第六章 酶抑制法和 免疫测定技术 学习指南 观察思考 课外阅读 复习自测 退出本章 本章目录 演示文稿 辽农职院 工程系 质检中心 2024年11月1日
第六章 酶抑制法和 免疫测定技术 学习指南 观察思考 课外阅读 复习自测 退出本章 本章目录 演示文稿 辽农职院 工程系 质检中心 2024年11月1日
◼ 目的要求：生物测定技术以其简单、快速、特异性强、 样品量少而得到迅速发展，应用酶抑制技术、酶联免 疫技术、生物技术等快速测定农药残留，已成为一定 的市场需求，但此类方法仍只能达到定性和半定量的 水平。 通过本章的学习，目的是使学生掌握酶制技术、酶联 免疫技术等常用的快速测定农药残留的方法，了解与 免疫法相关的一些知识。 ◼ 学习要点 1、一般了解：农药残留生物检测技术的问题和展望。 2、一般掌握：生物传感器在农药残留检测中的应用。 3、重点掌握：酶抑制技术；酶联免疫技术；生物技术 等快速测定农药残留方法等
◼ 目的要求：生物测定技术以其简单、快速、特异性强、 样品量少而得到迅速发展，应用酶抑制技术、酶联免 疫技术、生物技术等快速测定农药残留，已成为一定 的市场需求，但此类方法仍只能达到定性和半定量的 水平。 通过本章的学习，目的是使学生掌握酶制技术、酶联 免疫技术等常用的快速测定农药残留的方法，了解与 免疫法相关的一些知识。 ◼ 学习要点 1、一般了解：农药残留生物检测技术的问题和展望。 2、一般掌握：生物传感器在农药残留检测中的应用。 3、重点掌握：酶抑制技术；酶联免疫技术；生物技术 等快速测定农药残留方法等
第六章 酶抑制法和免疫测定技术 本节首页 退出本章 一、酶抑制分析测定法 1、酶法概述 2、酶法检验原理 3、酶原 4、底物与显色剂 5、测定方法 二、免疫检测技术 1、免疫反应 2、免疫分析 3、酶联免疫吸附测定 法 4、农药抗体制备 5、ELISA法的特点
第六章 酶抑制法和免疫测定技术 本节首页 退出本章 一、酶抑制分析测定法 1、酶法概述 2、酶法检验原理 3、酶原 4、底物与显色剂 5、测定方法 二、免疫检测技术 1、免疫反应 2、免疫分析 3、酶联免疫吸附测定 法 4、农药抗体制备 5、ELISA法的特点
本节首页 退出本章 一、酶抑制分析测定法 1、酶法概述
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本节首页 退出本章 真性胆碱酯酶与胆碱能神经的生理功能极为密切。 其生理功能是，当神经冲动到达胆碱能神经末梢 时，突触小泡内的Ach外排至突触间隙，作用于 突触后膜的胆碱能受体，引起下一级神经元或效 应器的激发。在正常生理条件下，Ach完成传递 冲动作用后，随即被突触后膜上的AchE在数毫秒 内水解，生成乙酸和胆碱。 2、酶法检验原理
本节首页 退出本章 真性胆碱酯酶与胆碱能神经的生理功能极为密切。 其生理功能是，当神经冲动到达胆碱能神经末梢 时，突触小泡内的Ach外排至突触间隙，作用于 突触后膜的胆碱能受体，引起下一级神经元或效 应器的激发。在正常生理条件下，Ach完成传递 冲动作用后，随即被突触后膜上的AchE在数毫秒 内水解，生成乙酸和胆碱。 2、酶法检验原理
本节首页 退出本章 神经性毒剂分子中含有亲电子的正磷原子(Pδ+)，它 与Ach分子中的正碳原子(Cδ+)同样具有亲电子性质。 但神经性毒剂的亲电子能力此Ach强，这是因为毒剂分 子中，P＝O和P-F键上的O、F原子相对电负性比P原子 大得多(相对电负性P＝2.1，O＝3.5，F＝4.0，C&S＝ 2.5)。因此，相对电负性大的O、F原子吸收电子成为 负极，使P成为低电子密度的正极，即P原子带有较多 的正电荷和更强的亲电子能力。所以神经性毒剂对 AchE有更大的亲和力和抑制力。 (1)神经性毒剂对AchE的抑制机理
本节首页 退出本章 神经性毒剂分子中含有亲电子的正磷原子(Pδ+)，它 与Ach分子中的正碳原子(Cδ+)同样具有亲电子性质。 但神经性毒剂的亲电子能力此Ach强，这是因为毒剂分 子中，P＝O和P-F键上的O、F原子相对电负性比P原子 大得多(相对电负性P＝2.1，O＝3.5，F＝4.0，C&S＝ 2.5)。因此，相对电负性大的O、F原子吸收电子成为 负极，使P成为低电子密度的正极，即P原子带有较多 的正电荷和更强的亲电子能力。所以神经性毒剂对 AchE有更大的亲和力和抑制力。 (1)神经性毒剂对AchE的抑制机理
本节首页 退出本章 胆碱酯酶根据其水解基质的专一性和速度 不同分真性胆碱酯酶和假性胆碱酯酶，前 者又称乙酰胆碱酯酶(AchE)，后者包括丁 酰胆碱酯酶(BuchE)和丙酰胆碱酯酶 (PrchE)。 假阳性：水果、蔬菜的提取物中含有对有 抑制作用的杂质，如氯代烟碱类物质。 (2)对胆碱酯酶的抑制作用 ① 假阳性
本节首页 退出本章 胆碱酯酶根据其水解基质的专一性和速度 不同分真性胆碱酯酶和假性胆碱酯酶，前 者又称乙酰胆碱酯酶(AchE)，后者包括丁 酰胆碱酯酶(BuchE)和丙酰胆碱酯酶 (PrchE)。 假阳性：水果、蔬菜的提取物中含有对有 抑制作用的杂质，如氯代烟碱类物质。 (2)对胆碱酯酶的抑制作用 ① 假阳性
本节首页 退出本章 乙酰胆碱 敌敌畏 P CCl 2 OCH CH3 O CH3 O O AchE ② 产生假阳性的作用机理
本节首页 退出本章 乙酰胆碱 敌敌畏 P CCl 2 OCH CH3 O CH3 O O AchE ② 产生假阳性的作用机理
3、酶 原 本节首页 退出本章 蜜蜂头的脑酯酶液 条件：3日龄，-20℃ 0.24g/ml磷酸缓冲液 （pH7.5） 保质期：3个月
3、酶 原 本节首页 退出本章 蜜蜂头的脑酯酶液 条件：3日龄，-20℃ 0.24g/ml磷酸缓冲液 （pH7.5） 保质期：3个月
4、底物与显色剂 本节首页 退出本章 乙酰胆碱+H2O→胆碱+乙酸 pH为6.2（黄） →7.6（蓝色） （1）乙酰胆碱-溴百里酚蓝
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