2016年《临床分子生物学检验技术》理论教学大纲 2016-01-2013:09 (供四年制本科医学检验技术专业使用) 1前言 临床分子生物学检验技术是医学检验技术专业学生的一一门重要专业果程。它是分子生物学与临床实验室医学 (医学检验)广泛交又和渗透形成的一个崭新的学科领域，是临床实验室医学中的前导技术，应用分子生物学技 术，对人体内外源性或内源性基因的存在、结构或表达变化进行定性、定量分析，为疾病的预防、诊断、治疗和转 归提供信息和决策依据的一门学科，该技术在临床实验室医学中的广泛应用必将成为推动临床实验室医学各学科 (生化、血液、免疫、微生物和临床检验)发展的重要力量。 临床分子生物学检验技术教学的目的是为适应21世纪临床实验室医学教有发展的需要，培养现代化医院需要的 临床实验室医学专业的高级人才。通过本课程的学习，使学生全面理解分子生物学检验技术的基本理论和基本知 识，培养学生具备分析问题和解决问题以及从事分子生物学检验的基本技能。其救学的总目标是为学生建立一个系 统性强、架构清晰的分子生物学检验技术的知识体系。 本大纲适用于四年制医学检验技术专业本科学生使用。现将大纲使用中的有关问题说明如下： 一为了使教师和学生更好地掌握教材，大纲每一章节均由教学目的、教学要求和教学内容 三部分组成。教学目的注明教学目标，教学要求分掌握、熟悉和了解三个级别，教学内容与教学要求级别相对 应，并统一标示（核心内容即知识点以下划实线，重点内容以下划虚线，一般内容不标示）便于学生重点学习。 二教师在保证大纲核心内容的前提下，可根据不同教学手段，讲授重点内容，介绍一般内 容，有的内容可留给学生自学。 三总教学参考学时为42学时，其中理论22学时，实验20学时：理论课与实验课学时之比为1.1：1。 四教材：《临床分子生物学检验技术》，人民卫生出版社，吕建新、王晓春，1版，2015年 I正文 第一章绪论 一教学目的 通过学习，掌握临床分子生物学检验和基因多态性分析的概念，熟悉常见的临床分子生物学检验技术及其应 用，了解临床分子生物学检验技术的发展。 二教学要求 (一)掌提临床分子生物学检验概念，基因多态性分析概念，个体化医学概念。 (二)熟悉常见的临床分子生物学检验技术及其应用，循环游离核酸检测意义 (仁)了解临床分子生物学检验技术的发展。 三教学内容 (一)临床分子生物学检验技术的发展 1从分子生物学到临床分子生物学检验 2临床分子生物学检验技术的发展
(二)临床分子生物学检验技术的应用 1病原生物基因组 (1)菌种鉴定 (2)确定病击感染和病声裁显 (3)应毒分析 (4)细菌耐药监测和分子流行病学调查 2基因变异 (1)致病基因的分子缺陷 (2)线粒体基因突变 (3)肿腐相关挂因 (4)DNA重排形成融合基因 3基因多态性 (1)基因定位和遗传病相关性分析 (2)药物代谢酶与血液浓度 (3)疾病诊斯断和遗传咨询 (4)多基因病的研究 (5)器官移植配型和个体识别 4循环游离核酸 (1)循环游离核酸与肿瘤 (2)游离核酸与产前诊断 (3)循环microRNA与肿瘤诊断 (三)临床分子生物学检验发展与应用 1临床分子生物学检验与感染性疾病诊断与治立 2遗传性疾病的临床分子生物学检验 3肿瘤的临床分子生物学检验 4临床分子生物学检验与个体化医学 第二章临床分子生物学检验标志物 一教学目的 通过学习，掌握分子生物标志物的概念及分类，基因突变的概念及类型，熟悉病毒、原核生物、真核生物及人 类基因组的结构及特征，了解分子生物标志物的特征
二教学要求 (一)学握分子生物学标志物的概念及分类：核酸分子生物标志物的分类，基因突变的概念及类型；基因多态性 的概念及分类：D八A甲基化的概念，转录产物标志物的类型和原理，循环核酸的应用。 (二)熟悉生物标志物的概念及分类，病毒、原核生物、真核生物及人类基因组的结果及特征，线粒体D生物 标志物的特点，高通量技术与分子标志物的发现。 (三)了解分子生物标志物的特点，生物标志物发展的基本统计学方法和生物标志物的 评估阶段。 三教学内容 (一)分子生物标志物的概念与分类 1生物标志物的概念与分类 2分子生物标志物的概念与分类 (1)DNA生物标志物 (2)RNa生物标志物 (3)蛋白质生物标志物 (二)核酸分子生物标志物 1基因组和基因组特征 (1)原核生物基因组 (2)疠毒基因组 (3)人类基因组 2基于基因突变的分子生物标志物 (1)点突变 (2)插入/缺失突变 (3)动态突变 3基于基因多态性的分子生物标志物 (1)限制性片段长度多态性 (2)小卫星和微卫星多态性 (3)单核首酸多态性 (4)拷贝数多态性 4基于DNA甲基化修饰的分子生物标志物 5基于转录产物的分子生物标志物 (1)RNA标志物
