《茶叶生物化学》 综合性实验报告 学生班级及人数：2001级茶学22人 指导教师：张灵枝 华南农业大学 园艺学院茶学系 2004年1月
1 《茶叶生物化学》 综 合 性 实 验 报 告 学生班级及人数： 2001 级茶学 22 人 指 导 教 师： 张 灵 枝 华 南 农 业 大 学 园艺学院茶学系 2004 年 1 月
目次 1、《茶叶生物化学》综合性实验指导书 2、综合性实验报告及成绩(22人) 2001级茶学班 序号 姓名 成绩 序号 姓名 成绩 1 程旸 3 沈斌 2 邓远强 14 王贵榕 3 黄创平 15 王民文 4 黄小芳 16 吴洁玲 5 黄雪芳 17 吴丽萍 6 李晓红 18 肖能能 7 利佐邦 19 肖卫勇 卢健 20 杨燕 9 罗谬 21 章世雷 10 罗燕 3 赵亮 11 潘南 12 彭灿荣
2 目 次 1、《茶叶生物化学》综合性实验指导书 2、综合性实验报告及成绩（22 人） 2001 级 茶 学 班 序 号 姓 名 成 绩 序 号 姓 名 成 绩 1 程旸 13 沈斌 2 邓远强 14 王贵榕 3 黄剑平 15 王民文 4 黄小芳 16 吴洁玲 5 黄雪芳 17 吴丽萍 6 李晓红 18 肖能能 7 利佐邦 19 肖卫勇 8 卢健 20 杨燕 9 罗璆 21 章世雷 10 罗燕 22 赵亮 11 潘南 12 彭灿荣
《茶叶生物化学》 综合性实验指导书 张灵枝编 华南农业大学 园艺学院茶学系 2004年1月
3 《茶叶生物化学》 综 合 性 实 验 指 导 书 张 灵 枝 编 华 南 农 业 大 学 园艺学院茶学系 2004 年 1 月
《茶叶生物化学》综合性实验指导书 实验名称：茶叶中功能性成分综合提取与检测 隶属课程：《茶叶生物化学》 课程类别： 专业基础课 预计学时：60学时 指导教师： 张灵枝 授课对象： 茶学专业三年级学生 茶叶生化实验室管理规则 茶叶生化实验室要求认真、准确、细致，所有操作均按一定规程进行。 1、实验前应作好实验准备工作，认真阅读实验指导书和讲义中的有关内容。 2、必须爱护实验材料和仪器设备，按要求正确操作有关仪器。 3、实验完毕后，整理实验台和仪器设备，并把仪器按原数放会原处，清洁 实验室。 4、随时保持实验室的安静与糙洁，注意安全，离开时关好门窗、电源及水 龙头
4 《茶叶生物化学》综合性实验指导书 实验名称： 茶叶中功能性成分综合提取与检测 隶属课程： 《茶叶生物化学》 课程类别： 专业基础课 预计学时： 60 学时 指导教师： 张 灵 枝 授课对象： 茶学专业三年级学生 茶叶生化实验室管理规则 茶叶生化实验室要求认真、准确、细致，所有操作均按一定规程进行。 1、实验前应作好实验准备工作，认真阅读实验指导书和讲义中的有关内容。 2、必须爱护实验材料和仪器设备，按要求正确操作有关仪器。 3、实验完毕后，整理实验台和仪器设备，并把仪器按原数放会原处，清洁 实验室。 4、随时保持实验室的安静与糙洁，注意安全，离开时关好门窗、电源及水 龙头
一、目的要求： 学生通过本实验，综合利用茶叶生物化学、制茶学、饮料工艺学、茶树 栽培学、有机化学、分析化学的知识，较全面地掌握茶叶中多酚类物质等功 能性成份提取和检测，掌握生化实验的萃取、过滤、真空干燥、滴定等基本 操作规范，提取出一定量的功能性成分产品：并运用在在生物化学理论课上 所学的知识深入分析实验中出现的问题，找出解决问题的途径，使学生能学 会发现问题、并正确分析问题，提高学生理论联系实际的能力，对提高学生 综合能力是一个重要的环节。 二、主要材料与仪器设备： 1、主要材料：茶叶、茶鲜叶、多酚类物质产品检测标准样 2、主要仪器设备：蒸青固样设备、高速离心机、天平、水浴锅、砂芯漏 斗、真空泵、真空旋转蒸发器仪、真空干燥箱、滤网、萃取设备、浸 提仪器、 3、主要药品：乙醇、乙酸乙酯、氯仿，ALCL3、NaHCO3、HCL、香荚兰 素、硫酸亚铁、酒石酸钾钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾 4、主要消耗品：各种玻璃器皿、滤纸、PH试纸、蒸馏水等。 三、方式 以学生班为单位，在任课教师和实验员的共同指导下，分组进行实验： 四、实验内容： 1、原料的固定：鲜叶一蒸青固定一烘干 2、茶多酚产品的提取： (1)工艺流程：茶叶原料一浸提一过滤一→沉淀一转溶一萃 取一浓缩一干燥一多酚产品 5
