第五章 鱼精的利用 自鱼精中提取DNA-Na 鱼精蛋白
第五章 鱼精的利用 自鱼精中提取DNA-Na 鱼精蛋白
一、自鱼精中提取DNA-Na （一）、概述 DNA及其钠盐（DNA-Na）是遗传工程研究的 重要材料，也是常用的生化试剂和医药制品的 原料。由DNA降解而成的5′—脱氧核甘酸，在 遗传工程上可用来合成一级结构模拟药物，在 临床上能控制一些贵遗传复制失调的疾病；在 医药学上，可作为类抗病毒物，能起到调节细 胞功能，对治疗急慢性肝炎、肾炎、肌肉萎缩、 心血压计管病、血小板减少症和白血球减少症 均有一定疗效；还可作为一类抗癌新药畏助应 用于临床
一、自鱼精中提取DNA-Na （一）、概述 DNA及其钠盐（DNA-Na）是遗传工程研究的 重要材料，也是常用的生化试剂和医药制品的 原料。由DNA降解而成的5′—脱氧核甘酸，在 遗传工程上可用来合成一级结构模拟药物，在 临床上能控制一些贵遗传复制失调的疾病；在 医药学上，可作为类抗病毒物，能起到调节细 胞功能，对治疗急慢性肝炎、肾炎、肌肉萎缩、 心血压计管病、血小板减少症和白血球减少症 均有一定疗效；还可作为一类抗癌新药畏助应 用于临床
DNA的制备历史： ◼ 在五十年代是Zamenhoff等用不同方法从生产 牛肉膏的下脚料小牛胸腺中提取的，后来牛肉 膏被蛋白胨取而代之。 ◼ 人们开始不断地探寻新的生产原料和方法。/国 外亲从各种微生物中分离制取过DNA，但由于 原料来源不便，未能广泛采用。 ◼ 1972年德国专利报告了鲱鱼精巢DNA的制备
DNA的制备历史： ◼ 在五十年代是Zamenhoff等用不同方法从生产 牛肉膏的下脚料小牛胸腺中提取的，后来牛肉 膏被蛋白胨取而代之。 ◼ 人们开始不断地探寻新的生产原料和方法。/国 外亲从各种微生物中分离制取过DNA，但由于 原料来源不便，未能广泛采用。 ◼ 1972年德国专利报告了鲱鱼精巢DNA的制备
◼ 在我国，早在1958年，中国科学院、上 海鱼品厂等就以黄鱼精巢为原料制取了 DNA-Na。80年代前后，浙江水产学院分 别由鲐鱼、蓝圆鲹、大黄鱼和马面的精 巢中提取了DNA-Na，并对其制备工艺进 行了成功的筛选研究
◼ 在我国，早在1958年，中国科学院、上 海鱼品厂等就以黄鱼精巢为原料制取了 DNA-Na。80年代前后，浙江水产学院分 别由鲐鱼、蓝圆鲹、大黄鱼和马面的精 巢中提取了DNA-Na，并对其制备工艺进 行了成功的筛选研究
（二）、原料 制备DNA的原料应该符合下列几个条件： ◼ 1、DNA含量高而且不源方便； ◼ 2、原料内活性去氧化核糖核酸酶的含量 应该低，否则在原料贮藏及制备过程中， 引起DNA的解聚作用； ◼ 3、原料中其它杂质，如RNA、杂蛋白质 及碳水化合物等含量要少，否则使提纯 过程延长；
（二）、原料 制备DNA的原料应该符合下列几个条件： ◼ 1、DNA含量高而且不源方便； ◼ 2、原料内活性去氧化核糖核酸酶的含量 应该低，否则在原料贮藏及制备过程中， 引起DNA的解聚作用； ◼ 3、原料中其它杂质，如RNA、杂蛋白质 及碳水化合物等含量要少，否则使提纯 过程延长；
