河南师范大学水产学院实验课教案大大2O课程名称：生物化学课程类别：必修总学时/总学分：36/1所属系（教研室）：水产动物营养与饲料系授课时间：2015.9.19-2016.1.15
河南师范大学水产学院 实验课教案 课程名称：生物化学 课程类别：必修 总学时/总学分：36/1 所属系（教研室）：水产动物营养与饲料系 授课时间：2015.9.19-2016.1.15
实验名称纸层析法分离氨基酸授课教师谢帝芝授课专业和年级水产养殖2013级3实验类别综合性授课学时掌握分配层析的原理，学习氨基酸纸层析法的操作技术；实验目的学习未知样品的氨基酸成分分析的方法纸层析法（paperchromatography）是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸分离，纸层析所用实验原理展层溶剂大多由有机溶剂和水组成。其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有机溶溶剂流动相。1.试剂和药品：氨基酸溶液、展层剂（扩展剂）、显色剂。实验用品2.仪器和设备：层析缸、层析滤纸、毛细管、吹风机、喷雾器、脱脂棉线、刻度尺、铅笔。1.课前的准备：仪器设备的检查、药品试剂配制、预实验（1h）；2.实验讲解（30分钟）实验目的、实验原理（见上）、实验操作步骤、注意事项。3.实验内容和步骤（90分钟）教学过程及1).准备滤纸：取层析滤纸一张。在纸的一端距边缘2cm处时间分配用铅笔划一直线，在直线上每间隔1.5cm做一记号，标出5个原点。2）．点样：用毛细管将各氨基酸样品点在5个原点上，用量10～20ul，每点在纸上扩散的直径，最大不超过3mm，边点样边用电吹风吹干，越小越好。干后再点一次
实验名称 纸层析法分离氨基酸 授课教师 谢帝芝 授课专业和年级 水产养殖 2013 级 实验类别 综合性 授课学时 3 实验目的 掌握分配层析的原理，学习氨基酸纸层析法的操作技术； 学习未知样品的氨基酸成分分析的方法 实验原理 纸层析法（paper chromatography）是生物化学上分离、鉴定氨基 酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸分离 ，纸层析所用 展层溶剂大多由有机溶剂和水组成。其中滤纸纤维素上吸附的水 是固定相，展层用的有机溶溶剂流动相。 实验用品 1. 试剂和药品：氨基酸溶液、展层剂（扩展剂）、显色剂。 2. 仪器和设备：层析缸、层析滤纸、毛细管、吹风机、喷雾器、 脱脂棉线、刻度尺、铅笔。 教学过程及 时间分配 1. 课前的准备：仪器设备的检查、药品试剂配制、预实验（1h）； 2．实验讲解（30 分钟） 实验目的、实验原理（见上）、实验操作步骤、注意事项。 3. 实验内容和步骤（90 分钟） 1）．准备滤纸：取层析滤纸一张。在纸的一端距边缘 2cm 处 用铅笔划一直线，在直线上每间隔 1.5 cm 做一记号，标出 5 个原 点。 2）．点样：用毛细管将各氨基酸样品点在 5 个原点上，用量 10～20μl，每点在纸上扩散的直径，最大不超过 3 mm，边点样 边用电吹风吹干，越小越好。干后再点一次
3）.扩展：将滤纸直立于层析缸中（点样的一端在下，扩展剂的液面需低于点样线1cm)。待溶剂上升15一20cm时即取出滤纸，铅笔描出溶剂前沿界线，自然干燥或用吹风机热风吹干。4）.显色：用喷雾器均匀喷上0.1%三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤5分钟(100℃)或用热风吹干即可显出各层析斑点。5).计算各种氨基酸的Rf值。教学重点氨基酸纸层析法的操作。教学难点氨基酸纸层析法的操作。作业与1.影响Rf值的主要因素？习题教材和参考王林嵩主编，生物化学实验技术，科学出版社.2012文献教学后记系主任(签字)课程负责人任（签字）负责人签字年月日年月日