5 一、目的要求： 学生通过本实验，综合利用茶叶生物化学、制茶学、饮料工艺学、茶树 栽培学、有机化学、分析化学的知识，较全面地掌握茶叶中多酚类物质等功 能性成份提取和检测，掌握生化实验的萃取、过滤、真空干燥、滴定等基本 操作规范，提取出一定量的功能性成分产品；并运用在在生物化学理论课上 所学的知识深入分析实验中出现的问题，找出解决问题的途径，使学生能学 会发现问题、并正确分析问题，提高学生理论联系实际的能力，对提高学生 综合能力是一个重要的环节。 二、主要材料与仪器设备： 1、 主要材料：茶叶、茶鲜叶、多酚类物质产品检测标准样 2、 主要仪器设备：蒸青固样设备、高速离心机、天平、水浴锅、砂芯漏 斗、真空泵、真空旋转蒸发器仪、真空干燥箱、滤网、萃取设备、浸 提仪器、 3、 主要药品：乙醇、乙酸乙酯、氯仿，ALCL3、NaHCO3、HCL、香荚兰 素、硫酸亚铁、酒石酸钾钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾 4、 主要消耗品：各种玻璃器皿、滤纸、PH试纸、蒸馏水等。 三、方式 以学生班为单位，在任课教师和实验员的共同指导下，分组进行实验； 四、实验内容： 1、 原料的固定：鲜叶 蒸青固定 烘干 2、 茶多酚产品的提取： （1）工艺流程：茶叶原料 浸提 过滤 沉淀 转溶 萃 取 浓缩 干燥 多酚产品
(2)具体步骤： 萃取法的原理：利用多酚类及其杂质在不同的溶剂中溶 解度不同，分别用溶剂去杂或抽提而得到多酚类粗制品。 萃取法的工艺流程： 茶叶磨碎样加入5倍量30%~95%乙醇，在3540'C环境温度下浸提20i, 浸提过程中搅拌数次。然后过滤，滤渣再用含水乙醇重复浸提一次。两次的 滤液合并，在45C左右减压法定浓缩至乙醇基本除去为止。浓缩液用1倍 量的氯仿分次萃取2次去色素、咖啡碱等杂质。收集含有多酚类的水相，用 1一2倍量的乙酸乙酯分次萃取多酚类。将含有多酚类的乙酸乙酯在45'C左 右减压浓缩去乙酸乙酯，并回收。最后在真空干燥箱中，在70℃左右温度下 干燥即得橙黄色的多酚类租制品。 3、(1)鉴别：取产品配成1%的水溶液。滴加一滴香荚兰素盐酸溶液(1g香 荚兰素溶于100ml浓盐酸溶液中，宜现配现用)，呈樱红色。 (2)茶多酚含量的测定： a:标准曲线的制作：准确吸取不同浓度的没食子酸民酯标准溶液1ml和 酒石酸亚铁试剂5ml,置于一系列25ml的容量瓶中，用PH7.5的缓冲液定 容，用水代替没食子酸作对照，用1cm的比色杯，在540nm处测定吸光值。 所测的吸光度与对应的没食子酸乙酯浓度绘制成标准曲线。 b:供试液的制备和测定： 1)制备：精确称取TP浸膏试样200mg,置于100ml的烧杯中，加入 20一30以上的沸水溶解，冷却，移入100ml的容量瓶中，定容，过 滤，弃去最初的滤液约20ml,所剩滤液为供试液。 6
6 (2)具体步骤： 萃取法的原理：利用多酚类及其杂质在不同的溶剂中溶 解度不同，分别用溶剂去杂或抽提而得到多酚类粗制品。 萃取法的工艺流程： 茶叶磨碎样加入 5 倍量 30％～95％乙醇，在 35-40'C 环境温度下浸提 20in， 浸提过程中搅拌数次。然后过滤，滤渣再用含水乙醇重复浸提一次。两次的 滤液合并，在 45'C 左右减压法定浓缩至乙醇基本除去为止。浓缩液用 1 倍 量的氯仿分次萃取 2 次去色素、咖啡碱等杂质。收集含有多酚类的水相，用 1—2 倍量的乙酸乙酯分次萃取多酚类。将含有多酚类的乙酸乙酯在 45'C 左 右减压浓缩去乙酸乙酯，并回收。最后在真空干燥箱中，在 70℃左右温度下 干燥即得橙黄色的多酚类租制品。 3、（1）鉴别：取产品配成 1%的水溶液。滴加一滴香荚兰素盐酸溶液(1g 香 荚兰素溶于 100ml 浓盐酸溶液中，宜现配现用)，呈樱红色。 (2)茶多酚含量的测定： a：标准曲线的制作：准确吸取不同浓度的没食子酸民酯标准溶液 1ml 和 酒石酸亚铁试剂 5ml，置于一系列 25ml 的容量瓶中，用 PH7.5 的缓冲液定 容，用水代替没食子酸作对照，用 1cm 的比色杯，在 540nm 处测定吸光值。 所测的吸光度与对应的没食子酸乙酯浓度绘制成标准曲线。 b:供试液的制备和测定： 1） 制备：精确称取 TP 浸膏试样 200mg，置于 100ml 的烧杯中，加入 20－30 以上的沸水溶解，冷却，移入 100ml 的容量瓶中，定容，过 滤，弃去最初的滤液约 20ml，所剩滤液为供试液
