新乡医学院实验课教案首页 课程名称 《食品理化检验》 授课教师 高霞 授课题目 米粉中总磷的测定-碳磷钒钼黄分光光度法 授课对象 2012级本科卫生检验专业 1、讲解实验原理及方法 30min 2、样品前处理、工作曲线的绘制及样品的测定 150min 时间分配 3、实验结果的分析、小结 20min 1、掌握磷钒钼黄分光光度法测定磷的原理、样品前处理方法及测 定方法。 课时目标 2、熟悉分光光度计的使用方法 3、了解食品中总磷测定的意义。 授课重点 1、磷钒钼黄分光光度法测定磷的原理 2、样品中总磷测定的样品前处理方法 授课难点 1、样品中总磷的样品前处理； 2、样品的制备 授课形式 小班实验课教学 授课方法 讲授结合示教、练习 参考文献 《食品理化检验》，黎源倩主编，人民卫生出版社，第2版(2015.1) 《卫生检验检疫实验教程：卫生理化检验分册》，高蓉主编 用分光光度法测定总磷还可以选择哪些显色体系？各有何特点？ 思考题 教研室主任（签字） 课程负责人（签字） 教研室主任 及课程负责 人签字 月日 年月日
米粉中总磷的测定 磷钒钼黄分光光度法 磷是地球生命最重要的营养元素之一，是遗传物质的重要组成部 分，广泛存在于自然界水体、沉积物、土壤、动物、植物和微生物体 内。磷可以与蛋白质或脂肪结合成核蛋白、磷蛋白、磷脂等，还有少 量以无机磷化合物的形式存在。 【实验目的】 1、掌握磷钒钼黄分光光度法测定磷的原理、样品前处理方法及测定 方法。 2、熟悉分光光度计工作的原理。 3、了解食品中总磷测定的意义。 【实验原理】 米粉经硝酸高氯酸湿法硝化，其中的磷全部转化为正磷酸盐。在酸 性条件下，正磷酸盐与钼酸铵反应生成黄色络合物，在440m波长 处，测定其吸光度值，根据吸收光强度与磷含量成正比，标准曲线法 定量。 本方法适用于婴幼儿食品和乳品中磷的测定。 【仪器与试剂】 仪器 V5000紫外-可见分光光度计：电热板；三角烧瓶：万分之一天平： 试剂 磷标准应用液(100μg/mL)(由KHPO4标准品配制) 钒钼酸铵试剂：（由钼酸铵和偏钒酸铵反应制备）
二硝基酚指示剂：NaOH溶液(6mol/L;0.lmol/L:HNO3溶液：浓 硫酸、浓硝酸和高氯酸均为优级纯。 【实验步骤】 样品前处理 (1)准确称取米粉试样0.5g于125mL的三角烧瓶中，加入3-5粒 玻璃珠，加入10mL硝酸，在电热板上加热。剧烈反应结束后取下冷 却，再加入10mL高氯酸，继续电热板上加热，直至溶液变成无色或 淡黄色，且瓶口冒白烟。（加入高氯酸时，若消化液变黑，需补加 硝酸5mL) (2)当消化液剩余35mL时，取下并冷却，将消化液定量转移至 50mL的容量瓶中，定容，同时做空白试验。（确保剩余消化液3~5mL; 空白试验即不加样品，直接在三角烧瓶中加入硝酸和高氯酸。) 标准曲线绘制及样品测定 (1)于6个50mL的容量瓶中，依次准确加入磷标液0， 1.00,2.00,3.00,4.00和5.00mL,加入10.00mL钒钼酸铵试剂，以水定 容至刻度，混匀。在室温下显色15min,在440nm处测定吸光度，并 绘制标准曲线，求出线性拟合方程。（如显色时室温低于13℃，可在 20~30℃水浴上显色15min即可。显色时间最好控制在30min以内， 以防发生副反应)。 (2)分别准确吸取10.00mL样品处理液和试剂空白液于50mL的容 量瓶中，加少量的水和2滴2g/L二硝基酚指示剂，先用6mol/LNaOH 调至黄色，再用0.2mol/L硝酸调至无色，最后用0.lmol/L氢氧化钠
调至微黄色，加入10.00mL钒钼酸铵试剂，以水定容至刻度，混匀， 室温下显色15min,测定吸光度值。 (3)将样品和试剂空白的吸光度值分别代入上述线性方程中，计算 样品中磷的含量。 【数据处理】 从线性回归方程中求得的磷的含量代入下述公式，计算米粉中磷 的总量 X=(p-p)x50×50x100 10×m 1000 X—米粉中磷的含量，mg/100g p1一从回归方程中计算出的样品中磷的浓度，gmL po一从回归方程中计算出的空白中磷的浓度，gmL m—样品的质量，g。 计算结果保留三位有效数字。 【注意事项】 1.消化时，不能在电热板上加热的三角烧瓶中补加硝酸。 2.钒钼酸铵试剂配制时，是将钼酸铵溶液缓慢倒入偏钒酸铵溶液中， 有白色沉淀出现时，不能再用。 3.样品和标准测定条件要一致。 4.样品测定时，用6mol/L的NaOH,0.2mo/L的硝酸及0.1mol/L的 NaOH调色过程中，要逐滴滴加，尽量做到一滴变色。 【思考题】