《园艺植物育种学》 设计性实验指导书 汪国平编 华南农业大学
《园艺植物育种学》 设计性实验指导书 汪国平编 华南农业大学
实验名称：番茄青枯病抗性鉴定方法 一、前言 培育抗青枯病品种是南方番茄育种的目标之一，由于抗病性受植株基因型、菌系及环 境条件影响较大，有时从外地引进的抗病品种在本地并不表现抗病性，抗病育种必须立足 于本地进行。学会识别病害的症状，了解发病规律，掌握抗性鉴定的方法是进行番茄抗青 枯病育种的基础。抗病性鉴定多用根接法，由于病害症状表现受环境影响较大，接种时气 低是 长键因素，因而接种应尽量在高温季节进行， 般要求夜间气温不低于20℃，白 天气温在28℃以上。 二、实验目的 本实验通过对不同抗性的番茄材料接种鉴定，掌握抗病性鉴定的实验设计方法，熟悉 接种及记录技术要点，了解不同育种材料的抗性差异，使学生对抗病鉴定的技能得到训练。 三、材料与方法 (一)实验材料 1、番茄材料 抗性不同的番茄材料或品种（高抗材料：湘引791、亚鲜，中抗材料：GA,感病 材料 红玫瑰、Foa-Dade)。上述各材料用营养杯培育成4一5片真叶的壮苗。 2、仪 杯，吸管，载玻片，剪刀，刀片，量简，恒温箱，三角瓶，试管，移液管，培养皿， 玻璃漏斗，玻璃棒等常规仪器和用品。 3、特殊用品 牛肉浸膏、蛋白胨、葡萄糖、琼脂、蒸馏水、70%酒精等。 (二)实验方法 1、观察病者症状 番茄苗期至结果期都可表现症状，初期时顶部叶片菱垂，然后是下部叶片枯萎，中 部叶片反应最迟，病株开始仅在中午萎垂，傍晚恢复，经2~3天即全部死亡，但茎叶仍 呈绿色，故名青枯病 病株根部常变褐腐烂，茎部表皮粗糙并可 生很多 不等的不 定根：切开地面茎可见维管束变成褐色，用手挤压或放于清水中可见浊白色的菌液流出。 2、接种体制备 将纯菌种用划线法在不含氯化三苯四氮唑的TZC培养基上扩大培养，36~48小时后 在培养皿中倒入少量蒸馏水，用无菌毛笔将平板表面菌落洗下用蒸馏 水调配 成108CUmL(预先调配对照液，OD60omm0.3)的细菌悬浮液，并于接种前将其稀释为 1×10?、1×10 CFU/mL,三种浓度都用于接种。 3、田间试验设计 人一组，每组选取均匀一致5种材料的幼苗30株，每10株为一重复，全班混合， 随机区组排列。 4、接种
1 实验名称：番茄青枯病抗性鉴定方法 一、前言 培育抗青枯病品种是南方番茄育种的目标之一，由于抗病性受植株基因型、菌系及环 境条件影响较大，有时从外地引进的抗病品种在本地并不表现抗病性，抗病育种必须立足 于本地进行。学会识别病害的症状，了解发病规律，掌握抗性鉴定的方法是进行番茄抗青 枯病育种的基础。抗病性鉴定多用根接法，由于病害症状表现受环境影响较大，接种时气 温高低是关键因素，因而接种应尽量在高温季节进行，一般要求夜间气温不低于 20℃，白 天气温在 28℃以上。 二、实验目的 本实验通过对不同抗性的番茄材料接种鉴定，掌握抗病性鉴定的实验设计方法，熟悉 接种及记录技术要点，了解不同育种材料的抗性差异，使学生对抗病鉴定的技能得到训练。 三、材料与方法 （一）实验材料 1、番茄材料 抗性不同的番茄材料或品种（高抗材料：湘引 79-1、亚鲜，中抗材料：GA26，感病 材料：红玫瑰、Flora-Dade）。上述各材料用营养杯培育成 4—5 片真叶的壮苗。 2、仪器 烧杯，吸管，载玻片，剪刀，刀片，量筒，恒温箱，三角瓶，试管，移液管，培养皿， 玻璃漏斗，玻璃棒等常规仪器和用品。 3、特殊用品 牛肉浸膏、蛋白胨、葡萄糖、琼脂、蒸馏水、70％酒精等。 （二）实验方法 1、观察病害症状 番茄苗期至结果期都可表现症状，初期时顶部叶片萎垂，然后是下部叶片枯萎，中 部叶片反应最迟，病株开始仅在中午萎垂，傍晚恢复，经 2~3 天即全部死亡，但茎叶仍 呈绿色，故名青枯病。病株根部常变褐腐烂，茎部表皮粗糙并可产生很多长短不等的不 定根；切开地面茎可见维管束变成褐色，用手挤压或放于清水中可见浊白色的菌液流出。 2、接种体制备 将纯菌种用划线法在不含氯化三苯四氮唑的 TZC 培养基上扩大培养，36~48 小时后 在培养皿中倒入少量蒸馏水，用无菌毛笔将平板表面菌落洗下；用蒸馏水或自来水调配 成 108CFU/mL（预先调配对照液，OD600nm=0.3）的细菌悬浮液，并于接种前将其稀释为 1×107、1×106CFU/mL，三种浓度都用于接种。 3、田间试验设计 6 人一组，每组选取均匀一致 5 种材料的幼苗 30 株，每 10 株为一重复，全班混合， 随机区组排列。 4、接种
连根拔起幼苗，轻轻敲打除去所带泥士，每组植株捆绑成扎，然后全班将幼苗根部 同时放到接种液中（用较大容器盛装）约10分钟。幼苗取出后马上移栽田间。 按正常栽培方法进行管理。 5、抗性鉴定 接种后每7天观察一次，共观察5周。各组分别统计各个材料的发病率及按下列 分级标准调查严重度：此外，还要分别调查发病期和整株完全萎蔫所需的天数。 0级：无症状。 1级：1张叶片半萎燕。 3级.2 一3片叶片菱若 5级：除顶端1一2片叶片外，其余叶片均菱。 7级：所有叶片均萎蔫。 9级：叶片和植株枯死。 四、实验结果分析 一)结果分析 将调查结果填入下表，并利用方差分析计算各品种病情指数的差异显著性。 表1番茄青枯病病情指数调查 八项目 各感病级次株数 发病率病情指数抗、感评 株数 013579 (% 品种 1 2 (仁)思考题 1.分析实验结果，说明各材料的抗、感性。 2.比较你与其它小组的结果，分析差异的可能原因，你认为本实验中应注意哪些技术要 点，才能提高实验结果的准确性？
2 连根拔起幼苗，轻轻敲打除去所带泥土，每组植株捆绑成扎，然后全班将幼苗根部 同时放到接种液中（用较大容器盛装）约 10 分钟。幼苗取出后马上移栽田间。 按正常栽培方法进行管理。 5、抗性鉴定 接种后每 7 天观察一次，共观察 5 周。各组分别统计各个材料的发病率及按下列 分级标准调查严重度；此外，还要分别调查发病期和整株完全萎蔫所需的天数。 0 级：无症状。 1 级：l 张叶片半萎蔫。 3 级：2—3 片叶片萎蔫。 5 级：除顶端 1—2 片叶片外，其余叶片均萎蔫。 7 级：所有叶片均萎蔫。 9 级：叶片和植株枯死。 四、实验结果分析 （一）结果分析 将调查结果填入下表，并利用方差分析计算各品种病情指数的差异显著性。 表 1 番茄青枯病病情指数调查 项目 品种 调查总 株数 各感病级次株数 发病率 （％） 病情指数 抗、感评 0 1 3 5 7 9 定 1 2 3 4 5 (二)思考题 1．分析实验结果，说明各材料的抗、感性。 2． 比较你与其它小组的结果，分析差异的可能原因，你认为本实验中应注意哪些技术要 点，才能提高实验结果的准确性？