◼ 4、DNA与蛋白质之间的结合强度应该是较弱 的，否则难以分离DNA与蛋白质，在用变性剂 去蛋白质时，往往要重复多次主能把蛋白除尽。 多年来的实践证明，除了犊牛胸腺外，水产品 中，淡水鱼，鱼等精巢均是较理想的原料，其 次为蓝圆、大黄鱼和马面鱼精巢。 ◼ 根据上面四个原则，很自然地提出了对原料新 鲜度的要求，因为新鲜的才不会被解聚。而要 想达到DNA含量高的要求，则必须在适当的生 长时期采集，并且要设法抑制Dnase的解聚活 力
◼ 4、DNA与蛋白质之间的结合强度应该是较弱 的，否则难以分离DNA与蛋白质，在用变性剂 去蛋白质时，往往要重复多次主能把蛋白除尽。 多年来的实践证明，除了犊牛胸腺外，水产品 中，淡水鱼，鱼等精巢均是较理想的原料，其 次为蓝圆、大黄鱼和马面鱼精巢。 ◼ 根据上面四个原则，很自然地提出了对原料新 鲜度的要求，因为新鲜的才不会被解聚。而要 想达到DNA含量高的要求，则必须在适当的生 长时期采集，并且要设法抑制Dnase的解聚活 力
（三）、DNA-Na提取工艺 制取DNA-Na的具体方法很多，但各种方法最根 本的均可归结为下面几步： ◼ 第一步：借机械或化学的历代法把组织的细胞 破坏，并从中分离出纯净的DNA-蛋白质。 ◼ 第二步：以DNA-蛋白质为原烂漫，把它分成 DNA与蛋白质两部分。 ◼ 第三步：把DNA部分由离心分出（离心液）， 并对其重复纯化，去除蛋白质等杂质。 ◼ 第四步：将DNA钠盐干燥
（三）、DNA-Na提取工艺 制取DNA-Na的具体方法很多，但各种方法最根 本的均可归结为下面几步： ◼ 第一步：借机械或化学的历代法把组织的细胞 破坏，并从中分离出纯净的DNA-蛋白质。 ◼ 第二步：以DNA-蛋白质为原烂漫，把它分成 DNA与蛋白质两部分。 ◼ 第三步：把DNA部分由离心分出（离心液）， 并对其重复纯化，去除蛋白质等杂质。 ◼ 第四步：将DNA钠盐干燥
◼ 酚与CHCL3 -5%SDS复合法，是浙江水产 学院在吸取国外各种方法长处的基础上， 经筛选改进而提出的适合工业化生产的 制备工艺，它具有产率高，质量稳定， 操作方便，周期短，成本较低诸优点
◼ 酚与CHCL3 -5%SDS复合法，是浙江水产 学院在吸取国外各种方法长处的基础上， 经筛选改进而提出的适合工业化生产的 制备工艺，它具有产率高，质量稳定， 操作方便，周期短，成本较低诸优点
工艺流程 原料 → 匀浆 → 搅拌→ 酚法变性 → 静置 → 离心或过滤 → 用5%SDS与CHCL3作 第二次变性 → 离心或过滤 → 析出 DNANa纤维 → 洗涤 →真空干燥 → 产品 检验→ 成品及其包装
工艺流程 原料 → 匀浆 → 搅拌→ 酚法变性 → 静置 → 离心或过滤 → 用5%SDS与CHCL3作 第二次变性 → 离心或过滤 → 析出 DNANa纤维 → 洗涤 →真空干燥 → 产品 检验→ 成品及其包装
操作要点： 1、原料处理 对新鱼或冻藏鱼精除去污物 和结缔组织。 2、匀浆 以原料与高盐溶液（2MnaCL- 0.015M柠檬酸三钠溶液）比为1:3加入高 盐液，以12000r/min×1′45″匀浆。 3、第一次变性 以原料与酚饱和溶液比为1： 0.8后加速离心（3200r/min×30′）
操作要点： 1、原料处理 对新鱼或冻藏鱼精除去污物 和结缔组织。 2、匀浆 以原料与高盐溶液（2MnaCL- 0.015M柠檬酸三钠溶液）比为1:3加入高 盐液，以12000r/min×1′45″匀浆。 3、第一次变性 以原料与酚饱和溶液比为1： 0.8后加速离心（3200r/min×30′）