新乡医学院教案首页 课程名称 生物材料检验 授课题目 尿中6-氨基乙酰丙酸的分光光度测定方法 授课对象 本科2013级卫生检验专业 1. 尿中8-ALA测定的临床意义 5分钟 2.乙酸乙酯萃取-对二甲氨基苯甲醛比色法测定8-ALA的原理和方法 15分钟 时间分配 3.学生实验操作 170分钟 4.小结 10分钟 共200分钟 1. 了解尿中6-ALA测定的临床意义。 课时目标 2. 掌握乙酸乙酯萃取-对二甲氨基苯甲醛比色法测定δ-ALA的原理 和方法。 授课重点 乙酸乙酯萃取-对二甲氨基苯甲醛比色法测定6-ALA的原理和方法 授课难点 乙酸乙酯萃取-对二甲氨基苯甲醛比色法测定6-ALA的方法 授课形式 小班实验课 授课方法 板书结合示教 参考文献 WS/T23-1996 GBZ37-2002 金泰度主编《职业卫生与职业医学》人民卫生出版社，第5版，200： 思考题 样空白管的作用是什么？ 教研室主任（签字） 课程负责人（签字） 教研室主任 及课程负责 人签字 月日 年月日
教素续页 教案内容 教学组织与 教学安排 尿中δ-氨基乙酰丙酸的分光光度测定方法 Urine-Determination of-aminoleulinic acid-Spectrophotometric metho (WS/T23一1996) [目的] 所有的试剂由学 1,了解尿中6-ALA测定的临床意义。 生自行配制 2.掌握乙酸乙酯萃取-对二甲氨基苯甲醛比色法测定8-AL,A的原 理和方法。 [临床意义] 学生配制试剂分 为三组，分别配 铅进入机体后，抑制6-氨基-Y-阴戊酸脱水酶(ALAD)和血红 制显色剂、缓冲 素合成酶。ALAD受抑制后，6-氨基-Y酮戊酸形成胆色素受阻，使血 液和标准应用 中ALA增加，由尿中排出。故测定尿中的含量，有助于了解铅吸收和 液，并各自分装 铅中毒的程度。 为6瓶分发6个 实验台。 [原理] 尿中8-ALA与乙酰乙酸乙酯缩合生成咯化合物。此化合物用 所需玻璃仪器由 乙酸乙酯提取，并与显色剂（对-二甲氨基苯甲酷）作用生成红色化 学生自行选择， 合物，在波长554nm处比色定量。 所需要配制试剂 量由学生计算后 [器材打 进行配制。 1.分光光度计，10mm比色杯。 2.具塞比色管，10ml. 3.离心机。 教师准备有配制 4.电炉。 好的试剂，以备 5.聚乙烯塑料瓶，100ML。 不时之需。 6.尿比重计。 [试剂们 本实验所用试剂除另有说明者外，均为分析纯试剂
教素续页 教学组织与 教案内容 教学安排 1.实验用水：为蒸馏水或具有同等纯度的去离子水。 2.冰乙酸，p2=1.05g/ml。 3.高氯酸，p=1.67g/mL 4.无水乙酸钠。 5.对-二甲氨基苯甲醛。 6.乙酰乙酸乙酯。 7.乙酸乙醋。 8.乙酸盐缓冲液(p=4.6):于700m1水中加入57m1冰乙酸，82g无水 乙酸钠，溶解后加水至1,000ml。 9.显色剂：于30ml冰乙酸中加入1g对-二甲氨基苯甲醛，5ml高氣 酸，5m1水，溶解后用冰乙酸稀释至50ml混匀，存于冰箱中 10.6-ALA标准溶液：准确称取0.01280g8-ALA·HC1。用水溶解后， 移入100m1容量瓶中，稀释至刻度，此溶液1ml=0.10mg5-AL。 再用水稀释成1ml=10μg6-ALA的标准应用溶液。 [采样、运输和保存] 用塑料瓶收集铅作业工人尿样50m1,尽快带回实验室（夏季运输 时最好冷羲)，测比重后，放4℃冰箱可保存二周。 [分析步骤] 纸杯代替，采集 1.样品处理 尿样 1.1分别取1m1尿样于2支10ml具塞比色管中，各加1ml水，2m1乙 酸盐缓冲液，混匀，其一为样品管，另一为尿样空白管。 1.2向样品管中加入0.4m1乙酰乙酸乙酯，向空白中加入0.4m1乙酸 盐缓冲液，充分混匀。 用100ml量简来 2.标准曲线的绘制 测量比重 2.1取6支10ml具塞比色管，按下表配制标准管。 比重的温度校正 6-ALA标准管的配制