2)测定：准确吸取供试液1ml,置于25ml容量瓶中，加酒石酸亚铁试 剂5m,充分混匀，用PH7.5的缓冲液定容，用试剂空白作对照， 用1cm的比色杯，在540nm处测定吸光值。 ©：结果计算：根据标准工作曲线，求出相当于试样吸光度的没食子乙酸乙 酯相应的含量，按下式求出茶多酚的含量： 茶多酚(%)=EX15X100 m(1-G) 式中：m=试样质量，mg: G=试样水分，% E=根据试样测得的吸光度(A),从标准曲线上查得的没食子酸乙酯的 相应含量，mg/100 1.5=茶多酚的换算系数。 五、实验要求与作业： (一)要求： 1、每一个学生准备2本实验记录本： 2、实验前认真预习实验内容： 3、实验过程中认真操作，及时总结： (二)作业 1、每个学生独立完成实验报告： 2、每个学生写出一份实验心得：
7 E×1.5×100 m（1-G） 2） 测定：准确吸取供试液 1ml，置于 25ml 容量瓶中，加酒石酸亚铁试 剂 5ml，充分混匀，用 PH7.5 的缓冲液定容，用试剂空白作对照， 用 1cm 的比色杯，在 540nm 处测定吸光值。 c：结果计算：根据标准工作曲线，求出相当于试样吸光度的没食子乙酸乙 酯相应的含量，按下式求出茶多酚的含量： 茶多酚（%）= 式中：m=试样质量，mg； G=试样水分，% E=根据试样测得的吸光度(A)，从标准曲线上查得的没食子酸乙酯的 相应含量，mg/100 1.5=茶多酚的换算系数。 五、实验要求与作业： (一) 要求： 1、 每一个学生准备 2 本实验记录本； 2、 实验前认真预习实验内容； 3、 实验过程中认真操作，及时总结； (二)作业: 1、 每个学生独立完成实验报告； 2、 每个学生写出一份实验心得；
附录1：实验报告书写格式： 茶叶中功能性成分综合提取与检测 学生姓名 华南农业大学园艺学院茶学系×××级×××班 年月日 1、实验目的： 2、实验原理： 3、实验方法与材料：写明样品名称、等级、来源： 4、主要仪器设备和试剂： 5、实验步骤：用操作流程图或设计表格方式书写较好： 8
8 附录 1：实验报告书写格式： 茶叶中功能性成分综合提取与检测 学生姓名 华南农业大学园艺学院茶学系×××级×××班 年 月 日 1、实验目的： 2、实验原理： 3、实验方法与材料：写明样品名称、等级、来源； 4、主要仪器设备和试剂： 5、实验步骤：用操作流程图或设计表格方式书写较好；
6、实验结果：写明实验原始记录和计算公式、计算结果，最好以图表形式书写 7、分析讨论：内容包括对实验结果的分析，对实验过程出现的一些问题的及原 因的分析探讨，对实验方法的认识等。 附录2：实验数据记录表格式： 表1样品含水量测定记录表
9 6、实验结果：写明实验原始记录和计算公式、计算结果，最好以图表形式书写； 7、分析讨论：内容包括对实验结果的分析，对实验过程出现的一些问题的及原 因的分析探讨，对实验方法的认识等。 附录 2：实验数据记录表格式： 表 1 样品含水量测定记录表
表2：多酚类得率记录表： 样品名称 重量(g) 样品名称 烘盒号码 烘盒重(g) 烘盒+样品重(g) 烘前样品重(g) 烘后盒+样重(g) 烘后样品重(g) 样品失重(g) 水分(%) 平均值(%) 含水量(%) 干物重(g) 多酚类(g) 得率(%) 平均值(%) 表3：茶多酚纯度测定表格 样品名称 样品质量(mg)
10 表 2：多酚类得率记录表： 样品名称 重量（g） 含水量（%） 干物重（g） 多酚类（g） 得率（%） 平均值（%） 表 3：茶多酚纯度测定表格： 样品名称 样品质量（mg） 样品名称 烘盒号码 烘盒重（g） 烘盒+样品重（g） 烘前样品重（g） 烘后盒+样重（g） 烘后样品重（g） 样品失重（g） 水分（%） 平均值（%）