新乡医学院教案首页 课程名称 环境卫生学 授课题目 水中“三氮”的测定一一硝酸盐氮的测定 授课对象 本科2011级预防医学专业 】.介绍水中硝酸盐 5分钟 2.酚二磺酸光度法测定水中的硝酸盐氮 20分钟 时间分配 4.学生实验操作 90分钟 5.小结 5分钟 共120分钟 课时目标 1.熟悉水中“三氨”及其指标的卫生学意义。 2.掌握酚二磺酸光度法测定水中硝酸盐氮的原理及过程。 授课重点 标准曲线的绘制 授课难点 水样中硝酸盐氮的测定 授课形式 小班实验课教学 授课方法 板书结合示教 参考文献 《环境卫生学》 思考题 为什么不同体积的标准溶液使用不同光程的比色皿？？ 教研室主任（签字） 课程负责人（签字） 教研室主任 及课程负责 人签字 年 月日 年月日 教 页
授课内容 教学组织与 教学安排 实习六水中“三氮”一—硝酸盐氮的测定 (酚二磺酸光度法) 实验目的： 1熟悉水中“三氮”及其指标的卫生学意义。 2.掌握酚二磺酸光度法测定水中硝酸盐氮的原理及过程 水中硝酸盐是在有氧环境下，各种形态的含氮化合物中最稳定的氮化合 物，亦是含氨有机物经无机作用最终阶段的分解产物。亚硝酸盐可经氧化而 生成硝酸盐，硝酸盐在无氧环境中，亦可受微生物的作用而还原为亚硝酸盐 水中硝酸盐的测定方法很多，常用的有酚二磺酸光度法、镉柱还原法、离了 色谱法、紫外法和电极法等。其中为国家或行业标准方法（或与标准方法等 效)的是酚二磺酸光度法。 酚二磺酸法测量范围较宽，显色稳定。 水样采集后应及时进行测定。必要时，应加硫酸使pH<2,保存在4℃以 下，在24h内进行测定。 (一)原理 讲授时在黑 硝酸盐在无水情况下与酚二磺酸反应，生成硝基二磺酸酚，在碱性溶液中生板上写出反 成黄色化合物，进行定量测定。 应式 (仁)仪器 1.分光光度计： 2.瓷蒸发皿75~100ml。 (三)试剂 实验用水应为无硝酸盐水。 1.酚二磺酸称取25g苯酚(C6H5OH)置于500ml锥形瓶中，加150ml浓硫 酸使之溶解，再加75ml发烟硫酸[含13%三氧化硫(S03小，充分混合瓶口插 一小漏斗，小心置瓶于沸水浴中加热2h,得淡棕色稠液，贮于棕色瓶中，密 闭保存。 2.氨水。 3.硝酸盐标准贮备液称取0.7218g经105~110℃干燥2小时的硝酸钾 (KNO3)溶于水，移入1000ml容量瓶中，稀释至标线，混匀。加2ml三氯甲 烷作保存剂，至少可稳定6个月。每毫升该标准贮备液含0.100mg硝酸盐氮
4.硝酸标准使用液吸取50.0ml硝酸盐标准贮备液，置蒸发内，加 0.1molL氢氧化钠溶液使调至PH8,在水浴上蒸发至干。加2ml酚二磺酸， 用玻棒研磨蒸发皿内壁，使残渣与试剂充分接触，放置片刻，重复研磨一次， 放置10min,加入少量水，移入500ml容量瓶中，稀释至标线，混匀。贮于 棕色瓶中，此溶液至少稳定6个月。每毫升该标准时用液含0.010mg硝酸盐 氮。 5.硫酸银溶液称取4.397g硫酸银(Ag2S04)溶于水，移至1000ml容量瓶 中，用水稀释至标线。1.00ml此溶液可去除1.00mg氯离子(C-)。 6.氢氧化铝悬浮液氢氧化铝悬浮液溶解125g硫酸铝钾 (KA1(S04)2·12H2O)或硫酸铝铵(NH4A1S04)2·12H2O)于1000ml量筒内 加热至60oC,在不断的搅拌下，徐徐加入55ml浓氨水，放置h后，移入 1000ml量筒内，用水反复洗涤沉淀，最后至洗涤液中不含亚硝酸盐为止。