四 食品微生物检验染色法 微生物中细菌、致病菌是很小的生物体，必须通 过染色的方法，在显微镜下才能看得清楚，并且还可 以通过染色的方法鉴别革兰氏染色特性，以及是否长 有鞭毛、周毛、荚膜和芽孢等
四 食品微生物检验染色法 微生物中细菌、致病菌是很小的生物体，必须通 过染色的方法，在显微镜下才能看得清楚，并且还可 以通过染色的方法鉴别革兰氏染色特性，以及是否长 有鞭毛、周毛、荚膜和芽孢等
1、美蓝染色法 （一）吕氏碱性美蓝染色液 美蓝 0.3g 95%乙醇 30ml 0.01%氢氧化钾溶液 100ml 将美蓝溶解于乙醇中，然后于氢氧化钾溶液混合 （二）染色法 将涂片在火焰上固定，待冷却后滴加染液，染 1min~3min，水洗，待干，镜检。 （三）结果 菌体呈蓝色
1、美蓝染色法 （一）吕氏碱性美蓝染色液 美蓝 0.3g 95%乙醇 30ml 0.01%氢氧化钾溶液 100ml 将美蓝溶解于乙醇中，然后于氢氧化钾溶液混合 （二）染色法 将涂片在火焰上固定，待冷却后滴加染液，染 1min~3min，水洗，待干，镜检。 （三）结果 菌体呈蓝色
2、革兰氏染色法 （一）染色液 a、洁净紫染色液 结晶紫 1g 95%乙醇 20ml 1%草酸铵水溶液 80ml 将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。 b、革兰氏碘液 碘 1g 碘化钾 2g 蒸馏水 300ml 将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分 振摇，待完全溶解后，在加蒸馏水至300ml
2、革兰氏染色法 （一）染色液 a、洁净紫染色液 结晶紫 1g 95%乙醇 20ml 1%草酸铵水溶液 80ml 将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。 b、革兰氏碘液 碘 1g 碘化钾 2g 蒸馏水 300ml 将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分 振摇，待完全溶解后，在加蒸馏水至300ml
c、沙黄复染法 沙黄 0.25g 95%乙醇 10ml 蒸馏水 90ml 将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。 （二）染色法 a、将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染 1min，水洗。 b、滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗
c、沙黄复染法 沙黄 0.25g 95%乙醇 10ml 蒸馏水 90ml 将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。 （二）染色法 a、将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染 1min，水洗。 b、滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗
c、滴加95%乙醇脱色，约30s；或将乙醇滴满整个涂 片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10s。 d、水洗，滴加复染液，复染1min，水洗，待干，镜 检。 （三）结果 革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。 注：亦可用1：10稀释石炭酸复红染色液作复染液， 复染时间仅需10s
c、滴加95%乙醇脱色，约30s；或将乙醇滴满整个涂 片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10s。 d、水洗，滴加复染液，复染1min，水洗，待干，镜 检。 （三）结果 革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。 注：亦可用1：10稀释石炭酸复红染色液作复染液， 复染时间仅需10s
3、耐酸性染色法（萎—倪二氏法） （一）染色液 a、石炭酸品红染色液 碱性品红 0.3g 95%乙醇 10ml 5%苯酚水溶液 90ml 将品红溶解于乙醇中，然后与苯酚溶液混合。 b、3%盐酸-乙醇 浓烟酸 3ml 95%乙醇 97ml c、复染液 吕氏碱性美蓝染色液
3、耐酸性染色法（萎—倪二氏法） （一）染色液 a、石炭酸品红染色液 碱性品红 0.3g 95%乙醇 10ml 5%苯酚水溶液 90ml 将品红溶解于乙醇中，然后与苯酚溶液混合。 b、3%盐酸-乙醇 浓烟酸 3ml 95%乙醇 97ml c、复染液 吕氏碱性美蓝染色液
（二）染色法 a、将涂片在火焰上固定，滴加石炭酸品红染色液， 徐徐加热至有蒸汽出现，但切不可使沸腾。染液 因蒸发减少时，应随时添加。染5min，倾去染液， 水洗。 b、滴加盐酸-乙醇脱色，直至无红色脱落为止， （ 所 需 时 间 视 涂 片 厚 薄 而 定 ， 一般为 1min~3min），水洗。 c、加吕氏碱性美蓝染色液，复染30s~1min，水洗， 待干，镜检。 （三）结果 耐酸性细菌呈红色，其他细菌、细胞等物质 呈蓝色
（二）染色法 a、将涂片在火焰上固定，滴加石炭酸品红染色液， 徐徐加热至有蒸汽出现，但切不可使沸腾。染液 因蒸发减少时，应随时添加。染5min，倾去染液， 水洗。 b、滴加盐酸-乙醇脱色，直至无红色脱落为止， （ 所 需 时 间 视 涂 片 厚 薄 而 定 ， 一般为 1min~3min），水洗。 c、加吕氏碱性美蓝染色液，复染30s~1min，水洗， 待干，镜检。 （三）结果 耐酸性细菌呈红色，其他细菌、细胞等物质 呈蓝色
4、柯氏染色法 （一）染色液 a、0.5%沙黄液 b、0.5%孔雀绿液 （二）染色法 a、将涂片在火焰上固定，滴加0.5%沙黄液，并加 热至出现气泡，约2min~3min，水洗。 b、滴加0.5%孔雀绿液，复染40s~50s，水洗，待干， 镜检 （三）结果 布氏杆菌呈红色，其他细菌及细胞呈绿色
4、柯氏染色法 （一）染色液 a、0.5%沙黄液 b、0.5%孔雀绿液 （二）染色法 a、将涂片在火焰上固定，滴加0.5%沙黄液，并加 热至出现气泡，约2min~3min，水洗。 b、滴加0.5%孔雀绿液，复染40s~50s，水洗，待干， 镜检 （三）结果 布氏杆菌呈红色，其他细菌及细胞呈绿色
5、奥尔特氏荚膜染色法 （一）染色液 沙黄 3g 蒸馏水 100ml 用乳钵研磨溶解 （二）染色法 将涂片在火焰上固定，滴加染色液，并加热至 产生蒸汽后，继续染3min，水洗，待干，镜检。 （三）结果 炭疽芽孢杆菌菌体呈赤褐色，荚膜呈黄色
5、奥尔特氏荚膜染色法 （一）染色液 沙黄 3g 蒸馏水 100ml 用乳钵研磨溶解 （二）染色法 将涂片在火焰上固定，滴加染色液，并加热至 产生蒸汽后，继续染3min，水洗，待干，镜检。 （三）结果 炭疽芽孢杆菌菌体呈赤褐色，荚膜呈黄色
6、瑞氏染色法 （一）染色液 瑞氏色素 0.1g 甲醇 60ml 用乳钵研磨溶解 （二）染色法 a、待涂片自然干燥后，滴加染色液，固定1min。 b、加入等量蒸馏水（pH6.5），染色3min~5min。 c、用蒸馏水冲洗，待干，镜检
6、瑞氏染色法 （一）染色液 瑞氏色素 0.1g 甲醇 60ml 用乳钵研磨溶解 （二）染色法 a、待涂片自然干燥后，滴加染色液，固定1min。 b、加入等量蒸馏水（pH6.5），染色3min~5min。 c、用蒸馏水冲洗，待干，镜检