第3章 高数液相色清法 High Performance Liquid Chromatography, HPLO
High Performance Liquid Chromatography, HPLC 第3章 高效液相色谱法
3-1 高数液相色谱法橇述 高效液相色谱与其他仪器相比特点: (1)高压 (2)高速 (3)高效 (4)高灵敏度
高效液相色谱与其他仪器相比特点: (1)高压 (2)高速 (3)高效 (4)高灵敏度 3-1 高效液相色谱法概述
3-2影响液相色谱柱的因素 1.涡流扩散项He He=2xdp dp:固定相平均颗粒直径,)为固定相的 填充不均匀因子。 使用细小的颗粒,填充均匀,可减小涡 流扩散项
3-2 影响液相色谱柱的因素 1. 涡流扩散项He He=2λdp dp:固定相平均颗粒直径,λ为固定相的 填充不均匀因子。 使用细小的颗粒,填充均匀,可减小涡 流扩散项
2.纵向扩散项Hd Hd=CaDm/u 分子在液体中的扩散系数比在气体中小45 个数量级,对色谱峰扩散的影响可忽略。 3.传质阻力项 固定相传质阻力项和流动相传质阻力项 H=(Csd/Ds+Cmdp2/Dm+Csmdp2/Dm)u 是影响柱效能的主要因素,固定相颗粒越 小,H越小
2. 纵向扩散项Hd Hd=CdDm/u 分子在液体中的扩散系数比在气体中小4~5 个数量级,对色谱峰扩散的影响可忽略。 3. 传质阻力项 固定相传质阻力项和流动相传质阻力项 H=(Csdf 2 /Ds+Cmdp 2 /Dm+Csmdp 2 /Dm)u 是影响柱效能的主要因素,固定相颗粒越 小,H越小
H=2d,+9 p D D B H=4+ +Cu 提高液相色谱的分离效率,必须提高柱内 填料装填的均匀性、减小粒度、使用低黏 度的流动相或适当提高柱温以降低流动相 黏度,从而加快传质速率,其中减小粒度 是提高柱效的最有效途径
u D C d D C d D C d u C D H d m 2 Sm p m 2 m p S 2 d m S f 2 p Cu u B H A 提高液相色谱的分离效率,必须提高柱内 填料装填的均匀性、减小粒度、使用低黏 度的流动相或适当提高柱温以降低流动相 黏度,从而加快传质速率,其中减小粒度 是提高柱效的最有效途径
·3-3高效液相色谱法的主要类型 及其分离原理 按分离机理不同分为:液液分配色谱、液固 色谱、离子交换色谱、离子对色谱、离子 对色谱、离子色谱法和空间排阻色谱
• 3-3 高效液相色谱法的主要类型 及其分离原理 按分离机理不同分为:液液分配色谱、液固 色谱、离子交换色谱、离子对色谱、离子 对色谱、离子色谱法和空间排阻色谱
分离系统由两相一固定相和流动相组成 液相色谱的固定相可以是吸附剂、化学键 合固定相(或在惰性载体表面涂上一层液膜)、 离子交换树脂或多孔性凝胶;流动相是各种溶 剂。 根据各组分在固定相及流动相中的吸附能 力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小 的差异进行分离
分离系统由两相—固定相和流动相组成 液相色谱的固定相可以是吸附剂、化学键 合固定相(或在惰性载体表面涂上一层液膜)、 离子交换树脂或多孔性凝胶;流动相是各种溶 剂。 根据各组分在固定相及流动相中的吸附能 力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小 的差异进行分离
液液分配色谱法 在液液色谱中,一个液相作为流动相,而另一 个液相则涂渍在很细惰性载体或硅胶上作为固定 相。流动相与固定相应互不相溶,两者之间应有 一明显的分界面。分配系数(K)或分配比() 小的组分,保留值小,先流出柱
液液分配色谱法 在液液色谱中,一个液相作为流动相,而另一 个液相则涂渍在很细惰性载体或硅胶上作为固定 相。流动相与固定相应互不相溶,两者之间应有 一明显的分界面。分配系数(K)或分配比(k) 小的组分,保留值小,先流出柱
正相液液色谱法Normal phase Chromatography)): 流动相极性小于固定相极性,又称为正相洗脱或 正相冲洗。 极性小的先流出色谱柱,极性大的后流出色谱柱, 适合于分离极性化合物。 反相液液色谱法(Reversed phase Chromatography)): 流动相极性大于固定相极性,又称为反相洗脱或 反相冲洗。 极性小的后流出色谱柱,极性大的先流出色谱柱, 适合于分离芳烃、稠环芳烃及烷烃等化合物
正相液液色谱法(Normal phase Chromatography): 流动相极性小于固定相极性,又称为正相洗脱或 正相冲洗。 极性小的先流出色谱柱,极性大的后流出色谱柱, 适合于分离极性化合物。 反相液液色谱法(Reversed phase Chromatography): 流动相极性大于固定相极性,又称为反相洗脱或 反相冲洗。 极性小的后流出色谱柱,极性大的先流出色谱柱, 适合于分离芳烃、稠环芳烃及烷烃等化合物
正相色谱固定相:硅胶、三氧化铝以及载有醇 基、氨基和氰基的固定相。流动相选用非极性 流动相,如:正已烷或环已烷 正相色谱依据溶剂极性差别达到分离目的。 反相色谱固定相:非极性载体。固定相以硅胶 为基质,将不同疏水基团通过化学键合到硅胶 表面的游离羟基上(如键合C18烷基的非极性 固定相,为C18柱) 大多数有机化合物都存在疏水基团,因此,反 相色谱较为普遍
正相色谱固定相:硅胶、三氧化铝以及载有醇 基、氨基和氰基的固定相。流动相选用非极性 流动相,如:正已烷或环已烷 正相色谱依据溶剂极性差别达到分离目的。 反相色谱固定相:非极性载体。固定相以硅胶 为基质,将不同疏水基团通过化学键合到硅胶 表面的游离羟基上(如键合C18烷基的非极性 固定相,为C18柱) 大多数有机化合物都存在疏水基团,因此,反 相色谱较为普遍