3）．扩展：将滤纸直立于层析缸中(点样的一端在下，扩展剂 的液面需低于点样线 1 cm)。待溶剂上升 15―20 cm 时即取出滤 纸，铅笔描出溶剂前沿界线，自然干燥或用吹风机热风吹干。 4）．显色：用喷雾器均匀喷上 0.1％茚三酮正丁醇溶液，然 后置烘箱中烘烤 5 分钟(100℃)或用热风吹干即可显出各层析斑 点。 5）．计算各种氨基酸的 Rf 值。 教学重点 氨基酸纸层析法的操作。 教学难点 氨基酸纸层析法的操作。 作业与 习题 1. 影响 Rf 值的主要因素？ 教材和参考 文献 王林嵩主编，生物化学实验技术. 科学出版社. 2012. 教学后记 负责人签字 系主任（签字） 课程负责人任（签字） 年 月 日 年 月 日
实验名称植物过氧化物酶活性检测授课教师谢帝芝授课专业和年级水产养殖2013级3实验类别验证授课学时了解过氧化物酶的作用，掌握植物组织中过氧化物酶活力的测定实验目的方法。过氧化物酶催化过氧化氢氧化酚类（本实验以愈创木酚为底物），生成醒类化合物，而此化合物可进一步缩合成颜色较深的化实验原理合物。H202可将愈创木酚氧化成红棕色的4-愈创木酚，可用分光光度计在470nm处测定其吸光度，求出该酶的活性。1.试剂和药品：0.01mol/L磷酸缓冲液（Na2HPO4/NaH2PO4缓冲溶液）、40mmol/LH202.20mmol/L愈创木酚。实验用品2.仪器和设备：研钵、电子称、分光光度计、移液枪、冷冻离心机。1.仪器设备的检查、药品试剂配制、预实验（1h）；2.实验讲解（30分钟）实验目的、实验原理（见上）、实验操作步骤、注意事项。3.实验内容和步骤（90分钟）教学过程及1.称取黄瓜皮3g，剪碎置于预冷的研钵中，加入少量预冷的石英时间分配砂，加入3mlpH7.0的预冷的缓冲液，研磨成匀浆后，倒入离心管中，在4℃6磷酸000rpm离心10min，取上清液即粗酶提取液保存于冰箱备用。2.反应液配制：0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.0）100mL+0.5mL愈
实验名称 植物过氧化物酶活性检测 授课教师 谢帝芝 授课专业和年级 水产养殖 2013 级 实验类别 验证 授课学时 3 实验目的 了解过氧化物酶的作用，掌握植物组织中过氧化物酶活力的测定 方法。 实验原理 过氧化物酶催化过氧化氢氧化酚类（本实验以愈创木酚为底 物），生成醌类化合物，而此化合物可进一步缩合成颜色较深的化 合物。H2O2 可将愈创木酚氧化成红棕色的 4-愈创木酚，可用分光 光度计在 470nm 处测定其吸光度，求出该酶的活性。 实验用品 1. 试剂和药品： 0.01mol/L 磷酸缓冲液（Na2HPO4/NaH2PO4 缓冲 溶液）、40mmol/L H2O2、20 mmol/L 愈创木酚。 2. 仪器和设备：研钵、电子称、分光光度计、移液枪、冷冻离心 机。 教学过程及 时间分配 1. 仪器设备的检查、药品试剂配制、预实验（1h）； 2．实验讲解（30 分钟） 实验目的、实验原理（见上）、实验操作步骤、注意事项。 3. 实验内容和步骤（90 分钟） 1. 称取黄瓜皮 3 g，剪碎置于预冷的研钵中，加入少量预冷的石英 砂，加入 3 ml pH 7.0 的预冷的缓冲液，研磨成匀浆后，倒入离心 管中，在 4 ℃ 6 磷酸 000 rpm 离心 10 min，取上清液即粗酶提取 液保存于冰箱备用。 2. 反应液配制：0.1mol/L 磷酸缓冲液（pH 7.0）100 mL+0.5 mL 愈
创木酚+1mLH202，混匀4℃冰箱保存备用。3.酶活性测定吸取3ml反应液于试管中，加入酶提取液10uL（视酶活性可增减加入量），迅速摇匀后倒入光径1cm的比色杯中，并开始计时，以未加酶液之反应液为空白对照，在470nm波长处，以时间扫描方式，测定3min内吸光度值变化（每30s计数一次)，取线性变化部分，计算吸光度变化值（△A470）。教学重点过氧化物酶活力的测定，教学难点过氧化物酶活力的测定。作业与影响过氧化物酶活力的因素？习题教材和参考王林嵩主编，生物化学实验技术.科学出版社.2012文献教学后记系主任 (签字)课程负责人任（签字）负责人签字年月日年月日
创木酚+1 mL H2O2 , 混匀 4 ℃冰箱保存备用。 3. 酶活性测定 吸取 3 ml 反应液于试管中，加入酶提取液 10 uL（视酶活性 可增减加入量），迅速摇匀后倒入光径 1 cm 的比色杯中，并开始 计时，以未加酶液之反应液为空白对照，在 470 nm 波长处，以时 间扫描方式，测定 3 min 内吸光度值变化(每 30 s 计数一次)，取线 性变化部分，计算吸光度变化值（△A470）。 教学重点 过氧化物酶活力的测定。 教学难点 过氧化物酶活力的测定。 作业与 习题 影响过氧化物酶活力的因素？ 教材和参考 文献 王林嵩主编，生物化学实验技术. 科学出版社. 2012. 教学后记 负责人签字 系主任（签字） 课程负责人任（签字） 年 月 日 年 月 日
