第六章沉淀分离法 概述 1.定义—利用某种沉淀剂使目标产物或杂质的溶解 度降低而形成无定形固体沉淀的过程 2.特点——浓缩倍数高、操作简便、经济、纯化倍数 低等 3.类型
第六章 沉淀分离法 一、概述 1. 定义——利用某种沉淀剂使目标产物或杂质的溶解 度降低而形成无定形固体沉淀的过程 2. 特点——浓缩倍数高、操作简便、经济、纯化倍数 低等 3. 类型
3、类型 1)盐析沉淀法 2)有机溶剂沉淀法 3)等电点沉淀法 )高分子聚合物沉淀法 5)金属离子沉淀法
3、类型 1) 盐析沉淀法 2) 有机溶剂沉淀法 3) 等电点沉淀法 4) 高分子聚合物沉淀法 5) 金属离子沉淀法
二、盐析沉淀法 1.定义—在高浓度中性盐存在下,使目标产物的 溶解度降低而产生沉淀的过程 2.盐析沉淀机理 减弱静电斥力 去水化膜 3.盐析沉淀平衡式 KsI→logS=β-Ks (其中β=logS0)
二、盐析沉淀法 1. 定义——在高浓度中性盐存在下，使目标产物的 溶解度降低而产生沉淀的过程 2. 盐析沉淀机理 • 减弱静电斥力 • 去水化膜 3. 盐析沉淀平衡式 S log —— = - Ks · I log S = β— Ks · I S0 (其中β= log S0 )
盐析沉淀平衡式: logS=β—Ks:I 其中 β:与蛋白质、温度、pH有关,与盐析剂种类无关 Ks:与蛋白质、盐析剂种类有关,与温度、pH无关
盐析沉淀平衡式： log S = β— Ks · I 其中： β: 与蛋白质、温度、pH 有关，与盐析剂种类无关 Ks: 与蛋白质、盐析剂种类有关，与温度、pH 无关
4、盐析剂的选择 1)盐析剂的条件 盐析作用强: 盐析能力一阴离子>阳离子;高价阴离子>低价阴 离子 较大溶解度 较好生物相容性 来源丰富、经济 2)常用盐析剂(NH4)2SO4、Na2SO等
4、盐析剂的选择 1) 盐析剂的条件 – 盐析作用强： 盐析能力— 阴离子＞阳离子；高价阴离子＞低价阴 离子 – 较大溶解度 – 较好生物相容性 – 来源丰富、经济 2) 常用盐析剂—(NH4 )2SO4 、Na 2SO4等
5、盐析过程的影响因素 1)蛋白质种类和浓度 2)盐析剂的量 3)pH p 4)温度
5、盐析过程的影响因素 1) 蛋白质种类和浓度 2) 盐析剂的量 3) pH 4) 温度
6、盐析操作方式及方法 操作方式 固体盐加入 饱和盐溶液加入 2)饱和度 3)方法 分步盐析 重复盐析 反抽提法
6、盐析操作方式及方法 1) 操作方式 – 固体盐加入 – 饱和盐溶液加入 2) 饱和度 3) 方法 – 分步盐析 – 重复盐析 – 反抽提法
7、盐析沉淀法的特点 沉淀条件温和,不会引起生物物质变性失活; 2)非蛋白的杂质夹带沉淀很少 3)适用范围广; 4)盐份含量高
7、盐析沉淀法的特点 1) 沉淀条件温和，不会引起生物物质变性失活； 2) 非蛋白的杂质夹带沉淀很少； 3) 适用范围广； 4) 盐份含量高
三、有机溶剂沉淀法 1.定义—在有机溶剂存在下,使目标产物的溶解度 降低而产生沉淀的过程 2.沉淀机理 增大静电力 去水化层 q1 g2 F (库仑公式) D
三、有机溶剂沉淀法 1. 定义——在有机溶剂存在下，使目标产物的溶解度 降低而产生沉淀的过程 2. 沉淀机理 • 增大静电力 • 去水化层 q1 ·q2 F = ———— （库仑公式） D ·r 2
3、有机溶剂的选择 降低介电常数 2)对生物分子的变性作用小 3)与水互溶 4)安全、无毒、价廉、易回收等 #常用有机溶剂为:甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇
3、有机溶剂的选择 1) 降低介电常数 2) 对生物分子的变性作用小 3) 与水互溶 4) 安全、无毒、价廉、易回收等 # 常用有机溶剂为：甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