临床免渡学检验的宾践粒用 及发展趋势 临床微生物及免疫学教研室易勇
临床免疫学检验的实践应用 及发展趋势 临床微生物及免疫学教研室 易勇
本次课的主要内容 般医院检验科血清免疫室所开展 的项目概况与方法学分类 各主要类别方法的评价及方法选择 的原则 ●三、临床免疫学检验的主要误差/差错表 现、原因分析及对策 ●四、临床免疫学检测方法的自动化发展 趋势 结束
本次课的主要内容 ⚫ 一、一般医院检验科血清免疫室所开展 的项目概况与方法学分类 ⚫ 二、各主要类别方法的评价及方法选择 的原则 ⚫ 三、临床免疫学检验的主要误差/差错表 现、原因分析及对策 ⚫ 四、临床免疫学检测方法的自动化发展 趋势 结束
般医院检验科血清免疫室 所开展的项目概况与方法学分类 ●1.酶联免疫吸附试验( ELISA): HBSAg HBsAb、 HBeAg、 HBeAb、 HBCAb乙肝五项 甲肝抗体、丙肝抗体、甲胎蛋白AFP,癌胚抗 原CEA、HV抗体的检测 2.凝胶沉淀试验(单扩试验):免疫球蛋白 gG、IgA、IgM,补体C3、C4等 ●3.凝集试验:(胶乳)抗O,类风湿因子RF, (碳粒)梅毒血清学试验,(细菌)肥达试弘 4.散射/透射免疫比浊测定:免疫球蛋白IgG、 IgA、IgM,补体C3、C4,抗O/ASO,类风湿 因子RF等
一、一般医院检验科血清免疫室 所开展的项目概况与方法学分类 ⚫ 1. 酶联免疫吸附试验（ELISA）：HBsAg、 HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb 乙肝五项 甲肝抗体、丙肝抗体、甲胎蛋白AFP，癌胚抗 原CEA、 HIV抗体的检测。 ⚫ 2. 凝胶沉淀试验（单扩试验）： 免疫球蛋白 IgG、IgA、IgM，补体C3、C4等。 ⚫ 3. 凝集试验：（胶乳）抗O，类风湿因子RF， （碳粒）梅毒血清学试验，（细菌）肥达试验 ⚫ 4. 散射/透射免疫比浊测定：免疫球蛋白IgG、 IgA、IgM，补体C3、C4，抗O/ASO，类风湿 因子RF等
●5.金标免疫技术: HBSAg或乙肝五项,[绒毛膜 促性腺激素HCG] 6.[放射免疫测定:T3、T4、TSH甲状腺功能 系列试验,胰岛素、C肽,其他一些激素如 HCG、FSH、LH等的检测。] ●7.溶血反应:总补体CH50测定 ●8.[化学发光免疫分析与时间分辨荧光免疫测 定技术,可以替代 ELISA和放免测定的所有项 目] 9.细胞免疫检测:T、B细胞计数(E、EA EAC花环实验),淋巴细胞转化试验,微量细 胞毒实验CDC,混合淋巴细胞培养。 返回
⚫ 5. 金标免疫技术：HBsAg或乙肝五项，[绒毛膜 促性腺激素HCG] ⚫ 6. [放射免疫测定：T3、T4、TSH甲状腺功能 系列试验，胰岛素、C肽，其他一些激素如 HCG、FSH、LH等的检测。] ⚫ 7. 溶血反应：总补体CH50测定。 ⚫ 8. [化学发光免疫分析与时间分辨荧光免疫测 定技术，可以替代ELISA和放免测定的所有项 目] ⚫ 9. 细胞免疫检测：T、B细胞计数（E、EA、 EAC花环实验） ，淋巴细胞转化试验，微量细 胞毒实验CDC，混合淋巴细胞培养。 返回
各主要类别方法的评价及 方法选择的原则 方法学评价的内容: 1准确可靠(准确度—参考方法/决定性方法做对 照、校准,常规实验时的阴性、阳性对照与其他校 准品精密度—重复性试验,批内、批间重复/ 间重复,对于一些定量指标还需要参考生化检验的 方法评价做线性试验—确定其测量的线性范围,回 收试验,相关与回归实验等进行评价。) 2简便快速提高服务水平,出报告要及时,对方法 的要求就要简便快速。但也得在保证准确的基础上 简便快速才有意义
