教案首页 第14次课 授课时间： 课程名称临床生物化学及检验实验 年级 专业、层次检验本科 授课教师 职称 课型（大、小）小 学时4 授课题目（章、节）血清ALT测定（含标准曲线制作） 基本教材或主要参考书临床检验生物化学实验指导 教学目的与要求： 1掌握氨基酸氨基转移酶活性测定的原理。 2.掌握氨基酸氨基转移酶活性测定的操作方法。 3.熟悉氨基酸氨基转移酶活性测定的临床意义。 大体内容与时间安排，教学方法： 1实验讲解(0.5学时) 2指导学生操作(3学时) 3问题讨论、答疑(0.5学时) 教学重点、难点： 重点：氨基酸氨基转移酶活性测定的原理和作： 难点：氨基酸氨基转移酶活性测定的原理和临床意义。 教研室审阅意见 教研室主任签名 年月日
基本内容 辅助手段和时间 分配 测定原理 血清中丙怎酸氨基转移酸能使丙氨酸和α酮戊二酸之间转橡氨基和酮基，生成 丙酮酸及谷氨酸。丙酮酸与2,4二硝基苯肼反应生成2,4 二硝基苯腙，在碱性 20min 液中呈棕红色，测定520nm处吸光度值 赖氏法测定天冬氨酸氨基转移南 操作： 结合理论课知识讲解 1ALT的测定 实验原理。 加入物(mL) 测定管 对照管 血清 基质液 0.25 0.25 混匀后，37°C,30min 2.4-DNPH 0.2 0.25 血清 0.05 混匀，37°C,20min 0.4mmol/LNaOH 25 2.5 实验分组，按照试剂 混匀，室温放置5min,505nm,蒸馏水调零，测定各管吸光度，测定管吸光盒利用赖氏法测定 度减去对照管吸光度，所得差值，查标准曲线，求得相应的ALT活力单位。 2ALT标准曲线的制作 ALT 2 .1molL磷酸盐缓冲液 0.1 01 0.1 01 2umol/mL丙酮酸标准液 0 0.05 0.1 0.15 0 0.25 基质缓冲液 05 0.45 0.4 035 0.25 2.4-DNPH 0.5 0.5 05 0.5 0.5 0.5 混匀， 37C 20min .4mmol/LNaOH 示范利用Excel软件 相当于卡门单位 28 150 200 室温，10min505nm蒸倍水调零，测定各管吸光度，各管吸光度减去零号管吸 制作ALT标准曲线。 光度，所得差值为纵坐标，相应卡门单位为横坐标作图(EXCEL)。 注意事项： 120 min 方法学评价： 指导学生操作 实验操作 问题讨论、答疑 20min
1.氨基酸氨基转移酶活性测定的原理。 2.氨基酸氨基转移酶活性测定的操作方法。 3.氨基酸氨基转移酶活性测定的临床意义。 小结 思考题： 复习思 1.氨基酸氨基转移酶活性测定的方法有哪些？ 考题、 2氨基酸氨基转移酶活性测定的临床意义。 作业题 下次课 实施 况及 分