新乡医学院教案首页 课程名称 生物材料检验 授课题目 尿中肌酐分光光度测定方法 授课对象 本科2012级卫生检验专业 5分钾 情况。 5分钟 3.尿肌酐用于校正被测物浓度的要求和与尿比重校正用于不同的 时间分配 情况 5分 4. 尿中肌酐的含量测定 5A 5. 学生实验操作 175分钟 6.小 5分钟 共200分钟 1.了解尿中肌酐含量测定的意义。 课时目标 2.掌握尿中肌酐分光光度测定的基本原理和方法。 授课重点 分光光度法测定尿中肌酐的操作 授课难点 肌酐的标准曲线绘制 授课形式 小班实验教学 授课方法 板书结合示教 参考文献 教材：《生物材料检验》 国标：《S/T97-1996尿中肌酐分光光度测定方法》 思考题 为什么要绘制肌酐的标准曲线？ 教研室主任 教研室主任（签字） 课程负责人（签字） 及课程负责 人签字 月日 年月日 教案续页
讲义内容 教学组织与 教学安排 尿中肌酐分光光度测定方法 一、实验目的： 介绍本次实验课 1.了解尿中肌酐含量测定的意义 的目的和要求。 2.掌握尿中肌酐分光光度测定的基本原理和方法。 理论知识回顾： 基础知识： 在《绪论》中已经讲过，肌酐(creatinine,Crc)是肌肉在人体 提问：是否记得 内代谢的产物，每20g肌肉代谢可产生1mg肌酐。肌酐主要由肾 绪论中讲过肌酐 的用途？ 小球滤过排出体外。血中肌酐来自外源性和内源性两种，外源性肌 酐是肉类食物在体内代谢后的产物：内源性肌酐是体内肌肉组织代 谢的产物。在肉类食物摄入量稳定时，身体的肌肉代谢又没有大的 变化，肌研的生成就会比较恒定。正常人尿肌酐的日排出量相当稳 定，而且不受食物蛋白质含量和尿量的影响，常用于校正被测物浓 度。用肌研量来表示被测物浓度水平与接触浓度有较好的相关性。 理化性质：分子式(Formula)C,HN,O;分子量(Molecular Weight.):113.1;CAS No..60-27-5;EINECS号200-466-7。白色结 晶。热至约300℃分解。溶于12份水，微溶于乙醇，儿乎不溶于乙 醚、丙酮和氯仿。 分类：肌酥分为血清肌酐(SCr)和尿肌酐(UCr)。 肌酐分类、血肌 血肌酐：正常人的血清肌酐，男54106mol/L:女44-97μmoL: 酐正常值和尿肌 酐参考值。 小儿24.9-69.7moL。 尿肌酐：主要来自血液经过肾小球过滤后随尿液排出的肌蓟 【参考值】8.4-13.25mmo24小时尿或40-130毫克/分升(mg/d) 是正常的。成年男性日排出量为1.0-1.8g,女性为0.7-1.0g,而且 不受食物蛋白质含量和尿量的影响。 尿肌酐系数：24h每千克体重排出的尿肌酐毫克数称为尿肌面 介绍尿肌酐系数 系数。正常人的肌酐系数为：男性18~32，女性10~25。运动员的尿 及正常值
肌酐系数高于常人，一般为25-40。不同项目的运动员尿肌研系数 也不同，进行力量和速度项目训练的运动员肌肉发达，其尿肌酐系 数也高，且尿肌酐的日排出量与运动成绩高度相关。 增高：见于肢端肥大症、巨人症、糖尿病、感染、甲状腺功能 尿肌酐异常的情 减低、进食肉类、运动、摄入药物（如维生素C、左旋多巴、甲基 多巴等)。 减低：见于急性或慢性肾功能不全、重度充血性心力衰竭、甲 状腺功能亢进、贫血、肌营养不良、白血病、素食者，以及服用雄 激素、噻嗪类药等。 用于校正被测物浓度的要求：《绪论》中我们学过，我们用于测 为什么用尿肌酥 来校正被测物浓 定的尿样比重要求在1.010-1.035之间，肌酐浓度在0.3-3.0gL之 度？什么时侯用 间。否则应重新采样。尿样比重校正至标准比重1.020。尿肌酐校正 尿比重校正，什 么时侯用尿肌酐 浓度=原始浓度(mgL)/肌酐浓度(gL)。美国ACGH推荐的生物 讲行校正呢？ 接触指数(BEI)采用肌研校正法，德国生物接触限值(BAT)则采 用比重校正法。二者各有优势，在实际应用时可以根据具体情况酎 情采用。王光祖等研究认为校正由于尿液稀释和浓缩所致的变异， 以比重校正为佳，当过于稀释或浓缩、或同时存在尿糖、尿蛋白时 以肌酐校正为宜。 尿中肌酐含量的测定方法：包括分光光度法（苦味酸法，Ja介绍尿中肌酐含 反应)、反相高效液相色谱测定方法、肌酐酶法等。前二者为卫生行 量的测定方法和 优缺点。 