实验名称鲫鱼肝糖原的提取与鉴定授课教师谢帝芝授课专业和年级水产养殖2013级综合3实验类别授课学时熟悉和了解鲫鱼肝糖原的提取与鉴定的过程和方法；学习和实验目的掌握肝糖的一些特殊化学性质和鉴定方法。糖原在浓碱中稳定，将肝组织先置于浓碱中加热，使蛋白质及其他成分分解而保留肝糖元。再用浓硫酸使糖原脱水生成糖醛实验原理衍生物，衍生物和酮作用形成蓝色化合物，与同法处理的标准葡萄糖一起比色定量。1.试剂和药品：新鲜肝脏、30%NaOH溶液、标准葡萄糖溶液、显色剂。实验用品2.仪器和设备：100ml容量瓶、7220分光光度计、水浴锅、试管(ml、2ml、5ml)。1.仪器设备的检查、药品试剂配制、预实验（1h）；2.实验讲解（30分钟）实验目的、实验原理（见上）、实验操作步骤、注意事项。3.实验内容和步骤（90分钟）教学过程及1）准确称取肝组织0.5g，放入盛有1.5ml30%NaOH的试管中，时间分配置于沸水浴中加热20分钟，取出后冷却，将管中内溶物全部转移到100ml容量瓶中（用蒸馏水多次洗涤试管，一并收入容量瓶）加蒸馏水定容。2）取干燥试管三支，注明空白管、标准管、测定管，按下表进
实验名称 鲫鱼肝糖原的提取与鉴定 授课教师 谢帝芝 授课专业和年级 水产养殖 2013 级 实验类别 综合 授课学时 3 实验目的 熟悉和了解鲫鱼肝糖原的提取与鉴定的过程和方法；学习和 掌握肝糖的一些特殊化学性质和鉴定方法。 实验原理 糖原在浓碱中稳定，将肝组织先置于浓碱中加热，使蛋白质 及其他成分分解而保留肝糖元。再用浓硫酸使糖原脱水生成糖醛 衍生物，衍生物和蒽酮作用形成蓝色化合物，与同法处理的标准 葡萄糖一起比色定量。 实验用品 1. 试剂和药品：新鲜肝脏、30%NaOH 溶液、标准葡萄糖溶液、 显色剂。 2. 仪器和设备：100ml 容量瓶、 7220 分光光度计、 水浴锅、 试 管(ml、2ml、5ml)。 教学过程及 时间分配 1. 仪器设备的检查、药品试剂配制、预实验（1h）； 2．实验讲解（30 分钟） 实验目的、实验原理（见上）、实验操作步骤、注意事项。 3. 实验内容和步骤（90 分钟） 1）准确称取肝组织 0.5g，放入盛有 1.5ml30%NaOH 的试管中， 置于沸水浴中加热 20 分钟，取出后冷却，将管中内溶物全部转移 到 100ml 容量瓶中（用蒸馏水多次洗涤试管，一并收入容量瓶） 加蒸馏水定容。 2）取干燥试管三支，注明空白管、标准管、测定管，按下表进
行操作。加毕，摇匀，置沸水浴中10分钟，冷却，以空白管调节零点，在620nm波长下比色测定。3）结果计算100g肝组织中所含糖原的克数=（0D/0D标）XC标×2×100×（1/1000）X（100/111）X×（100/0.5）教学重点肝糖原的提取与鉴定。教学难点肝糖原的提取与鉴定。作业与影响肝糖原的提取的因素？习题教材和参考王林嵩主编，生物化学实验技术.科学出版社.2012文献教学后记系主任 (签字)课程负责人任（签字）负责人签字年月日年月日注：课程类别填：通识教育平台课程、学科基础平台课程、专业基础平台课程教师教育平台课程I、专业限选课程、专业任选课程、校级公选课程等
行操作。加毕，摇匀，置沸水浴中 10 分钟，冷却，以空白管调节 零点，在 620nm 波长下比色测定。 3）结果计算 100g 肝组织中所含糖原的克数 =（OD 测/OD 标）×C 标×2×100×（1/1000）×（100/111）×（100/0.5） 教学重点 肝糖原的提取与鉴定。 教学难点 肝糖原的提取与鉴定。 作业与 习题 影响肝糖原的提取的因素？ 教材和参考 文献 王林嵩主编，生物化学实验技术. 科学出版社. 2012. 教学后记 负责人签字 系主任（签字） 课程负责人任（签字） 年 月 日 年 月 日 注：课程类别填：通识教育平台课程、学科基础平台课程、专业基础平台课程、 教师教育平台课程 I、专业限选课程、专业任选课程、校级公选课程等