(2)mi RNA标志物 (3)长链非编码RNA标志物 6基于线粒体DNA的分子生物标志物 7基于循环核酸的分子生物标志物 (1)循环肿嘉细胞DNL (2)母体血清中的胎儿DN (3)循环DNA的其他应用 (4)血浆RNA (三)分子生物标志物的发现与评价 1高通量技术与分子生物标志物的发现 (1)基因组学 (2)转录组学 (3)蛋白质组学 (4)代谢组学 2分子生物标志物的特征和评价估 (1)分子生物标志物的特征 (2)分子生物标志物评估的基本统计学方法 (3)生物标志物的评价阶段 第三章临床标本处理与分离纯化技术（自学） 第四章核酸杂交技术 一教学目的 通过学习，掌握核酸分子杂交的类型和基本原理及临床应用，核酸分子探针的分类和标记方法和A芯片原 理。熟悉影响核酸分子杂交的因素，了解NA芯片在医学中的应用 二教学要求 (一)掌握Southern印迹杂交技术、Noutherni印迹杂交技术和荧光原位杂交的基本原理，核酸分子杂交的类型及 临床应用，核酸分子探针的分类和标记方法和DA芯片原理。 (二)熟悉影响核酸分子杂交的因素，核酸分子杂交的基本原理和分类。 (三)了解DA芯片在医学中的应用和核算数据分析及其应用。 三教学内容 (一)核酸分子杂交的概念 1酸探牡
(1)核酸探针的种类 (2)探针的长度 (3)核酸探针的标记 2分子杂交信号检测 (1)放射性标记探针检趣 (2)非放射性标记探针的杂交检测 (二)经典的核酸分子杂交技术 1固相杂交 (1)反向点杂交原理和应用 (2)Southern印迹杂交原理和应里 (3)NorthernE印迹杂交原理和应且 2液相杂交 3原位杂交 (三)DNA芯片技术 1DNA芯片的概念 2DXA芯片原理 3NA芯片技术 (1)芯片制备 (2)样品的制 4杂交与结果分析 5DNA芯片在医学中的应用 (四)影前杂交信号检测的因套 1探针的选槿 2探针的标记方法 3探针的浓度 4杂交率 5杂交温度 6杂交的严谨性 7杂交反应时间 8杂交促进剂
第五章核酸体外扩增及定性检测技术 一教学目的 通过学习，聚合南链反应的基本原理和过程、反应体系组成和扩增参数，熟悉C产物分析原理及主要临床应 用，了解以PCR为基础的其他相关核酸扩增技术原理及应用。 二教学要求 (一)掌握聚合酶链反应的基本原理和过程、反应体系组成和扩增参数，逆转录PCR、多重PCR、巢式PCR、转录 依赖扩增，链置换扩增、bDN扩增技术的原理及临床应用，靶序列扩增、探针序列扩增和信号扩增的概念。 (二)熟悉PCR-FRLP、PCR-ASO、PCR-SSCP等PCR产物分析原理及主要临床应用。 (三)了解以PCR为基础的其他相关核酸扩增技术如全基因组扩增、锚定扩增等靶序列扩增和其他探针序列扩 增、信号扩增技术原理及应用。 三教学内容 (一)靶序列扩增 1PCR扩增技术 (1)CR扩增技术原理及基本过程 (2)PCR反应体系及扩增参数 2其他PCR技术 (1)多重PCR (2)序列特异PCR (3)逆转录PC迟 (4)巢式PCR (5)转录依赖扩增系统 (6)随机引物PCR (7)全基因组扩增 (8)微乳液扩增 (9)锚定扩增 (1O)长片段PCR PCR产物分析 (1)PCR限制性片段长度多肽性 (2)PCR-等位基因特异性寡核苷酸 (3)PCR-单链构象多态性 (4)变性梯度凝胶电泳
(5)熔点曲线分析 (仁)探针序列扩增 1连接酶链反应 2链置换扩增 3QB复制酶 (三)信号扩增 1分支DNM 2杂交捕获法 3酶切依赖的扩增 4循环探针 第六章核酸实时定量检测技术 一教学目的 通过学习，掌握实时荧光定量PC技术的原理，引物、探针的设计基本原理，以及相关结果的分析方法，熟悉 临床基因扩增实验室的设置与人员资质要求，了解数字PCR技术。 二教学要求 (一)掌握实时荧光定量CR技术的原理，引物、探针的设计基本原理，实时荧光定量PCR相关结果的分析方法， 实时荧光定量PCR反应体系和条件的优化。 (二)熟悉临床基因扩增实验室的设置与人员资质要求。 (三)了解数字PCR技术。 三教学内容 (一)实时荧光定量PCR的基本原理 1实时荧光定量PCR中常用的概念 (1)扩增曲线 (2)荧光阀值 (3)循环数 (4)扩增效率 2PCR扩增的理论模式 3实时荧光定量PCR中的荧光化学物质 (1)荧光染料技术 (2)荧光探针技术 (3)数字PCR技术