业标准规定方法。基于苦味酸法的肌酐测定试剂盒是临床医院常用 的尿中肌酐检测方法。苦味酸法具有试剂筒单，所用仪器筒单，价 格低廉，但是操作繁琐，效率低下。而后二者操作筒单、快速，但 是需要专用仪器，价格昂贵。 二、实验原理 介绍尿中肌酐测 肌酐与过量苦味酸（淡黄色）在碱性条件下反应生成橙红色苦 定的原理。 味酸肌酐。可见光分光光度计在波长490m处比色测定。 三、仪器和试剂 介绍实验仪器和 1.仪器：V-5000分光光度计（上海元析仪器有限公司），10mm玻 试剂。 璃比色皿 2.试剂：饱和苦味酸溶液(15gL):NaOH溶液(100gL):碱性
饱和苦味酸溶液(NaOH溶液1份+饱和苦味酸溶液上清10份，临 用前配制)：盐酸溶液(0.1molL):标准溶液(0.1mg/mL;10mg/dL 肌酐贮备液用水稀释而成；4℃可保存一个月；肌酐贮备液：1.0 mg/mL,准确称取100mg经110C千燥2h的肌酐，加盐酸溶液使 其溶解，并定容至100mL)。 四、操作步骤 指导学生实险探 L.采样：正常人尿样（随意尿），体积大于20mL,采样后尽快送检 作。 (2h之内)，冷藏运输，4°C可保存2周。 2.样品处理：按表1，取1支10mL比色管标号6，加入0.1mL尿 样，加水至3mlL。 3.试剂空白：按表1，取1支10mL比色管标号7，加水至3mL。 4.肌酐标准管的配制：取6支10mL比色管，标号为0-5，按表2， 向各管中依次加入标准溶液和水。 表1样品处理和试剂空白 管号 6 7 尿样(mL)0.1 0.0 水(mL) 2.9 3.0 用途 样品处理试剂空白 表2肌酐标准管的配制 管号 012345 特别捉醒要自己 计算用于比色测 标准溶液(mL) 0.00.20.40.60.81.0 定溶液中的肌酐 水(mL) 3.02.82.62.42.22.0 浓度，不能照抄 国标。 肌酐浓度(mg/dL)0.00.20.40.60.81.0 5.标准溶液标定和样品测定：向07号比色管中依次加入2.0mL碱 性苦味酸溶液，混匀，于室温下反应20-30mim,加5.0mL水，混 匀，以0号管作为参比，于波长490nm测定1-5号管吸光度；以7 号管作为参比，于波长490m测定6号管吸光度。每管测定3次， 每次取3.0mL测定。30mim内比色完毕
6.标准曲线的绘制：以肌酐标准管驳光度为纵坐标，肌酐含量为横 坐标，绘制标准曲线。 7.样品浓度确定：根据样品吸光度，由标准曲线查得样品中肌酐的 浓度。 五、结果计算 按式(1)计算尿中肌酐的浓度。 介绍结果计算方 法。 式中：C一尿中肌酐的浓度，mgdL: c一由标准曲线上查得的样品中肌酐的浓度，mgdL: f一尿样稀释倍数(f10ml/0.1ml=100)。 1mg/dL Creatinine=88.4 umolL 提醒学生分析讨 论事项。 六、分析与讨论 1.反应随温度、时间、pH及苦味酸纯度而变化，温度在15-20℃显 色稳定，反应温度应控制在小于30℃。苦味酸纯度差时，空白管吸 光度值增高，不利于测定。NaOH浓度对测定值有影响，所以在测 定样品的同时制备标准曲线。 2.哪些因素可能影响尿中肌酐的测定？（体力劳动或剧烈运动） 提醒学生实验中 七、注意事项 的注意事项。 L.尿样易离化，尿量需大于20mL,并应尽快送检(2h),否则加 入防腐剂，4℃运输，冷藏保存。 2.生物材料中可能含有感染性物质，取尿样时应注意自身防护。 3.苦味酸为爆炸品，固体经摩擦、震动，易发生剧烈爆炸。购买的 苦味酸用棕色玻璃瓶装，水封保护，需要存放在阴凉通气的柜橱中 取用时轻拿轻放，避光避热保存。苦味酸能通过吸入、食入和经皮 吸收进入人体，对健康具有一定的危害。取用时按照需求用药品匙。 不要染手，不容易洗掉。更不能入口入眼。 4.使用分光光度计测定吸光度时，注意加入液体为玻璃比色皿体积 的2/3-3/4，不要溢出。不要用手触摸比色皿的光滑、透光一面。用 后洗净，晾干。 5.使用玻璃器皿较多，请大家注意轻拿轻放，不要打碎。如果不慎
打碎，千万注意不要划伤手。 教案末页
1.本实验中苦味酸与肌酐的反应时间要控制好，不能过长，否则显色过深。 2.用于比色的肌酐标准管浓度要认真计算。 小结 教学后记