二、各主要类别方法的评价及 方法选择的原则 ⚫ 方法学评价的内容： ⚫ 1.准确可靠（准确度——参考方法/决定性方法做对 照、校准，常规实验时的阴性、阳性对照与其他校 准品 精密度——重复性试验，批内、批间重复/日 间重复，对于一些定量指标还需要参考生化检验的 方法评价做 线性试验—确定其测量的线性范围，回 收试验，相关与回归实验等进行评价。） ⚫ 2.简便快速 提高服务水平，出报告要及时，对方法 的要求就要简便快速。但也得在保证准确的基础上 简便快速才有意义
3灵敏度最小检出限,至少在医学决定性水平 以下。 4特异性该检测方法是否容易受干扰物质的影 响,干扰试验。 检测指标的特异性:该指标阳性与疾病之 间的相关度,阳性预测值、阴性预测值,偎阳 性、假阴性率表示。 ●5安全性对工作人员的人身伤害、对环境的污 染,绿色无污染已经深入人心。 ●6.经济实惠成本不要太高,检验科有成本核 算。诊断价值高,对病人有意义。节约社会资 源,减轻病人负担
⚫ 3.灵敏度 最小检出限，至少在医学决定性水平 以下。 ⚫ 4.特异性 该检测方法是否容易受干扰物质的影 响，干扰试验。 ⚫ 检测指标的特异性：该指标阳性与疾病之 间的相关度，阳性预测值、阴性预测值，假阳 性、假阴性率表示。 ⚫ 5.安全性 对工作人员的人身伤害、对环境的污 染，绿色无污染已经深入人心。 ⚫ 6. 经济实惠 成本不要太高，检验科有成本核 算。 诊断价值高，对病人有意义。节约社会资 源，减轻病人负担
各主要类别方法的评价 ●1.酶联免疫吸附试验( ELISA):比较准确,结 果可靠,适合定性或半定量检测,也有些项目用 其做定量检测,但结果不如放射免疫准确。安全 性好、污染小。在血清免疫室应用最广泛的一种 方法。但比较费时,适合大批量检测。手工操作 劳动强度较大,可以实现自动化检测。偶有板孔 包被不好导致错误结果的现象 2.凝胶沉淀试验(单扩试验):粗略定量或半定 量的实验方法,操作简单但比较费时,稀释加样 后一般需要反应12到24小时才能测量沉淀环直径 计算结果。此类方法有被散射/透射免疫比浊测定 取代的趋势
各主要类别方法的评价 ⚫ 1. 酶联免疫吸附试验（ELISA）：比较准确，结 果可靠，适合定性或半定量检测，也有些项目用 其做定量检测，但结果不如放射免疫准确。安全 性好、污染小。在血清免疫室应用最广泛的一种 方法。但比较费时，适合大批量检测。手工操作 劳动强度较大，可以实现自动化检测。偶有板孔 包被不好导致错误结果的现象。 ⚫ 2. 凝胶沉淀试验（单扩试验）：粗略定量或半定 量的实验方法，操作简单但比较费时，稀释加样 后一般需要反应12到24小时才能测量沉淀环直径 计算结果。此类方法有被散射/透射免疫比浊测定 取代的趋势
●3.凝集试验:定性或粗略的半定量,操作简单、出结 果也快。准确性较差,有血清非特异性凝集等干扰因 素影响。部分项目有被散射/透射免疫比浊测定取代的 趋势。 4.散射透射免疫比浊测定:在自动生化分析仪上自动 稀释、加样、测定,操作简便快速,在保证仪器、试 剂质量的情况下结果准确可靠。不足之处在于需要特 殊仪器,试剂的质量要求也相当高,抗体需要非常纯, 目前使用满意的多为进口试剂,国产试剂的问题主要 在于线性范围小,而且空白/本底高,用起来自已都没 有把握。进口试剂的成本较高 ●5.金标免疫技术:最大的优势是简便快速,不需要特 殊仪器设备,HCG孕妇自己都可以检测。是军事检验 主要是灵敏度欠佳,需要被检物达到相当高的浓度才 能出现阳性结果。HCG的应用非常成功,HBAg勉强 可以用,乙肝五项的检测板就很失败。若能提高其灵 敏度,该方法还是很有发展前途