设计性实验大纲(《园艺植物育种》) 番茄青枯病抗性鉴定方法 实验目的 培育抗青枯病品种是南方番茄育种的目标之一，由于抗病性受植株基因型、菌系及环境 条件影响较大，有时从外地引进的抗病品种在本地并不表现抗病性，抗病育种必须立足于本 地进行。学会识别病害的症状，了解发病规律，掌握抗性鉴定的方法是进行番茄抗青枯病有 种的基础。本实验以番茄青枯病为实例学习园艺植物对细菌性病害抗性的鉴定方法，初步掌 握鉴定技术要点， 使学生进二步 孰采 茄青枯病等发病植株的症状， 不同育种材料的抗 性差异，为抗病育种的试材筛选打下基础，使学生对其抗病鉴定的技能得到训练。 实施方案 1.实验田间准备：选择5个抗性不同的品种或品系，种子经消毒、催芽，播种于营养杯，适 当苗龄时分苗至营养杯，进行正常管理至4-5片真叶：田间接种选择前作为非茄科作物的 地块移栽，接种后的管理同正常。该过程由实验员监督、实验工人负责实施 实验室内准备：准备足够数量的田间物资及实验用显微镜，血球计数板，分光光度计，烧 杯，吸管，载玻片，剪刀，刀片，量简，恒温箱，三角瓶，试管，移液管，培养皿，玻璃 漏斗，玻璃棒等常规仪器和用品：特殊用品：牛肉浸音、蛋白胨、葡萄糖、琼脂、蒸馏水、 70%酒精等。该工作由实验员负责」 实验组织：病害观察及发病规律观察每人1组：病菌分离及接种体制备每6人1组：苗圃 及田间抗病性鉴定每6人1组。该组织工作由实验老师负责，实验员协助 3.实验内容： (1)接种体的制备： (2)田间接种法： (3)病害特征观察 (4)病害调查方法（发病率、严重度） 授课内容由实验老师负责讲授，具体操作有实验老师示范并指导，实验员协助指导。 4.考核方法： (1)田间操作：要求动作准确到位，实验认真仔细，占分50%。 (2)实验报告：要求写作规范、条理清晰、结果客观可信、分析理由充分，占分50%。 考核工作由实验老师及实验员共同完成
3 设计性实验大纲（《园艺植物育种》） 番茄青枯病抗性鉴定方法 一、 实验目的 培育抗青枯病品种是南方番茄育种的目标之一，由于抗病性受植株基因型、菌系及环境 条件影响较大，有时从外地引进的抗病品种在本地并不表现抗病性，抗病育种必须立足于本 地进行。学会识别病害的症状，了解发病规律，掌握抗性鉴定的方法是进行番茄抗青枯病育 种的基础。本实验以番茄青枯病为实例学习园艺植物对细菌性病害抗性的鉴定方法，初步掌 握鉴定技术要点，使学生进一步熟悉番茄青枯病等发病植株的症状，了解不同育种材料的抗 性差异，为抗病育种的试材筛选打下基础，使学生对其抗病鉴定的技能得到训练。 二、 实施方案 1. 实验田间准备：选择 5 个抗性不同的品种或品系，种子经消毒、催芽，播种于营养杯，适 当苗龄时分苗至营养杯，进行正常管理至 4-5 片真叶；田间接种选择前作为非茄科作物的 地块移栽，接种后的管理同正常。该过程由实验员监督、实验工人负责实施。 实验室内准备：准备足够数量的田间物资及实验用显微镜，血球计数板，分光光度计，烧 杯，吸管，载玻片，剪刀，刀片，量筒，恒温箱，三角瓶，试管，移液管，培养皿，玻璃 漏斗，玻璃棒等常规仪器和用品；特殊用品：牛肉浸膏、蛋白胨、葡萄糖、琼脂、蒸馏水、 70％酒精等。该工作由实验员负责。 2. 实验组织：病害观察及发病规律观察每人 1 组；病菌分离及接种体制备每 6 人 1 组；苗圃 及田间抗病性鉴定每 6 人 1 组。该组织工作由实验老师负责，实验员协助。 3. 实验内容： （1） 接种体的制备； （2） 田间接种法； （3） 病害特征观察； （4） 病害调查方法（发病率、严重度）。 授课内容由实验老师负责讲授，具体操作有实验老师示范并指导，实验员协助指导。 4. 考核方法： （1） 田间操作：要求动作准确到位，实验认真仔细，占分 50%。 （2） 实验报告：要求写作规范、条理清晰、结果客观可信、分析理由充分，占分 50%。 考核工作由实验老师及实验员共同完成