荧光强度，以荧 光强度为纵坐标，维生素B6量为横坐标，绘制 工作曲线
维生素B6测定 • 6 分析结果计算和表述 • 维生素B6的含量（mg/kg）按下式计算： • VB6（mg/kg）＝M×D/W×（1000/1000）＝ M×D/W • 式中：M──工作曲线上查得维生素B6含量， μg/mL； • W──试样的质量，g； • D──试样的总体积，mL
维生素B6测定 • 6 分析结果计算和表述 • 维生素B6的含量（mg/kg）按下式计算： • VB6（mg/kg）＝M×D/W×（1000/1000）＝ M×D/W • 式中：M──工作曲线上查得维生素B6含量， μg/mL； • W──试样的质量，g； • D──试样的总体积，mL
维生素B6测定 ❖ 7 、允许差 ❖ 7.1 每个试样称取两份平行测定，取算术平均值 为测定结果并保留两位小数。 ❖ 7.2 维生素B6含量少于40mg/kg以下，平行测定 结果相对差值不大于10％，维生素B6含量大于 40mg/kg的平行测定结果相对差值不大于5％
维生素B6测定 ❖ 7 、允许差 ❖ 7.1 每个试样称取两份平行测定，取算术平均值 为测定结果并保留两位小数。 ❖ 7.2 维生素B6含量少于40mg/kg以下，平行测定 结果相对差值不大于10％，维生素B6含量大于 40mg/kg的平行测定结果相对差值不大于5％
维生素B2测定 ◼ 1、适用范围 ◼ 本标准规定了饲料中维生素B2测定方法。 ◼ 本标准适用于维生素B2的测定。待测液中维生素 ◼ B2检测浓度为0.05～0.2μg/mL
维生素B2测定 ◼ 1、适用范围 ◼ 本标准规定了饲料中维生素B2测定方法。 ◼ 本标准适用于维生素B2的测定。待测液中维生素 ◼ B2检测浓度为0.05～0.2μg/mL
维生素B2测定 • 2、方法原理 • 维生素B2（即核黄素C17H20N1O6）在440nm 紫外光激发下产生绿色荧光，在一定浓度范围内 • 其荧光强度与核黄素浓度成正比。用连二亚硫酸 钠还原核黄素成无荧光物质，由还原前后荧光 • 强度之差与内标荧光强度的比值，计算样品核黄 素的含量
维生素B2测定 • 2、方法原理 • 维生素B2（即核黄素C17H20N1O6）在440nm 紫外光激发下产生绿色荧光，在一定浓度范围内 • 其荧光强度与核黄素浓度成正比。用连二亚硫酸 钠还原核黄素成无荧光物质，由还原前后荧光 • 强度之差与内标荧光强度的比值，计算样品核黄 素的含量