研究生免疫学技术实验内容简介 细胞调亡检测 任课老师: 李俊 陈超 一二三四五六七八 遵义医学院免疫学教研室制作:姚新生Emai TeL1398567159]
遵义医学院免疫学教研室 制作: 姚新生 E-mail: immunology@126.com immunology01@msn.com Tel: 13985671591 一 二 三 四 五 六 七 八 研究生免疫学技术实验内容简介 细胞凋亡检测 任课老师: 李俊 陈超
研究生免疫学技术实验内容简介 细胞死亡 人体内的细胞注定是要死亡的,有些死亡是生理性 的,有些死亡则是病理性的。 细胞死亡方式:细胞程序性死亡(PCD)与细胞凋 亡(apoptosis) PCD=Apoptosis??? 一二三四五六七八 遵义医学院免疫学教研室制作:姚新生E-mail Tel:1398567159
遵义医学院免疫学教研室 制作: 姚新生 E-mail: immunology@126.com immunology01@msn.com Tel: 13985671591 一 二 三 四 五 六 七 八 研究生免疫学技术实验内容简介 人体内的细胞注定是要死亡的,有些死亡是生理性 的,有些死亡则是病理性的。 细胞死亡方式:细胞程序性死亡(PCD)与细胞凋 亡(apoptosis) PCD=Apoptosis ??? 细胞死亡
研究生免疫学技术实验内容简介 细胞凋亡 概念 凋亡过程 凋亡是细胞对环境的生理性病 o凋亡起始 押性制邀信是 环培冬仕的变 ⑩凋亡小体形成 接受凋亡 调亡调控分子 蛋白水解酶 连续反映过 信号 性: 的相互作用 答有 的活化 程 序变化的死亡过程。 的细胞或体内吞噬细胞 所吞噬,凋亡细胞的残 余物质被消化后重新利 用 一二三四五六七八 遵义医学院免疫学教研室制作:姚新生Emai TeL1398567159]
遵义医学院免疫学教研室 制作: 姚新生 E-mail: immunology@126.com immunology01@msn.com Tel: 13985671591 一 二 三 四 五 六 七 八 研究生免疫学技术实验内容简介 概念 凋亡是细胞对环境的生理性病 理性刺激信号,环境条件的变 化或缓和性损伤产生的应答有 序变化的死亡过程。 细胞凋亡 凋亡起始 凋亡小体形成 凋亡小体逐渐被邻近 的细胞或体内吞噬细胞 所吞噬,凋亡细胞的残 余物质被消化后重新利 用 凋亡过程 接受凋亡 信号 凋亡调控分子 的相互作用 蛋白水解酶 的活化 连续反映过 程
研究生免疫学技术实验内容简介 图15.1 细胞凋亡过程中形态发生改变的示意图电子云密度大,黑 在收到细胞调亡信号后,一个黏附细胞()开始变成圆的(b),细胞核固缩(c)、 DNA断裂,细胞核崩裂成染色质片段(d);最后,细胞裂解为几个囊泡(凋亡小体)(©) 然后被周围细胞吞噬() 一二三四五六七八 遵义医学院免疫学教研室制作:姚新生Bmal Te1398567159
遵义医学院免疫学教研室 制作: 姚新生 E-mail: immunology@126.com immunology01@msn.com Tel: 13985671591 一 二 三 四 五 六 七 八 研究生免疫学技术实验内容简介
研究生免疫学技术实验内容简介 凋亡的信号通路 Signal,Combination with BiP Unfolded Release Activate Proteins BIP PERK Form Complexes Inhibit Phosphorylation Activate Promote Apoptosis Protein synthesis Promote Pro-apoptotic protein synthesis Apoptosis elF-2a .w GADD34 Inhibit elF-2a Phosphorylation Promote Apoptosis Actirate BCL-2 ATF4 CHOP/GADD153 Promote Transcription 一二三四 五六七八 遵义医学院免疫学教研室制作:姚新生Emai TeL1398567159]
遵义医学院免疫学教研室 制作: 姚新生 E-mail: immunology@126.com immunology01@msn.com Tel: 13985671591 一 二 三 四 五 六 七 八 研究生免疫学技术实验内容简介 凋亡的信号通路
研究生免疫学技术实验内容简介 细胞凋心的检则 方法 早期检 Annesin V-FITC Aanexin V-PITC Binding APOPTOSIS PS(磷 Cytoplasmic Membrane PS从细 Normal Cell Apoptotic Cell 发生, Phosphatidyl Serine 钙依赖性的磷脂结合蛋白,能专一性的结合暴露在膜外 侧的P$,再通过简单的显色或发光系统进行检测 一 二三四五六七八 遵义医学院免疫学教研室制作:姚新生E-mail
