实验二 尿中δ一氨基乙酰丙酸 的含量测定 2016/4/18
教学要求 ■1、了解尿中δ-ALA测定的临床意义。 ·2、掌握乙酸乙酯萃取一对二甲氨基苯甲 醛比色法测定δ-ALA的原理和方法。 2016/4/18
临床意义 铅进入机体后，抑制δ-氨基y-酮戊酸脱水酶( ALAD)和血红素合成酶。ALAD受抑制后，δ氨基 Y酮戊酸形成胆色素受阻，使血中ALA增加，由尿 中排出。故测定尿中的含量，有助于了解铅吸收和 铅中毒的程度。尿中8-ALA≥23.8umol/L或 35.7mmol/24h可诊断为轻度中毒。 2016/4/18
原理 尿中δ-ALA与乙酰乙酸乙酯缩合生成吡咯 化合物。此化合物用乙酸乙酯提取，并与显色 剂（对-二甲氨基苯甲醛）作用生成红色化合 物，在波长554nm处比色定量。 2016/4/18
·实验仪器 ■1、分光光度计，10mm比色杯。 ■2、具塞比色管，10mL. ■3、离心机。 ■4、电炉。 ■5、聚乙烯塑料瓶，100Ml。 ■6、尿比重计。 2016/4/18
试剂 ■本实验所用试剂除另有说明者外，均为分析纯 试剂 ·1、实验用水：为蒸馏水或具有同等纯度的去离 子水。 ·2、冰乙酸，p20=1.05g/ml。 ·3、高氯酸，p20=1.67g/mL. ■4、无水乙酸钠。 ■5、对一二甲氨基苯甲醛。 2016/4/18
试剂 ·6、乙酰乙酸乙酯。 ·7、乙酸乙酯。 ■8、乙酸盐缓冲液(pH=4.6):于700ml水中加入 57ml冰乙酸，82g无水乙酸钠，溶解后加水至 1,000ml。 ■9、显色剂：于30ml冰乙酸中加入1g对-二甲氨 基苯甲醛，5ml高氯酸，5ml水，溶解后用冰乙 酸稀释至50ml混匀，存于冰箱中。 2016/4/18
试剂 ■10、δ-ALA标准溶液：准确称取0.01280gδ- ALA.HCI。用水溶解后，移入100ml容量瓶中， 稀释至刻度，此溶液1ml=O.10mgδ-ALA。 再用水稀释成1ml=10ugδ-ALA的标准应用溶 液。 ■11、质控样：标准尿样、加标的模拟尿、加标 的正常人混合尿或接触者的混合尿。 2016/4/18
▣1.样品处理 ■1.1分别取1ml尿样于2支10ml具塞比色管中 ,各加1ml水，2ml乙酸盐缓冲液，混匀，其 一为样品管，另一为尿样空白管。 ·1.2向样品管中加入0.4mL乙酰乙酸乙酷，向 空白中加入0.4m工乙酸盐缓冲液，充分混匀 2016/4/18
实验步骤 ■1.样品处理 ■1.1分别取1ml尿样于2支10ml具塞比色管 中，各加1ml水，2ml乙酸盐缓冲液，混匀 ,其一为样品管，另一为尿样空白管。 ·1.2向样品管中加入0.4mL乙酰乙酸乙酷 ,向空白中加入0.4m工乙酸盐缓冲液，充 分混匀。 2016/4/18