新乡医学院教案首页 课程名称 《卫生化学》（实验） 授课题目 荧光分光光度法测定尿中核黄素 授课对象 2014级卫检专业本科生 1.测定尿中核黄素的意义 2分钟 2荧光分光光度法测定核黄素的原理 10分钟 时间分配 3.确定激发光和发射光波长的方法 10分钟 4荧光分光光度计的使用方法 8分钟 5.实验操作 165分钟 总结 1.掌握分光光度法测定核黄素的原理和方法。 课时目标 2.了解荧光分光光度计的基本原理、结构和操作。 授课重点 荧光法测定核黄素的原理以及确定激发光和发射光波长的方法 授课难点 荧光法测定核黄素的原理。 激发光和发射光波长的确定方法。 授课形式 小班实验课教学 授课方法 讲授结合示教、练习 参考文献 《卫生化学》 思考题 加入低亚硫酸钠的作用？
教研室主任及 教研室主任（签字） 课程负责人（签字） 课程负责人签 年月日 年月日 教素续页 讲义内容 教学组织与 教学安排
实验目的： 让学生学罐今光光 度法测横黄素的原 1.掌握分光光度法测定核黄素的原理和方法。 理及方法。 2.了解荧光分光光度计的基本原理、结构和操作。 维生素B2(又叫核黄素，VB2)是橘黄色无臭的针状结晶。其结构 式为： 生的钟要，国履理 论保所学知创。 由于分子中有三个芳香环，具有平面刚性结构，因此它能够发 射荧光。维生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸 性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。 维生素B2溶液在蓝光的照射下，发出绿色荧光。维生素B2在 p=6一7的溶液中荧光强度最大，而且其荧光强度与维生素B2溶 液浓度呈线性关系，因此可以用荧光光谱法测维生素2的含量。维 生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为另一物质 西示老用，和保学 一光黄素，光黄素也是一个能发荧光的物质，其荧光比维生素B2的 生理解。 荧光强得多，故测维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且 在避光条件下进行。 在稀溶液中，荧光强度F与物质的浓度c有以下关系： F=2.303ΦI0ebc 当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度呈线性关系： F=Kc 这是荧光光度法定量分析的依据。 一、激发光谱和荧光发射光谱的绘制 使用核黄素标准溶液，设置发射波长Em=510m,在360-480nm 制家光和 间更换激发光滤光片，记录荧光强度，找出最大激发波长。在最大 黄光发射光语。 激发波长下，450-600nm间更换发射光滤光片，记录荧光强度，找
出最大发射波长。 二、标准溶液及样品的荧光测定 在最大激发波长和最大发射波长下，进行测定。 取尿样1ml加核黄素标液1.5ml,加0.15%硫酸溶液17.5ml于 零摊炎老测定方法 具塞试管内，混匀，测定荧光强度。记下读数(F)后，取10mg低 亚硫酸钠直接加入比色杯内，摇匀，立即测定荧光强度并读数() 取尿样1ml加0.15%硫酸溶液19ml于一具塞试管内，混匀，测 定荧光强度。记下读数Fx)后，取10mg低亚硫酸钠直接加入比色杯 内，摇匀，立即测定荧光强度并读数(F。’)。 三、计算核黄素的含量 零推会量什算方法 注意事项： 1)注意避光： 2)小心使用比色皿
教聚来页 荧光分光光度法基本原理 3. 4.实验中出现的问题 小结 教学后记