饮料中苯甲酸的测定 -一一一高效液相色谱法 %点击查看源网页
一、实验目的 ·1、掌握高效液相色谱法测定苯甲酸的原理及实验 方法。 ·2、掌握谱析L6000高效液相色谱仪的使用方法。 ■3、熟悉饮料中苯甲酸的样品前处理方法
二、实验原理 ·样品除去二氧化碳和乙醇后，调pH至近中性， 过滤后进高效液相色谱仪，经反相℃18液相 色谱柱分离后，紫外检测器230nm处检测。 根据色谱峰的保留时间定性，利用色谱峰面 积在一定范围内与浓度呈线性关系而进行定 量
三、仪器与试剂 3.1仪器 北京谱析L6000高效液相色谱仪（配紫外检测器，C18反相色 谱柱；滤膜过滤器，0.45μm有机滤膜，超声波提取仪，离 心机 3.2试剂 ·3.2.1苯甲酸（对照品) ■3.2.2甲醇（色谱纯) ·3.2.3苯甲酸的标准储备液(5.0mg/mL)
四、实验步骤 4.1样品处理 (1)称取10g样品，放入小烧杯中，微微加热搅拌除去二 氧化碳和乙醇，用稀氨水调节pH至近中性，倒入50mL 容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，混匀，用微孔滤膜过 滤，滤液备用。 (2)参考色谱条件：C18色谱柱(25cm×0.46cm,5μm); 流动相：甲醇/0.2mol/L醋酸铵溶液(5/95)；流速： 1.0 mL/min,检测波长230nm;进样量：20μL
4.2标准曲线绘制及样品测定 (1)定性分析：根据苯甲酸标准溶液的出峰时间定性分析： (2)标准曲线的配制及测定：取标准溶液1.0,2.0,3.0,4.0， 5.00mL于10mL的容量瓶中，以流动相定容。取20pL进样， 得标准溶液色谱图，以峰面积对浓度进行线性回归，求回归 方程。 (3)样品测定：取20L样品液进样，得样品色谱图，将峰面 积代入回归方程，计算测定液中苯甲酸的浓度
五、数据处理 从线性回归方程中求得的苯甲酸的浓度代入下述公式，计算 饮料中苯甲酸的总量 cXVo P- m×1000 c—标准曲线中查得的相应的苯甲酸的含量 p一样品中被测物的含量，mgg Vo一样品定容体积，ml, m 样品的质量，g。 计算结果保留两位有效数字
六、注意事项 ·1.将被测溶液加热搅拌除去二氧化碳。 ·2.测定需调节溶液pH至近中性，保护仪器且以免影 响苯甲酸测定的保留时间。 ■3，苯甲酸在230nm有较强吸收，因此，选用230nm 作为检测波长。 ■4.定量环20μL,进样量60~100L最佳。 ■5每次进样前洗进样针，实验结束以甲醇清洗进样 口
七、思考题 ·1.实验中流动相过滤和脱气的作用是什么？ ·2.高效液相色谱和气相色谱的进样有何区别