教素续页 教案内容 教学组织与 教学安排 管号 012345 5-AA标准应用溶液(a)0.00.10.30.50.71.0 水(ml) 2.01.91.71.51.31.0 8-ALA含量（μg) 01.03.05.07.010.0 2.2各管中加入2m1乙酸盐缓冲液，0.4m1乙酰乙酸乙酯，混匀。 2.3于沸水浴中加热12min,取出冷却至室温。 2.4各加入4ml乙酸乙酯，加塞振摇100次，离心5min,静置分层。 2.5各取2ml乙酸乙酯提取液于另6支10ml具塞比色管中，各加2ml 显色剂，混匀，静置10min,在554nm处，用10mm比色杯，以零管为 尿样空白管不加 参比测量吸光度。 乙酰乙酸乙酯是 2.6以吸光度为纵坐标，8-ALA含量为横坐标，绘制标准曲线。 为了扣除尿样的 3.样品测定 背景值，产生背 取1.2制备的样品溶液，按2.3-2.5条操作。测得吸光度后，将 景的原因可能与 样品管的吸光度减去尿空白管的吸光度，从标准曲线上查出样品管中 尿样的黄色有 关。 6-ALA的含量。在测定前后及每次测定10个样品后，测定一次质控样。 [计算] 1.按式(1)计算尿样换算成标准比重(1.020)下的浓度的校正系数 ( 1.020-1.000 k=实E重-100 0 2.按式(2)计算尿中6-ALA的浓度 X=k (2） 式中：X一尿中6-ALA的浓度，mg/1: m一样品管中6-AA含量，μg V一分析时所取尿样的体积，ml
教素续页 教学组织与 教案内容 教学安排 [结果评价] 《职业性慢性铅中毒诊断标准》GBZ37-2002 5.1轻度中毒 5.11血铅≥2.9μmol/L(0.6mgL、600μgL)或尿铅≥0.58u mol/L(0.12mg/L、120μg/L)；且具有下列一项表现者，可诊断 为轻度中毒： a)尿百-氨基-r-酮戊酸≥61.0μmol/L(8mg/L、8000μg/): b)血红细胞游离原卟啉(EP)≥3.56μmol/L(2mgL、2000μg/L): c)红细胞锌原卟啉(ZPP)≥2.91umol/L(13.0μggHb), )有腹部隐痛、腹胀、便秘等症状。 5.1.2诊断性驱铅试验，尿铅≥3.86μmol/L(0.8mgL、800μgL 或4.824mol/24h(1mg24h、10004g24h)者，可诊断为轻度铅 中毒 [说明] 1.本法的检测限为0.30mg/1(取0.5mL尿样)。测定范围：0.30-10.00 mg1。精密度：CV=1.2%~3.6%。准确度：铅接触者的尿样加标回 收率平均89.0%95.7%（加标量：1.0,2.0,3.0,5.0mg/1,n=6) 2.接触者的尿样采集时间不限，采样时不存在污染问题。尿样4℃保 存14d相对偏差为+5.6%。 3.煮沸时间应从比色管放进水浴后，水重新沸腾，开始计算时间， 不得少于12min。 4.尿中6-ALA含量高或颜色较深时，可减少取样量。 5.本法中红色生成物在60min内稳定。 6.乙酰乙酸乙酯如变黄色即不能使用
教紧末页 离心后乙酸乙酯取哪一层？配制缓冲液及显色剂时称量固体试剂的方法有 什么不同？吸取高氯酸时要注意什么？零管、样品空白管的区别是什么？ 为什么有零管了还要有样品空白管？ 小结 教学后记