澄 清后，把上清液尽量全部倾出，只留稠的悬浮物，最后加入100ml水，使用 前应振荡均匀。 (四)步骤 1.校准曲线的绘制于一组50ml比色管中，用分度吸管加入硝酸盐氮标准 使用液，加水至约40ml,加3ml氨水使呈碱性，稀释至标线，混匀。在波强调以水为 长410nm处，按下表选比色皿，以水为参比，测量吸光度。 参比，做的为 由测得的吸光度值减去零管的吸光度值，分别绘制不同比色皿光程长的吸光吸光度对硝 度对硝酸盐氮含量(mg)的校准曲线。 酸盐氮含量 标准系列中所用标准使用液体积 (mg)的校准 标准溶液体积(ml) 硝酸盐氮含量(mg) 比色皿光程(mm) 曲线。 0 0 10或30 0.10 0.001 30 0.30 0.003 30 0.50 0.005 30 0.70 0.007 30 1.00 0.010 10或30 3.00 0.030 10 5.00 0.050 10 7.00 0.070 10 10.00 0.100 10
2.水样的测定水样浑浊带色时，可取100ml水样于具塞量筒中，加入2ml 氢氧化铝悬浮液，密闭震摇，静置数分钟后，过滤，弃去20ml初滤液。 氯离子的去除：取100ml水样移入具塞量筒中，根据已测定的氯离子含量， 加入相当量的硫酸银溶液，充分混合。在暗处放置0.5h,使氯化银沉淀凝聚 然后用慢速滤纸过滤，弃去20ml初滤液。 注：(1)如不能获得澄清滤液，可将已加疏酸银溶液的试样，在近80℃的水 水样采集以 浴中加热，并用力振摇，使沉淀充分凝聚，冷却后再进行过滤。 及处理工作 (②）如同时需去除带色物质，则可再加入疏酸银溶液并混匀后，再加入2m1实验前老师 氢氧化铝悬浮液，充分震摇，放置片刻待沉淀后，过滤。 做好，筒单谈 亚硝酸盐的干扰：当亚硝酸盐氮的含量超过0.2mg/L时，可取100ml水样， 及即可。 加1ml0.5mol/L硫酸，混匀后，滴加高锰酸钾溶液至淡红色保持15min不褪 为止，使亚硝酸盐氧化为硝酸盐，最后从硝酸盐氮测定结果中减去亚硝酸盐 氮量。 测定：取S0.0ml经预处理的水样于蒸发皿中，用PH试纸检查，必要时用 0.5moL硫酸或0.1moL氢氧化钠溶液调节至微碱性(PH8),置水浴上蒸发 至干，加1.0ml酚二磺酸，用玻璃棒研磨，使试剂与蒸发皿内残渣充分接触， 放置片刻，再研磨一次，放置10min,加水约10ml. 再搅拌下加入3~4ml氨水，使溶液呈现最深的颜色。如有沉淀，，则过滤。 将溶液移入50ml比色皿l中，稀释至标线，混匀。于波长410nm处，选用10mm 或30mm比色皿l,以水为参比，测量吸光度。 注：如吸光度值超出校准曲线范围，可将显色溶液用水进行定量稀释，然后 再测量吸光度，计算时乘以稀释倍数。 3.空白试验以水代替水样，按相同步骤，进行全程序空白测定 (五)计算 式中：m-从校准曲线上查得的硝酸盐氮量(mg) V-分取水样体积(ml)。 (六)干扰 水中含氯化物、亚硝酸盐、铵盐、有机物和碳酸盐时，可产生干扰。含此类 物质时，应作适当的前处理。 (七)适用范围 本法适用于测定饮用水、地下水和清洁地面水中的硝酸盐氮。最低检出浓度 为0.02mg/L:测定上限为2.01mg/L
