1.水浴90℃ 2.槐米称取1g(2楼天平室206，记录m值) 3.请到301领取索氏提取器（三件） 4.每2组合作标准曲线一条，紫外测定103 每组边台领取100ml容量瓶1个 50ml容量瓶1个 25ml容量瓶4个 5ml移液管1个
1.水浴90℃ 2.槐米称取1g(2楼天平室206，记录m值) 3.请到301领取索氏提取器(三件) 4.每2组合作标准曲线一条，紫外测定103 每组边台领取100 ml容量瓶1个 50 ml容量瓶1个 25 ml容量瓶4个 5 ml移液管1个
生药总黄酮的含量测定
生药总黄酮的含量测定
实验目的 掌握生药中黄酮类化合物含量的测定方法。 实验内容 用比色法测定槐米中总黄酮的含量。 ● 标准曲线的制备 ●样品测定
实验内容 实验目的 用比色法测定槐米中总黄酮的含量。 标准曲线的制备 样品测定 掌握生药中黄酮类化合物含量的测定方法
实验材料 槐米为豆科槐属植物槐的干燥花蕾， 主要有效成分为芦丁。苷元为槲皮素。 芦丁是槐米中止血的有效成分。 HO 芦丁 槲皮素
实验材料 槐米为豆科槐属植物槐的干燥花蕾， 主要有效成分为芦丁。苷元为槲皮素。 芦丁是槐米中止血的有效成分。 芦丁 槲皮素
实验原理 ①加入亚硝酸 OH+NaNO,Oxidation 钠：氧化 NaNO2-H'HNO: orange ②加入硝酸铝： +1/3A+HNO Nitrosylation 亚硝基化，络合 反应 2A3 NaOH Quino-structure ③加入氢氧化 钠：吸收峰红移 ，黄色→红色 red Figure 1.The color reaction of flavonoids and chromogenic system (Zhu et al..2009)
实验原理 ① 加入亚硝酸 钠：氧化 ② 加入硝酸铝： 亚硝基化，络合 反应 ③ 加入氢氧化 钠：吸收峰红移 ，黄色 →红色
实验步骤 ·标准曲线的制备 分别精密吸取（移液管）芦丁对照品溶液(C=0.2196mg/mL) 0.0mL 1.0mL 2.0mL 于25mL 加蒸馏水至5%亚硝酸钠溶液 3.0mL 放置6min 容量瓶中 6 mL 1 mL 4.0mL 5.0mL 10%硝酸铝液 4.3%氢氧化钠溶液 加蒸馏水 摇匀，放 放置6min 1 mL 10 mL 至刻度 置15min 以0mL为空白对照液， 以芦丁的质量W(mg) 于500nm处测吸光度(A) 为横坐标，A为纵坐标作 标准曲线，并计算回归方 y=0.4632x+0.0029 程，并写出回归系数r
实验步骤 标准曲线的制备 分别精密吸取(移液管)芦丁对照品溶液(C = 0.2196mg/mL) 0.0 mL 1.0 mL 2.0 mL 3.0 mL 4.0 mL 5.0 mL 于25 mL 加蒸馏水至 5%亚硝酸钠溶液 容量瓶中 6 mL 1 mL 放置6 min 10%硝酸铝液 1 mL 放置6 min 4.3%氢氧化钠溶液 10 mL 加蒸馏水 至刻度 摇匀，放 置15 min 以0 mL为空白对照液， 于500 nm处测吸光度(A) 以芦丁的质量W（mg） 为横坐标，A为纵坐标作 标准曲线，并计算回归方 y=0.4632x+0.0029 r=1 程，并写出回归系数r
移液管的使用 右手的拇指和中指拿住管颈标线以上部位，左手拿洗耳球。 当液面升到标线以上时，移去洗耳球，立即用右手的食指按住管口， 将移液管的下口提出液面，稍稍放松食指使液面下降， 直到液体的弯月面与标线相切时，立即用食指压紧管口，取出移液管。 放液时，移液管保持垂直，管的下口靠在容器内壁，松开食指，使液体 自然地沿容器壁流下（见图b)。 用移液管吸液前需用滤纸把管尖口内外的水吸去，然 后用欲移取的液体洗刷2一3次，以确保所移取液体 的浓度不变 移液管插入液体里不能太深，防止管外壁蘸液体太多： 也不要太浅，防止吸空 液体从移液管里流完后，要等1015秒钟再拿出移 液管。残留在管尖嘴内的一滴液体不能吹入容器里， 因为在标定移液管容积时，已把这一滴液体扣除了
右手的拇指和中指拿住管颈标线以上部位，左手拿洗耳球。 当液面升到标线以上时，移去洗耳球，立即用右手的食指按住管口， 将移液管的下口提出液面，稍稍放松食指使液面下降, 直到液体的弯月面与标线相切时，立即用食指压紧管口，取出移液管。 放液时，移液管保持垂直，管的下口靠在容器内壁，松开食指，使液体 自然地沿容器壁流下(见图b)。 移液管的使用
样品测定 >槐米粗粉约1g 精密称定 用滤纸包住 乙醚除杂 (用万分之一天平，置索氏提取器中 (学生实验省略) 记录m) 甲醇90ml水浴回流90℃ 放冷，提取液转移至 至提取液无色 玻璃珠2-3颗 100ml容量瓶 冷凝水出▣ 冷凝管 甲醇洗涤液并入容量瓶 精密吸取 冷凝水进口 加甲醇至刻度 5.0ml 回流管 导气管 于50ml容量瓶 加水至刻度 岸品滤纸简 摇匀 提取器
槐米粗粉约1 g 精密称定 (用万分之一天平， 记录m) 水浴回流90℃ 至提取液无色 甲醇90 ml 样品测定 用滤纸包住 甲醇洗涤液并入容量瓶 加甲醇至刻度 100 ml容量瓶 精密吸取 5.0 ml 于50 ml容量瓶 加水至刻度 摇匀 放冷，提取液转移至 置索氏提取器中 乙醚除杂 (学生实验省略) 玻璃珠2-3颗
精密吸取 于25mL 加蒸馏水至 5%亚硝酸钠溶液 放置6min 2.0mL 容量瓶中 6 mL 1 mL 10%硝酸铝 4.3%氢氧化钠溶液 加蒸馏水 放置6min 摇匀，放 1 mL 10 mL 至刻度 置15min 于500nm处测 将A代入线形回归方程， 吸光度(A) 计算W,再算槐米中总 黄酮的百分含量
精密吸取 2.0 mL 于25 mL 加蒸馏水至 5%亚硝酸钠溶液 容量瓶中 6 mL 1 mL 放置6 min 10%硝酸铝液 1 mL 放置6 min 4.3%氢氧化钠溶液 10 mL 加蒸馏水 至刻度 摇匀，放 置15 min 于500 nm处测 吸光度(A) 将A代入线形回归方程， 计算W，再算槐米中总 黄酮的百分含量
W×50×100 百分含量 =2 ×100% m×1000 注意： 1溶液精密吸取的需要用移液管，其余的用量筒即可； 2水浴锅的水至少要加到浸没圆底烧瓶的3/4； 3槐米一定要用滤纸包好； 4若加入90ml甲醇后还不能虹吸，可再加入5ml甲醇
百分含量 = W × 50 2 × 100 5 m×1000 ×100% 注意： 1 溶液精密吸取的需要用移液管，其余的用量筒即可； 2 水浴锅的水至少要加到浸没圆底烧瓶的3/4； 3 槐米一定要用滤纸包好； 4 若加入90 ml甲醇后还不能虹吸，可再加入5 ml 甲醇
