新乡医学院教案首页 课程名称 职业卫生与职业医学 授课题目 实验二尿中6-氨基乙酰丙酸的分光光度测定方法 授课对象 本科2011级预防医学专业 尿中6-ALA测定的临床意义 5分钟 2.乙酸乙酯萃取-对二甲氨基苯甲醛比色法测定8-ALA的原理和方法 时间分配 20分钟 3.学生实验操作 90分钟 4.小结 5分钟 共120分钟 ,了解尿中6-ALA测定的临床意义。 课时目标 2.掌握乙酸乙酯萃取-对二甲氨基苯甲醛比色法测定6-A的原理和 方法。 授课重点 酸乙酯萃取-对二甲氨基苯甲醛比色法测定6-ALA的原理和方法 授课难点 乙酸乙酯苯取-对二甲氨基苯甲醛比色法测定6-ALA的方法 授课形式 小班实验课 授课方法 板书结合示教 WST23-1996 GBZ37-2002 参考文献 金泰主编《职业卫生与职业医学》人民卫生出版社，第5版，2003 思考题 尿样空白管的作用是什么？ 教研室主任（签字） 课程负责人（签字） 教研室主任 及课程负责 人签字 年 月日 年月日
教素续页 教学组织与 教案内容 教学安排 实验二尿中δ-氨基乙酰丙酸的分光光度测定方法 Urin-Determination ofmno-Spectrophotomericmethod WS/T23-1996) [目的] 1,了解尿中6-ALA测定的临床意义。 2.掌握乙酸乙酯萃取-对二甲氨基苯甲醛比色法测定6-ALA的原 理和方法。 [临床意义] 铅进入机体后，抑制6-氨基-Y-酮戊酸脱水酶(ALAD)和血红 素合成酶。ALAD受抑制后，5-氨基-Y酮戊酸形成胆色素受阻，使血 中ALA增加，由尿中排出。故测定尿中的含量，有助于了解铅吸收和 铅中毒的程度。 [原理] 尿中6-LA与乙酰乙酸乙酯缩合生成北咯化合物。此化合物用 乙酸乙酯提取，并与显色剂（对-二甲氨基苯甲醛）作用生成红色化 合物，在波长554nm处比色定量。 [器材打 1.分光光度计，10m比色杯 2.具塞比色管，10ml. 3.离心机。 4.电炉。 5.聚乙烯塑料瓶，100ML。 6.尿比重计。 [试剂们 本实验所用试剂除另有说明者外，均为分析纯试剂
教素续页 教案内容 教学组织与 教学安排 1.实验用水：为蒸馏水或具有同等纯度的去离子水。 2.冰乙酸，p0=1.05g/ml。 3.高氯酸，p=1.67g/ml 4.无水乙酸钠。 5.对-二甲氨基苯甲醛。 6.乙酰乙酸乙酯」 7.乙酸乙醋。 8.乙酸盐缓冲液(pH4.6):于700m1水中加入57m1冰乙酸，82g无水 乙酸钠，溶解后加水至1,000ml。 9.显色剂：于30ml冰乙酸中加入1g对-二甲氨基苯甲醛，5ml高氯 酸，5ml水，溶解后用冰乙酸稀释至50ml混匀，存于冰箱中。 10.6-ALA标准溶液：准确称取0.01280g8-ALA·HC1。用水溶解后， 移入100ml容量瓶中，稀释至刻度，此溶液1ml=0.10mg5-AA。 再用水稀释成1ml=I0μg6-ALA的标准应用溶液。 11.质控样：标准尿样、加标的模拟尿、加标的正常人混合尿或接触者 的混合尿。 [采样、运输和保存] 用塑料瓶收集铅作业工人尿样50m1,尽快带回实验室（夏季运输 时最好冷藏)，测比重后，放4℃冰箱可保存二周。 [分析步骤] 尿样空白管不加 1.样品处理 乙酰乙酸乙酯是 1.1分别取1ml尿样于2支10ml具塞比色管中，各加1ml水，2m1乙 为了扣除尿样的 背景值，产生背 酸盐缓冲液，混匀，其一为样品管，另一为尿样空白管。 景的原因可能与 1.2向样品管中加入0.4m1乙酰乙酸乙酯，向空白中加入0.4m1乙酸 尿样的黄色有 盐缓冲液，充分混匀。 关。 2.标准曲线的绘制
