保健食品中褪黑素的测定 -一一一高效液相色谱法 脑白金
一、实验目的 ·1、掌握高效液相色谱法测定褪黑素的原理、超声 提取样品中褪黑素的方法及定性定量的方法。 ·2、熟悉谱析L6000高效液相色谱仪的使用方法。 ·3、了解保健食品中褪黑素测定的意义及注意事项
二、实验原理 ·样品中的褪黑素经甲醇溶解，稀释过滤后， 上清液注入高效液相色谱仪分离分析，紫外 检测器检测，根据色谱峰的保留时间定性， 外标法定量。 ·方法适用于保健食品中褪黑素的测定
三、仪器与试剂 3.1仪器 北京谱析L6000高效液相色谱仪（配紫外检测器，C18反相色 谱柱；滤膜过滤器，0.45μm有机滤膜，超声波提取仪，离 心机 3.2试剂 ·3.2.1褪黑素（对照品) ■3.2.2甲醇（色谱纯) ■3.2.3冰乙酸溶液(0.2%)吸取1.00mL冰乙酸，稀释至 500mL纯水中 ·3.2.4褪黑素标准应用液（1mgmL)
四、实验步骤 4.1样品处理 (1)用研钵将片剂或胶囊研成粉末并混合均匀。准确称取 0.2g于10mL刻度试管中，加乙醇溶解，用超声波提取仪 提取20min,离心5分钟(3500 r/min),上清液转入25mL 的容量瓶中；残渣加10mL甲醇，超声提取20min,离 心5分钟(3500 r/min),上清液并入25mL的容量瓶中；以 流动相定容，过滤备用(0.45μm的有机系滤膜)。 (2)参考色谱条件：C18色谱柱(25cm×0.46cm,5m; 流动相：甲醇10.2%冰乙酸溶液(50/50)；流速： 1.0 mL/min,检测波长222nm;进样量：20μL
4.2标准曲线绘制及样品测定 (1)定性分析：根据褪黑素标准溶液的出峰时间定性分析： (2)标准曲线的配制及测定：取标准溶液0.10,0.20,0.60， 0.80,1.00mL于10mL的容量瓶中，以流动相定容。取20pL 进样，得标准溶液色谱图，以峰面积对浓度进行线性回归， 求回归方程。 (3)样品测定：取20L样品液进样，得样品色谱图，将峰面 积代入回归方程，计算测定液中褪黑素的浓度
五、数据处理 从线性回归方程中求得的褪黑素的浓度代入下述公式，计算 脑白金中褪黑素的总量 X=P×25 1000×m X一脑白金中褪黑素的含量，mgg P一从回归方程中计算出的样品中褪黑素的浓度， μgmL m—样品的质量，g 计算结果保留两位有效数字
六、注意事项 ■1.为了使褪黑素充分被提取，分别以乙醇和甲醇为 溶剂两次超声波提取，可得到较好的回收率。 ■2.褪黑素在222nm和275nm处均有吸收，若222nm 处背景干扰大，也可选用275nm作为检测波长。 ·3.定量环20μL,进样量60~100μL最佳。 ·4每次进样前洗进样针，实验结束以甲醇清洗进样 口