遵义医学院免疫学教研室 制作: 姚新生 E-mail: immunology@126.com immunology01@msn.com Tel: 13985671591 一 二 三 四 五 六 七 八 研究生免疫学技术实验内容简介 细胞凋亡的检测 方法 早期检测: PS(磷脂酰丝氨酸)在细胞外膜上的检测: PS从细胞膜内侧转移到外侧在细胞受到凋亡诱导后不久 发生,可能作为免疫系统的识别标志。AnnexinV,一个 钙依赖性的磷脂结合蛋白,能专一性的结合暴露在膜外 侧的PS,再通过简单的显色或发光系统进行检测
研究生免疫学技术实验内容简介 细胞凋亡的检测 方法 晚期检测 TUNEL法 碘化丙啶(Propidine 通过DNA末端转移酶将带标记的 lodide,Pl): dNTP(多为dUTP)间接(通过地 一种核酸染料,它不能 高辛)或直接接到DNA片段的3'- 透过完整的细胞膜,但 OH端,再通过酶联显色或荧光检测 可进入凋亡中晚期的细 定量分析结果。 胞和死细胞,而使细胞 核红染。 二三四五六七八 遵义医学院免疫学教研室制作:姚新生E-mail TeL1398567159]
遵义医学院免疫学教研室 制作: 姚新生 E-mail: immunology@126.com immunology01@msn.com Tel: 13985671591 一 二 三 四 五 六 七 八 研究生免疫学技术实验内容简介 晚期检测 TUNEL法 通过DNA末端转移酶将带标记的 dNTP (多为dUTP)间接(通过地 高辛)或直接接到DNA片段的3’- OH端,再通过酶联显色或荧光检测 定量分析结果。 细胞凋亡的检测 方法 碘化丙啶(Propidine lodide,PI): 一种核酸染料,它不能 透过完整的细胞膜,但 可进入凋亡中晚期的细 胞和死细胞,而使细胞 核红染
研究生免疫学技术实验内容简介 细胞凋亡的检侧 方法 Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡 可以将凋亡早期的细胞和凋亡晚期以及死细胞区分开。 一二三四五六七八 遵义医学院免疫学教研室制作:姚新生E-mail m Tel:13985671591
遵义医学院免疫学教研室 制作: 姚新生 E-mail: immunology@126.com immunology01@msn.com Tel: 13985671591 一 二 三 四 五 六 七 八 研究生免疫学技术实验内容简介 Annexin V/PI 双染法检测细胞凋亡 可以将凋亡早期的细胞和凋亡晚期以及死细胞区分开。 细胞凋亡的检测 方法
研究生免疫学技术实验内容简介 细胞凋亡的检测 方法 形态学检测: 1.光学显微镜和倒置显微镜 2.荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜 细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋亡的进展情况。 常用的DNA特异性染料有:H033342(Hoechst33342),H033258 (Hoechst33258),DAPI。与DNA的碱基区结合后,紫外光激发时发射 明亮的蓝色荧光。 一二三四五六七八 遵义医学院免疫学教研室制作:姚新生E-mail Tel1398567159]
遵义医学院免疫学教研室 制作: 姚新生 E-mail: immunology@126.com immunology01@msn.com Tel: 13985671591 一 二 三 四 五 六 七 八 研究生免疫学技术实验内容简介 形态学检测: 1.光学显微镜和倒置显微镜 2.荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜 细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋亡的进展情况。 常用的DNA特异性染料有:HO 33342 (Hoechst 33342),HO 33258 (Hoechst 33258),DAPI。与DNA的碱基区结合后,紫外光激发时发射 明亮的蓝色荧光。 细胞凋亡的检测 方法
研究生免疫学技术实验内容简介 形态学检测 (DAPI) ·细胞:HCT116细胞系 凋亡诱导:H202 ·染色:DAPI 。 染色部位:细胞核 。特殊仪器: 荧光显微镜 。操作环境:细胞室 一二三 四五六七八 遵义医学院免疫学教研室制作:姚新生al
遵义医学院免疫学教研室 制作: 姚新生 E-mail: immunology@126.com immunology01@msn.com Tel: 13985671591 一 二 三 四 五 六 七 八 研究生免疫学技术实验内容简介 形态学检测(DAPI) • 细胞:HCT116细胞系 • 凋亡诱导:H2O2 • 染色:DAPI • 染色部位:细胞核 • 特殊仪器:荧光显微镜 • 操作环境:细胞室