教素续页 教学组织与 教案内容 教学安排 2.1取6支10m1具塞比色管，按下表配制标准管。 6-ALA标准管的配制 管号 012 345 6-ALA标准应用溶液(@1)0.00.10.30.50.71.0 水(ml) 2.01.91.71.51.31.0 8-ALA含量（μg) 0 1.03.05.07.010.0 2.2各管中加入2ml乙酸盐援冲液，0.4ml乙酰乙酸乙酯，混匀。 2.3于沸水浴中加热12min,取出冷却至室温。 2.4各加入4ml乙酸乙酯，加塞振摇100次，离心5min,静置分层。 2.5各取2ml乙酸乙酯提取液于另6支10ml具塞比色管中，各加2ml 显色剂，混匀，静置10min,在554nm处，用10mm比色杯，以零管为 参比测量吸光度。 2.6以吸光度为纵坐标，6-ALA含量为横坐标，绘制标准曲线。 3.样品测定 取1.2制备的样品溶液，按2.3-2.5条操作。测得吸光度后，将 样品管的吸光度减去尿空白管的吸光度，从标准曲线上查出样品管中 6-ALA的含量。在测定前后及每次测定10个样品后，测定一次质控样。 [计算] 1.按式(1)计算尿样换算成标准比重(1.020)下的浓度的校正系数 (k) 1.020-1.000 k=实测比重-100 0 2.按式(2)计算尿中6-ALA的浓度 X=k (2) 式中：X一尿中8-ALA的浓度，mg/I:
教素续页 教案内容 教学组织与 教学安排 m一样品管中8-ALA含量，μg V一分析时所取尿样的体积，ml。 [结果评价] 《职业性慢性铅中毒诊断标准》GBZ37-2002 5.1轻度中毒 5.1.1血铅≥2.9μmol/L(0.6mg/L、600μg/L)或尿铅≥0.58“ mol/L(0.12mg/L、120μg/L)；且具有下列一项表现者，可诊断 为轻度中毒： a)尿百-氨基-r-酮戊酸≥61.0μmol/L(8mg/八、8000μg/L): b)血红细胞游离原卟啉(EP)≥3.56μmol/L(2mgL、2000μgL): c)红细胞锌原卟啉(ZPP)≥2.91μmol/L(13.0μggHb)。 有腹部隐痛、腹胀、便秘等症状。 5.1.2诊断性驱铅试验，尿铅≥3.86μmol/L(0.8mgL、800μgL 或4.824mol/24h(1mg/24h、1000μg24h)者，可诊断为轻度铅 中毒 [说明] 1.本法的检测限为0.30mg/1(取0.5mL尿样)。测定范围：0.30-10.00 mg1。精密度：CV=1.2%~3.6%。准确度：铅接触者的尿样加标回 收率平均89.0%-95.7%（加标量：1.0,2.0,3.0,5.0mg1,n-6)。 2.接触者的尿样采集时间不限，采样时不存在污染问题。尿样4℃保 存14d相对偏差为+5.6%。 3.煮沸时间应从比色管放进水浴后，水重新沸腾，开始计算时间， 不得少于12min。 4.尿中6-ALA含量高或颜色较深时，可减少取样量。 5.本法中红色生成物在60mim内稳定。 6.乙酰乙酸乙酯如变黄色即不能使用
教素续页 教学组织与 教案内容 教学安排 [思考] 尿样空白管的作用是什么？ 下次实验内容 病例讨论 仪器： 学生用： 学生用： 具塞比色管(10ml)(16*6) 离心管 分光光度计(10mm比色杯)：公用 50ml烧杯(1*6)（盛蒸馏水） 250ml烧杯(1*6)（盛尿） 500ml烧杯(1*6)（水浴） 电炉：公用 离心机：公用 吸量管(5ml为1*6、2ml为4*6、1ml为4*6) (5ml乙酸乙酯、2ml乙酸盐缓冲液、乙酸乙酯提取液2个 显色剂；1ml样品、6-ALA标准应用液、蒸馏水、乙酰乙 酸乙酯：) 洗瓶(16)（代替下口瓶使用） 吸量管架(1*6) 比色管架(2*6)15孔 吸球(2*6)
教素续页 教案内容 教学组织与 教学安排 坐标纸（学生人数） 记号笔(1*6) 试剂瓶（最小的） 白色(3*6乙酸盐缓冲液、显色剂、标准应用液) 棕色(2*6乙酰乙酸乙酯、乙酸乙酯) 上课教师用： 废液收集用试剂瓶 实验准备教师用 1.试剂瓶 白色250ml(2个显色剂、乙酸盐缓冲液) 白色125ml(1个6-ALA标准储备液、显色剂、乙酸盐缓冲 液) 2.容量瓶100ml250ml 3.药勺 4.托盘天平 5.分析天平 6.吸量管(1ml5ml10ml) 试剂瓶标签