(二)实时荧光定量PCR引物和探针的设计 1引物设计的基本原则 2,探针设计的基本原则 (三)实时荧光定量PCR反应体系和条件的优化 1反应体系的优化 (1)椋板的质和浓度 (2)引物和探针的浓度 2反应条件的优化 (1)退火温度 (2)循环次数 (四)实时荧光定量PCR测定的数据分析 1绝对定量 2相对定量 (1)标准曲线法的相对定量 (2)比较Ct法的相对定量 (五)临床基因扩增实验室的设图与人员资质要求 第七章核酸序列分析（自学） 第八章蛋白质组学技术（自学） 第九章分子生物学检验新技术（自学） 第十章病毒病的分子生物学检验 一教学目的 通过学习，掌握病毒病的分子生物学检验策略，常见病毒的基因组结构特征和基因分型依据，熟悉病毒核酸定 性及定量检测方法，病毒基因分型及其耐药性分析方法，了解病毒分子生物学检验的临床意义及研究进展 二教学要求 (一)掌握病毒病的分子生物学检验策略（一般性检出策路和完整性检出策略），常见病毒的基因组结构特征、 基因分型依据。 (二)熟悉病毒核酸定性及定量检测方法，病毒基因分型及其耐药性分析方法。 (三)了解病毒分子生物学检验的临床意义，病毒分子生物学检验的研究进展，常见病毒脑要的分子机制 三教学内容 (一)病毒病分子生物学检验策略 1病毒病的一段检出策略
2病毒病的完整性检出笼略 (仁)乙型肝炎病毒的分子生物学检验 1乙刑肝炎病击的基因组结构特征 2乙型肝炎病毒的分子生物学检测方法 (1)IBV DNA的检测 (2)乙型肝炎病青的基因分型 (3)乙型肝炎病毒的耐药分析 3分子生物学检验的临床意义 (1)Bv定量检测的临床意义 (2)BV基因分型检测的临床意义 (3)Bv时药性监测的临床意义 (三)丙型肝炎病毒的分子生物学检验 1丙型肝炎病毒的基因组结构特征 (1)5端及3端非编码区 (2)编码区 2丙型肝炎病毒的分子生物学检验 (1)ICV RNA的检测 (2)CY基因分型 3分子生物学检验的临床意义 (1)检HCV RNA (2)检测HCy基因型 (四)人乳头籀病毒的分子生物学检验 1人乳头瘤病毒的基因组结构特征 2人乳头瘤病毒的分子生物学检验 (1)人乳头痛病击的分型 (2)HPV DNA检测及基因分型 3分子生物学检验的临床意义 (五)人类免疫缺陷病毒的分子生物学检验 1人类免疫缺陷病毒的基因组结构特征 (1)LTR序列
(2)结构基因 (3)调控基因 2人类免疫缺陷病毒的分子生物学检验 (1)HIV RNA检趣 (2)人类免疫缺陷病毒的分型 (3)人类免疫缺陷病毒的耐药性分析 3分子生物学检验的临床意义 (六)流行性感目病毒的分子生物学检验 1流行性感冒病毒的基因组结构特征 2流行性感冒病毒的分子生物学检验 3分子生物学检验的临床意义 第十一章细菌感染性疾病的分子生物学检验技术（自学 第十二章其他感染性疾病的分子生物学检验技术（自学） 第十三章单基因遗传病的分子生物学检验技术（自学） 第十四章染色体疾病的分子生物学检验技术（自学） 第十五章线粒体疾病的分子生物学检验技术（自学） 第十六章肿瘤的分子生物学检验技术（自学） 第十七章药物代谢与毒副作用相关基因的分子生物学检验技术 一教学目的 通过学习，掌握药物药物代谢酶的概念，，熟悉药物疗效和毒副作用相关基因的分类，了解临药物相关基因组 二教学要求 (一)掌握药物药物代谢的概念，CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6和TPNT的基因多态性、及分子生物学检验方法和 相应的临床意义，G-6PD基因变异和HA-B*1502的分子生物学检验方法及临床意义。 (二)熟悉药物疗效和毒刷作用相关基因的分类。 (三)了解药物相关基因组学。 三教学内容 (一)药物代谢酶基因的分子生物学检验 1细胞色素P450 (1)CYP450的基因多态性 (2)QYP450基因的分子生物学检测