实验六 巴氏(Barr)小体检查 、目的 观察性染色体的特殊存在形式，学习X染色质的检查方法。 二、原理 巴代小体，亦称X染色质，目前认为在哺乳类动物中，正常雌性个体两条X染色体。在不分 裂的细胞中，只有一条X染色体活化，另一条固缩，固缩状态的X染色质能被碱性染料所深染。在 雄性个体中，性染色体为XY型，一般无固缩状态的X染色质，故检查不出，有人实验统计得出， 在雌性动物中，X染色质检出率为56-87%，雄性动物中为2-6%。 性染色质的位置大部分紧贴核膜，其形态常呈三角形、馒头形、少部分游离于核内呈园形 或椭园形，贴核膜的则是性染色质的侧面形态。 三、用具及药品 显微镜、镊子、染色缸、载玻片、酒精、快绿染液、猩红染液、牙签 四、实验方法 (一)猩红一块绿染色法： 1.取牙签在口腔两颊表面刮取口腔细胞，弃去第一次刮取的细胞用第二次刮取的健康细胞 在洁净的载玻片上轻轻地涂上一层。 2.将涂片立即放入95%的乙醇中，固定至少30分钟。 3.再浸入70%乙醇中2分钟。 4.在猩红染液中染色2分钟。 5.在50%乙醇中冲洗一次。 6.在固绿中染色1-4小时，分染过程中，每小时在低倍镜下检查一次分染情况。当细胞 质，园泡状核呈现为绿色，固缩核呈现红色为止。 7.用50%乙醇洗涤，并放置5分钟。 8.依次在70%、95%、100%的乙醇中各脱水2分钟。 9.二甲苯透明两次，每次2分钟。 10.中性树胶封片， 11.镜检：经猩红一快绿染色的标本，细胞质呈淡绿色或无色，细胞核呈绿色，一般染色 质颗粒呈绿色或蓝色，性染色质呈亮紫红色。 (二)硫堇紫染色法
1.将取材和固定后的标本浸入蒸馏水中片刻。 2.再浸入5N的HC1中水解20分钟，水解过程中，HC1的温度保持在20-25℃。 3.蒸馏水中漂洗三次。 4.硫堇紫缓冲液内染色30分钟左右。 5.蒸馏水中漂洗3次。 6.在50%乙醇中漂洗一次 7.70%乙醇中分化。分化过程中，注意镜检，使标本分化至所需的清晰度。 8.依次在80%、90%、100%的乙醇中脱水。 9.在二甲苯中透明两次。 10.中性树胶封片 11.镜检。 (三)酷酸洋红或石炭酸复红染色法 1.用口腔粘膜细胞涂片，涂片后立即投入95%的乙醇中，固定30分钟，空气干燥。 2.干燥后，投入70%乙醇中浸5分钟。 3.蒸馏水漂洗二次，每次5分钟。 4.用石炭酸复红染色1-2分钟。 5.在95%、100%乙醇中各1分钟，阴千。 6.二甲苯透明，树胶封片。 7.显微镜下观察。 五、作业 绘制你所看到的含有巴氏小体的细胞核图。 附：染液的配制 1.猩红染液的配制： 猩红 1.0克 磷钨酸 0.3克 冰醋酸 5ml
50%酒精 100m1 2.快绿染液的配制 快绿 0.5克 磷钨酸 0.3克 50%酒精 100m1 磷钼酸 0.3克 冰醋酸 5ml 3.硫堇紫缓冲液的配制： (1)将硫革紫染料加入50%乙醇中，使达饱和即可。 (2)缓冲液：醋酸钠 0.914克 巴比妥钠 14.714克 蒸馏水 500m1 (3)0.1N HC1 取28ml的(2)液加到32ml的(3)液中，再加(1)液至总体积达到100ml。 4.石炭酸处长红染液的配制 (1)复红原液（可保存几个月） 取碱性复红3克，溶于100m1的70%乙醇中。 (2)石炭酸复红染色液 复红原液 1Oml 5%石炭酸水溶液 90ml 冰醋酸 10m1 37%甲醛 10m1 染液配成后，放置24小时，过滤方可使用