实验技术九 培养基的制备与高 压蒸气灭菌 一、实验目的 1. 明确培养基的配制原理； 2. 了解高压蒸气灭菌的实验内容及应用范围； 3. 学习高压蒸气灭菌锅的使用及操作方法 和注意事项
实验技术九 培养基的制备与高 压蒸气灭菌 一、实验目的 1. 明确培养基的配制原理； 2. 了解高压蒸气灭菌的实验内容及应用范围； 3. 学习高压蒸气灭菌锅的使用及操作方法 和注意事项
二、基本原理 培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累 代谢产物的营养基质。任何培养基中均需含有微生 物所必需的能源、碳源、氮源、矿质元素、水和生 长因素，但不同营养类型、不同种类的微生物对营 养元素的要求又有很大差异。不同微生物对PH值要 求不一样，应将培养基调到一定的PH值范围
二、基本原理 培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累 代谢产物的营养基质。任何培养基中均需含有微生 物所必需的能源、碳源、氮源、矿质元素、水和生 长因素，但不同营养类型、不同种类的微生物对营 养元素的要求又有很大差异。不同微生物对PH值要 求不一样，应将培养基调到一定的PH值范围
按成份不同 半合成培养基 天然培养基 合成培养基 液体培养基 选择培养基 基础成培养基 按用途 营养培养基 半固体合成培养基 按物理状态 固体培养基 鉴别培养基 ︵ 一 ︶ 培 养 基 的 分 类
按成份不同 半合成培养基 天然培养基 合成培养基 液体培养基 选择培养基 基础成培养基 按用途 营养培养基 半固体合成培养基 按物理状态 固体培养基 鉴别培养基 ︵ 一 ︶ 培 养 基 的 分 类
（二）高压蒸气灭菌 高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭 的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水 沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气 从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此 时由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力， 从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体 蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的
（二）高压蒸气灭菌 高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭 的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水 沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气 从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此 时由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力， 从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体 蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的
三、实验器材 细菌培养基 酵母菌培养基 放线菌培养基 霉菌培养基 试管 手提式或立式全自动高压蒸气 灭菌锅等
三、实验器材 细菌培养基 酵母菌培养基 放线菌培养基 霉菌培养基 试管 手提式或立式全自动高压蒸气 灭菌锅等
四、配方 1. 细菌培养基 牛肉膏：3.0g；蛋白胨：10.0g；氯化钠：5.0g；琼脂：15~25g； 水：1000mL； PH: 7.4~7.6 2. 高氏I号合成培养基（放线菌培养基） 可溶性淀粉：20g； KNO3：1.0g； K2HPO4 .3H2O：0.5g； MgSO4 .7H2O：0.5g； NaCl：0.5g； FeSO4 .7H2O：0.01g； 琼脂：15~25g； 水：1000mL ； pH ：7.4~7.6
四、配方 1. 细菌培养基 牛肉膏：3.0g；蛋白胨：10.0g；氯化钠：5.0g；琼脂：15~25g； 水：1000mL； PH: 7.4~7.6 2. 高氏I号合成培养基（放线菌培养基） 可溶性淀粉：20g； KNO3：1.0g； K2HPO4 .3H2O：0.5g； MgSO4 .7H2O：0.5g； NaCl：0.5g； FeSO4 .7H2O：0.01g； 琼脂：15~25g； 水：1000mL ； pH ：7.4~7.6
4. 查氏培养基 NaNO3:2.0g; K2HPO4:1.0g; KCl:0.5g; MgSO4.7H2O:0.5g FeSO4.7H2O:0.01g; 蔗糖:30g; 琼脂:15~20g， 蒸馏水：1000mL;自然PH值 3. 酵母菌合成培养基 蛋白胨：20g，酵母膏：10g， 葡萄糖：20g，琼脂：15~20g， 水：1000mL,自然PH值
4. 查氏培养基 NaNO3:2.0g; K2HPO4:1.0g; KCl:0.5g; MgSO4.7H2O:0.5g FeSO4.7H2O:0.01g; 蔗糖:30g; 琼脂:15~20g， 蒸馏水：1000mL;自然PH值 3. 酵母菌合成培养基 蛋白胨：20g，酵母膏：10g， 葡萄糖：20g，琼脂：15~20g， 水：1000mL,自然PH值
五、操作步骤 计算 称量 熔化 调pH值 分装 包扎 灭菌 制作斜面培 养基和平板 培养基 补足水分 （一）培养基的制备
五、操作步骤 计算 称量 熔化 调pH值 分装 包扎 灭菌 制作斜面培 养基和平板 培养基 补足水分 （一）培养基的制备
（二）高压湿热灭菌 加水 放物品 加盖 加热 排冷空气 关闭放气阀 维持压力至所需时间 关闭电源，待温 度降至零 打开放气阀取出物品
（二）高压湿热灭菌 加水 放物品 加盖 加热 排冷空气 关闭放气阀 维持压力至所需时间 关闭电源，待温 度降至零 打开放气阀取出物品
六、思考问题 1.高压蒸气灭菌开始之前，为什么要将锅内冷空气 排尽?灭菌完毕后，为什么待压力降低至“0”时 才能打开排气阀，开盖取物？ 2.在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，怎样杜绝一切 不安全的因素? 3.灭菌在微生物实验操作中有何重要意义? 4.黑曲霉的孢子与芽孢杆菌的芽孢对热的抗性哪 个更强？为什么？
六、思考问题 1.高压蒸气灭菌开始之前，为什么要将锅内冷空气 排尽?灭菌完毕后，为什么待压力降低至“0”时 才能打开排气阀，开盖取物？ 2.在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，怎样杜绝一切 不安全的因素? 3.灭菌在微生物实验操作中有何重要意义? 4.黑曲霉的孢子与芽孢杆菌的芽孢对热的抗性哪 个更强？为什么？