实验四 食品中细菌总数的测定 一、实验目的 1、学习或均技术的技术方法； 2、掌握食品细菌总数的测定报告方式。 二、实验材料 1、电热恒温培养箱、冰箱、恒温水浴锅、托盘天平、电炉、 吸管、广口瓶、三角瓶、玻璃珠、平皿、试管、试管架、 酒精灯、均质器或乳钵、灭菌刀或剪刀、灭菌镊子、75% 酒精棉球、玻璃蜡笔、登记薄 2、培养基和试剂：75%乙醇、生理盐水、15%氢氧化钠溶 液、营养琼脂培养基、检验方法
实验四 食品中细菌总数的测定 一、实验目的 1、学习或均技术的技术方法； 2、掌握食品细菌总数的测定报告方式。 二、实验材料 1、电热恒温培养箱、冰箱、恒温水浴锅、托盘天平、电炉、 吸管、广口瓶、三角瓶、玻璃珠、平皿、试管、试管架、 酒精灯、均质器或乳钵、灭菌刀或剪刀、灭菌镊子、75% 酒精棉球、玻璃蜡笔、登记薄 2、培养基和试剂：75%乙醇、生理盐水、15%氢氧化钠溶 液、营养琼脂培养基、检验方法
三、实验方法 1、检验程序 菌落总数检验程序： 检样→做成几个适当倍数的稀释液→选择2-3个适宜稀释度 各以1ml之量分别入灭菌平皿内→每皿内加入460C适量营养 琼脂→菌落数→报告
三、实验方法 1、检验程序 菌落总数检验程序： 检样→做成几个适当倍数的稀释液→选择2-3个适宜稀释度 各以1ml之量分别入灭菌平皿内→每皿内加入460C适量营养 琼脂→菌落数→报告
2、检样稀释及培养 （1）以无菌操作，将检样25g（或25ml）剪碎以后，放 于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内 （瓶内预先置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充 分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。 固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以 8000r/min~100000r/min的速度处理1min，做成1：10的 均匀稀释液。 （2）用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐 注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释的试管内（注意吸 管尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混合均 匀，做成1：100的稀释液。 （3）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增 稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管
2、检样稀释及培养 （1）以无菌操作，将检样25g（或25ml）剪碎以后，放 于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内 （瓶内预先置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充 分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。 固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以 8000r/min~100000r/min的速度处理1min，做成1：10的 均匀稀释液。 （2）用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐 注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释的试管内（注意吸 管尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混合均 匀，做成1：100的稀释液。 （3）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增 稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管
（4）根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计， 选择2~3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时， 即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每 个稀释度作两个平皿。 （5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至460C营养琼脂培 养基[可放置在（（46±1）0C）水浴锅内保温]注入平皿 15ml~20mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培 养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空 白对照。 （6）等琼脂凝固后，翻转平板，置（36±1）0C恒温箱 内培养（48±2）h取出，计算平板内菌落数目乘以倍数， 即得1g（1mL）样品所含菌落总数
（4）根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计， 选择2~3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时， 即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每 个稀释度作两个平皿。 （5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至460C营养琼脂培 养基[可放置在（（46±1）0C）水浴锅内保温]注入平皿 15ml~20mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培 养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空 白对照。 （6）等琼脂凝固后，翻转平板，置（36±1）0C恒温箱 内培养（48±2）h取出，计算平板内菌落数目乘以倍数， 即得1g（1mL）样品所含菌落总数
3、菌落计算方法 （1）菌落计数方法 做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜 检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释 度的各平板平均菌落总数。 （2）菌落计数的报告 ①平板菌落数的选择 选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定 标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数， 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应 以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状 菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均匀， 即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平皿内如有链 状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链， 可视为一个菌落数；如果有不同来源的几条链，则应将每 条链作为一个菌落计
3、菌落计算方法 （1）菌落计数方法 做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜 检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释 度的各平板平均菌落总数。 （2）菌落计数的报告 ①平板菌落数的选择 选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定 标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数， 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应 以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状 菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均匀， 即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平皿内如有链 状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链， 可视为一个菌落数；如果有不同来源的几条链，则应将每 条链作为一个菌落计
②稀释度的选择 应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，乘以稀 释倍数报告之。若有两上稀释度，其生长的菌落数均在 30～300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于 或等于2，应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数 字。 若所有稀释度平均菌落数均大于300，则应按稀释度 最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度 最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀 释倍数报告之
②稀释度的选择 应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，乘以稀 释倍数报告之。若有两上稀释度，其生长的菌落数均在 30～300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于 或等于2，应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数 字。 若所有稀释度平均菌落数均大于300，则应按稀释度 最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度 最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀 释倍数报告之
若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其 中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平 均菌落数乘以稀释倍数报告之。 ③菌落数的报告 菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时， 采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍 五入方法计算。为了缩短数字后面的零数，也可用10的指 数来表示。 思考题及实验作业
若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其 中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平 均菌落数乘以稀释倍数报告之。 ③菌落数的报告 菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时， 采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍 五入方法计算。为了缩短数字后面的零数，也可用10的指 数来表示。 思考题及实验作业
细菌总数的检验程序 检样 做几个适当倍数的稀释液 选择2~3个适宜稀释度，各以1mL量加人灭菌平皿内 ↓ 每皿加入适量琼脂培养基 37℃±1℃Y24h±2h或48h±2h 菌落计数 报告
1ml 1ml Iml 1ml lml 1ml : 待测样品 1/10 1/102 1/103 1/104 1/105 1/106 159 17 20 无法计数 样品稀释程序
表 稀释度选择及细菌总数报告方式 女少增蜂1下 稀 两稀释 细菌总数 例次 10-1 10-2 10-3 倍数之 报告方式 1(个/g) 比 1 1365 164 20 16400 16000或1.6×10 2 2760 295 46 1.6 37T7T乃50 38000或3.8×10 3 2890 271 60 2.2 27100 27000或2.7×10 4 不可计 4650 513 一 513000 510000或5.1×10的 5 27 11 5 270 270或2.7×10 6 不可计 305 12 30500 31000或3.1×10