实验五:卫生细菌的检验细菌总数的测定 实验目的与要求: (1)学习并掌握水体中细菌总数的检验方法、检验的原理、检验的依据、数据处理和报 告方法。 (2)强化水体细菌总数检验的卫生意义知识。 二、基本原理 本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌种类繁 多,它们对营养和其他生长条件的要求差别很大,不可能找到一种培养基 在一种条件下,使水中所有的细菌均能生长繁殖,因此,以一定的培养基 平板上生长出来的菌落,计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前 般是采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。 三、器材 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基,灭菌水; 灭菌三角烧瓶,灭菌的带玻璃塞瓶,灭菌培养皿,灭菌吸管,灭菌试 管,培养箱等。 四、操作步骤 1.水样的采取 (1)自来水先将自来水龙头用火焰烧灼3分钟灭菌,再开放水龙头 使水流5分钟后,以灭菌三角烧瓶接取水样,以待分析, (2)池水、河水或湖水应取距水面10-15cm的深层水样,先将灭菌 的带玻璃塞瓶,瓶口向下浸入水中,然后翻转过来,除去玻璃塞,水即流 入瓶中,盛满后,将瓶塞盖好,再从水中取出,最好立即检査,否则需放 入冰箱中保存。 2.细菌总数测定 (1)自来水 a)用灭菌吸管吸取lml水样,注入灭菌培养皿中。共做两个平皿。 (b)分别倾注约15m1已溶化并冷却到45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂 培养基,并立即在桌上作平面旋摇,使水样与培养基充分混匀 (c)另取一空的灭菌培养皿,倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基15ml,作 空白对照
实验五：卫生细菌的检验—细菌总数的测定 实验目的与要求： （1） 学习并掌握水体中细菌总数的检验方法、检验的原理、检验的依据、数据处理和报 告方法。 （2） 强化水体细菌总数检验的卫生意义知识。 二、基本原理 本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌种类繁 多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基 在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基 平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前 一般是采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。 三、器材 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，灭菌水； 灭菌三角烧瓶，灭菌的带玻璃塞瓶，灭菌培养皿，灭菌吸管，灭菌试 管，培养箱等。 四、操作步骤 1．水样的采取 （1）自来水先将自来水龙头用火焰烧灼 3 分钟灭菌，再开放水龙头 使水流 5 分钟后，以灭菌三角烧瓶接取水样，以待分析。 （2）池水、河水或湖水应取距水面 10—15cm 的深层水样，先将灭菌 的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流 入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放 入冰箱中保存。 2．细菌总数测定 （1）自来水 （a）用灭菌吸管吸取 1ml 水样，注入灭菌培养皿中。共做两个平皿。 （b）分别倾注约 15ml 已溶化并冷却到 45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂 培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀。 （c）另取一空的灭菌培养皿，倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基 15ml，作 空白对照
(d)培养基凝固后,倒置于37℃温箱中,培养24小时,进行菌落 计数。 两个平板的平均菌落数即为1m1水样的细菌总数 (2)池水、河水或湖水等 (a)稀释水样取3个灭菌空试管,分别加入9m灭菌水。取lm水 样注入第一管9ml灭菌水内,摇匀,再自第一管取1m1至下一管灭菌水内 如此稀释到第三管,稀释度分别为10、103与10°。稀释倍数看水样污浊 程度而定,以培养后平板的菌落数在30-300个之间的稀释度最为合适, 若三个稀释度的菌数均多到无法计数或少到无法计数,则需继续稀释或减 小稀释倍数。一般中等污秽水样,取10、10-、103三个连续稀释度,污 秽严重的取10-、103、10-三个连续稀释度。 (b)自最后三个稀释度的试管中各取lm1稀释水加入空的灭菌培养 皿中,每一稀释度做两个培养皿 (c)各倾注15ml已溶化并冷却至45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养 基,立即放在桌上摇匀。 (d)凝固后倒置于37℃培养箱中培养24小时。 3.菌落计数方法 1)先计算相同稀释度的平均菌落数。若其中一个培养皿有较大片 状菌苔生长时,则不应采用,而应以无片状菌苔生长的培养皿作为该稀释 度的平均菌落数。若片状菌苔的大小不到培养皿的一半,而其余的一半菌 落分布又很均匀时,则可将此一半的菌落数乘2以代表全培养皿的菌落 数,然后再计算该稀释度的平均菌落数。 (2)首先选择平均菌落数在30—300之间的,当只有一个稀释度的 平均菌落数符合此范围时,则以该平均菌落数乘其稀释倍数即为该水样的 细菌总数。 (3)若有两个稀释度的平均菌落数均在30-300之间,则按两者菌 落总数之比值来决定。若其比值小于2,应采取两者的平均数;若大于2, 则取其中较小的菌落总数 (4)若所有稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的 平均菌落数乘以稀释倍数。 (5)若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应按稀释度最低的平 均菌落数乘以稀释倍数
（d）培养基凝固后，倒置于 37℃温箱中，培养 24 小时，进行菌落 计数。 两个平板的平均菌落数即为 1ml 水样的细菌总数。 （2）池水、河水或湖水等 （a）稀释水样取 3 个灭菌空试管，分别加入 9ml 灭菌水。取 1ml 水 样注入第一管 9ml 灭菌水内，摇匀，再自第一管取 1ml 至下一管灭菌水内， 如此稀释到第三管，稀释度分别为 10-1、10-2与 10-3。稀释倍数看水样污浊 程度而定，以培养后平板的菌落数在 30—300 个之间的稀释度最为合适， 若三个稀释度的菌数均多到无法计数或少到无法计数，则需继续稀释或减 小稀释倍数。一般中等污秽水样，取 10-1、10-2、10-3三个连续稀释度，污 秽严重的取 10-2、10-3、10-4三个连续稀释度。 （b）自最后三个稀释度的试管中各取 1ml 稀释水加入空的灭菌培养 皿中，每一稀释度做两个培养皿。 （c）各倾注 15ml 已溶化并冷却至 45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养 基，立即放在桌上摇匀。 （d）凝固后倒置于 37℃培养箱中培养 24 小时。 3．菌落计数方法 （1）先计算相同稀释度的平均菌落数。若其中一个培养皿有较大片 状菌苔生长时，则不应采用，而应以无片状菌苔生长的培养皿作为该稀释 度的平均菌落数。若片状菌苔的大小不到培养皿的一半，而其余的一半菌 落分布又很均匀时，则可将此一半的菌落数乘 2 以代表全培养皿的菌落 数，然后再计算该稀释度的平均菌落数。 （2）首先选择平均菌落数在 30—300 之间的，当只有一个稀释度的 平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落数乘其稀释倍数即为该水样的 细菌总数 。 （3）若有两个稀释度的平均菌落数均在 30—300 之间，则按两者菌 落总数之比值来决定。若其比值小于 2，应采取两者的平均数；若大于 2， 则取其中较小的菌落总数。 （4）若所有稀释度的平均菌落数均大于 300，则应按稀释度最高的 平均菌落数乘以稀释倍数。 （5）若所有稀释度的平均菌落数均小于 30，则应按稀释度最低的平 均菌落数乘以稀释倍数
(6)若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300之间,则以最近300 或30的平均菌落数乘以稀释倍数
（6）若所有稀释度的平均菌落数均不在 30—300 之间，则以最近 300 或 30 的平均菌落数乘以稀释倍数
