新乡医学院教案首页 课程名称 预防医学 授课题目 食物中还原型抗坏血酸的测定 授课对象 2012级本科各专业、2014级专升本 1.2,6二氯酚靛酚法测定抗坏血酸的原理和方法 30分钟 2.实验操作 时间分配 85分钟 3.课末小结 5分 合计：120分钟 课时目标 了解食物中抗坏血酸测定的意义： 2. 掌握食物中抗坏血酸测定的基本原理和方法。 授课重点 2,6-二氯酚靛酚法测定抗坏血酸的原理和方法 授课难点 2,6二氯酚靛耐法测定抗坏血酸的原理和方法 授课形式 小班实验课教学 授课方法 板书结合示教 参考文献 《营养与食品卫生学》，第六版 《预防医学实验指导》 思考题 测定食物中还原型抗坏血酸中，以标定过的2,6二氯酚靛酚溶液 滴定溶液至淡红色，为什么必须等到15s颜色不褪为终点？ 教研室主任（签字） 课程负责人（签字） 教研室主任 及课程负责 人签字 月 日 安 月日
实验一 食物中还原型抗坏血酸的测定 实验目的： 1.了解食物中抗坏血酸测定的意义： 2.掌握食物中抗坏血酸测定的基本原理和方法 维生素C是一种水溶性维生素，是人类营养中最重要的维生素之一，人体 缺乏维生素C时会出现坏血病，因此它又被称为抗坏血酸(ascorbic acid)。 抗坏血酸为无色无味的片状晶体，易溶于水，0.5%的水溶液呈强酸性。结晶 抗坏血酸稳定，但其水溶液极易氧化，遇空气、热、光和碱性物质，特别是当氧 化酶及微量铜、铁等重金属离子存在时，可促进其氧化进程。食物中的抗坏血酸 有还原性和氧化型之分，主要以还原型的形式存在。二者可通过氧化还原反应互 变，均具有生物活性。抗坏血酸的理化性质与实验密切相关。 抗坏血酸是一种生物活性很强的物质，在人体内具有多种生理功能：①抗氧 化作用：②作为羟化过程底物和酶的辅助因子；③改善铁、钙和叶酸的利用：④ 促进类固醇的代谢：⑤清除自由基：⑥参与合成神经递质：⑦其他，如增强抵抗 力，缓解重金属及某些药物的毒性等。近年来发现它还有增强机体对肿瘤的抵抗 力，并具有化学致癌物的阻断作用。 维生素C的分布很广，尤其在水果（如弥猴桃、橘子、柠檬、山楂、袖子、 草莓等)和蔬菜（苋菜、芹菜、青椒、菠菜、黄瓜、番茄等）中的含量更为丰 富。不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜 的抗坏血酸含量，所以同一种食物中的抗坏血酸含量也可能不同。测定抗坏血酸 含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。 1,实验原理 新鲜食物中的抗坏血酸主要以还原型的形式存在，测定还原型抗坏血酸可粗 略了解该食物中抗坏血酸浓度的高低。原理是：利用它的强还原性还原染料2， 6-二氯酚靛酚而测定。用标准碘酸钾溶液标定抗坏血酸溶液，然后以标定的抗坏 血酸溶液标定2,6二氯酚靛酚染料溶液，再用此染料滴定样品中的抗坏血酸 2,6二氯酚靛酚在酸性溶液中呈红色，被还原后红色褪去。 当被测溶液中过量1滴染料时又呈现红色，即为滴定终点。在无杂质干扰时， 被测溶液还原染料的量与其中所含抗坏血酸的浓度成正比
还原型抗坏血酸+染料（红色）→脱氢型抗坏血酸+染料（无色） 2.主要仪器 烧杯、组织捣碎机、漏斗、滤纸、容量瓶、锥形烧瓶、吸管。 3.试剂 (1)2%草酸溶液：草酸2g溶于100ml蒸馏水中： (2)1%草酸溶液：草酸1g溶于100ml蒸馏水中： (3)白陶土： (4)0.1000mo/L碘酸钾标准储备液：精密称取干燥的碘酸钾(GR或AR 级)2.1400g,用蒸馏水溶解于100ml容量瓶中并定容至刻度。 (5)0.0010molL碘酸钾标准应用液：取上述标准储备溶液1.0ml用水稀释 至100ml。此液1.0ml相当于抗坏血酸0.088mg。 (6)1%淀粉溶液：称取可溶性淀粉0.5g,加水1滴，搅拌成糊状以后倒入 50ml沸水中。混匀、冷藏待用。 (7)6%碘化钾溶液：称取碘化钾0.6g溶解于10ml蒸馏水中。临用前配制。 (8)抗坏血酸溶液：称取纯抗坏血酸粉末20mg,以1%草酸稀释到100ml 容量瓶中并稀释至刻度，摇匀。冷藏保存。 (9)碳酸氢钠溶液：称取碳酸氢钠40.2mg,溶解在200ml沸水中： (10)2,6-二氯酚靛酚溶液：称取2,6-二氯酚靛酚染料50mg溶解在上述碳 酸氢钠的热溶液中，冷却后放冰箱内过夜，次日过滤在250ml容量瓶中，用蒸馏 水稀释至刻度，摇匀。贮于棕色瓶中，冷藏保存。 4.主要操作步骤 (1)抗坏血酸标准溶液的标定 吸取抗坏血酸溶液2ml于锥形瓶中，加入1%草酸5ml、6%碘化钾溶液0.5 ml,1%淀粉溶液2滴，再以0.0010moL碘酸钾标准液滴定至终点为淡蓝色。 消耗0.0010molL碘酸钾溶液ml数×0.088(mg/ml) 抗坏血酸浓度(mgml)=。 所取抗坏血酸ml数 (2)2,6二氯酚靛酚溶液的标定 吸取已标定过的抗坏血酸溶液5ml及1%草酸溶液5ml于锥形瓶中，以待 标定的2,6-二氯酚靛酚染料滴定至溶液呈淡红色，在15秒内不褪色为止
抗坏血酸浓度(mgml)×抗坏血酸溶液的ml数 1ml染料相当于抗坏血酸mg数= 滴定消耗染料的ml数 (3)样品测定 1)示教：取样品100g稍加切碎后置于捣碎机中，迅速加入100ml的2%草 酸溶液：放入组织捣碎机中制成匀浆： 2)称取（注意天平的调零，左物右码）10g匀浆于小烧杯中，小心地以1% 草酸（少量多次）将样品洗入50ml带塞量筒，稀释至刻度，摇匀，静置20min: 3)加入适量白陶土，振摇数次，使充分脱色： 4)取上层液过滤（实际在取的时候是取中段液，初始滤液的5-10ml不用）。 吸取滤液10ml于锥形瓶中，立即用标定过的2,6二氯酚靛酚溶液滴定至溶液 呈淡红色，15秒内不褪色为终点，记录2,6-二氯酚靛酚的用量。测两次取其平 均值： 过滤的操作方法： ①”一贴"：滤纸折叠的角度要与漏斗的角度一样，叠好后用蒸馏水润湿紧 贴在漏斗内壁上，使滤纸与漏斗内壁之间不残留气泡。 ②"二低"：意思是说滤纸边缘应略低于漏斗的边缘（约5mm):所倒入的 滤液的液面应略低于滤纸的边缘，以免过滤液溢流。 ③"三靠"：是指漏斗颈的下端要靠在承接滤液的烧杯内壁上，要使玻璃棒 靠在滤纸上（折叠后的三层滤纸的层面上），盛过滤液的烧杯口要靠在玻璃棒上。 5)用蒸馏水100ml替代100g样品，作空白滴定，如染料浓度过高，应适当 稀释。 5.结果计算、评价 (V-V2)xT 还原型抗坏血酸(mg100g)= ×100 V,…样品滴定时所用染料ml数（是两次的平均值） Vz空白滴定时所用染料ml数； T-1ml染料相当于抗坏血酸的mg数： W-滴定时所用样品稀释液中含样品的g数
6.注意事项 (1)操作过程要迅速，因还原型抗坏血酸易被氧化，一般不超过2min。2% 草酸有抑制抗坏血酸氧化酶的作用，而1%草酸无此作用； (2)操作使用的滴定管口径细，加液的时候要用滴管缓慢的加，滴定管倾 斜45°，滴管垂直于滴定管缓慢滴加，注意排气泡： (3)染料颜色深，读数的时候读两边值，而不是凹液面，读准确值加一个 估读值： (4)滴定开始时，染料应迅速加入，直至红色不立即消失以后逐滴加入， 并不断振荡，直到粉红色然后消失，然后到淡红色，15s内不褪色为止。样品中 可能有其他杂质也能还原2,6-二氯酚靛酚，但一般杂质还原该染料的速度均较抗 坏血酸慢，所以滴定时以15s红色不褪为终点； (5)测定样品时必须同时作一空白对照，样品溶液滴定的l数须扣除空白 液滴定的ml数。 7.小结 (1)实验报告应包括下列内容：目的、原理、主要步骤（操作要点）、结果 计算及讨论。 (2)思考题：测定食物中还原型抗坏血酸中，以标定过的2,6-二氯酚靛酚 溶液滴定溶液至淡红色，为什么必须等到15s颜色不褪为终点？ (3)下次实验内容：饮用水的净化与消毒