⚫ 3. 凝集试验： 定性或粗略的半定量，操作简单、出结 果也快。准确性较差，有血清非特异性凝集等干扰因 素影响。部分项目有被散射/透射免疫比浊测定取代的 趋势。 ⚫ 4. 散射/透射免疫比浊测定：在自动生化分析仪上自动 稀释、加样、测定，操作简便快速，在保证仪器、试 剂质量的情况下结果准确可靠。不足之处在于需要特 殊仪器，试剂的质量要求也相当高，抗体需要非常纯， 目前使用满意的多为进口试剂，国产试剂的问题主要 在于线性范围小，而且空白/本底高，用起来自己都没 有把握。进口试剂的成本较高。 ⚫ 5. 金标免疫技术：最大的优势是简便快速，不需要特 殊仪器设备，HCG孕妇自己都可以检测。是军事检验 领域比较看好的一项技术，但是其准确性尚有些问题， 主要是灵敏度欠佳，需要被检物达到相当高的浓度才 能出现阳性结果。HCG的应用非常成功，HBsAg勉强 可以用，乙肝五项的检测板就很失败。若能提高其灵 敏度，该方法还是很有发展前途
6.[放射免疫测定:T3、T4、TSH甲状腺功能系列试 验,胰岛素、C肽,其他一些激素的检测。|本方法最 大的特点就是准确、灵敏度高。适合检测激素、信号 分子、细胞因子一类微量的抗原性物质。最大的弊端 是放射性污染及对人体的放射损害。能用其他方法替 代的项目已经逐渐被替代了,尤其是化学发光法在灵 敏度与准确度上都与之接近。但还是有部分项目不可 替代。 7溶血反应:总补体CH50测定,比较传统的一个方法 操作烦琐,又不好改进。对补体总活性测定是一个经 济实惠的粗略方法。分别测定多个单独的补体组分可 取代总补体CH50测定,但费用剧增。部分检验科仍然 保留本项目。 ●8.|化学发光免疫分析与时间分辨荧光免疫测定技术 灵敏可靠、准确度高,易于自动化。但仪器依赖性高, 需要特殊设备,试剂要求也比较高,价格昂贵
⚫ 6. [放射免疫测定：T3、T4、TSH甲状腺功能系列试 验，胰岛素、C肽，其他一些激素的检测。]本方法最 大的特点就是准确、灵敏度高。适合检测激素、信号 分子、细胞因子一类微量的抗原性物质。最大的弊端 是放射性污染及对人体的放射损害。能用其他方法替 代的项目已经逐渐被替代了，尤其是化学发光法在灵 敏度与准确度上都与之接近。但还是有部分项目不可 替代。 ⚫ 7. 溶血反应：总补体CH50测定，比较传统的一个方法， 操作烦琐，又不好改进。对补体总活性测定是一个经 济实惠的粗略方法。分别测定多个单独的补体组分可 取代总补体CH50测定，但费用剧增。部分检验科仍然 保留本项目。 ⚫ 8. [化学发光免疫分析与时间分辨荧光免疫测定技术： 灵敏可靠、准确度高，易于自动化。但仪器依赖性高， 需要特殊设备，试剂要求也比较高，价格昂贵。]
●9.细胞免疫检测:T、B细胞计数(E、 EA、EAC花环实验),淋巴细胞转化试 验,微量细胞毒实验CDC,混合淋巴细 胞培养。多为手工操作,而且这些方法 的经验要求比较高,方法改进的难度大 检验科多数不愿意开展但是临床又确实 需要,如器官移植的病人必须做
⚫ 9. 细胞免疫检测：T、B细胞计数（E、 EA、EAC花环实验），淋巴细胞转化试 验，微量细胞毒实验CDC，混合淋巴细 胞培养。多为手工操作，而且这些方法 的经验要求比较高，方法改进的难度大。 检验科多数不愿意开展但是临床又确实 需要，如器官移植的病人必须做