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自强不息 止于至善 实验十一 碱性磷酸酶比活力测定
科命生福实验目的景口掌握酶活性测定方法的一般原理方法口测定碱性磷酸酶制备各步骤酶制剂比活力度门大自强不息止于至善
自强不息 止于至善 实验目的 掌握酶活性测定方法的一般原理方法 测定碱性磷酸酶制备各步骤酶制剂比活力
科命生实验原理景口酶活力：即是酶活性，是表示催化某一特定反应的能力。口酶活力可以用在一定条件下所催化的某一特定化学反应速度表示口酶催化的反应速度越快，酶活性越高，反之则愈低。底物减少量或生成物增加量口酶促反应速度V：单位时间废门大至自强不息止于至善
自强不息 止于至善 实验原理 酶活力：即是酶活性，是表示催化某一特定反 应的能力。 酶活力可以用在一定条件下所催化的某一特定 化学反应速度表示。 酶催化的反应速度越快，酶活性越高，反之则 愈低。 酶促反应速度v = 底物减少量或生成物增加量 单位时间
科命生费产物浓度景斜率=浓度/时间==a/biab反应时间初速度时间范酶促反应进程曲线■要真实反映出酶活力的大小，就应该在产物生成量与酶反应时间成正比的这一段时间内进行初速度的测定。活力测定中应注意的几个问题1）活力测定一般测定产物增加速度为好。（2）测活过程应注意外界环境的影响度门大王自强不息止于至善
自强不息 止于至善 酶促反应进程曲线 要真实反映出酶活力的大小，就应该在产物生成量与酶反 应时间成正比的这一段时间内进行初速度的测定。 活力测定中应注意的几个问题 (1) 活力测定一般测定产物增加速度为好。 (2) 测活过程应注意外界环境的影响。 a b =a/b
科命生景方法：1.终止测定法（终点法）口终止测定法是在酶和底物反应达到预定的时间时，立即加入终止剂使酶变性，终止酶促反应，在这段反应时间里面，产物的生成量基本成线性增加，用这段反应时间内的平均速率代替反应初速率。2.动力学分析法（连续监测法或速率法）度门大自强不息止于至善
自强不息 止于至善 方法： 1.终止测定法（终点法） 终止测定法是在酶和底物反应达到预定的时间时， 立即加入终止剂使酶变性，终止酶促反应，在这段 反应时间里面，产物的生成量基本成线性增加，用 这段反应时间内的平均速率代替反应初速率。 2.动力学分析法（连续监测法或速率法）
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科命生景酶催化速度enzymevelocity）：μumol/L/mi口酶活力单位(the unit of enzyme activity)一对酶口进行定量。一个标准酶单位：在一定条件下，每分钟催化形成1umol产物的酶量。1U=1 umol/min口比活力(specificactivity)比活力：每毫克酶蛋白所含的酶活力单位。U/mg(或μmol/min/mg)比活力反应酶的纯度，比活力越大，酶纯度越高。废门大#自强不息止于至善
自强不息 止于至善 酶催化速度(enzyme velocity) ： mol/L/min 酶活力单位(the unit of enzyme activity)—对酶 进行定量。 一个标准酶单位：在一定条件下，每分钟催化形成 1mol产物的酶量。1U=1 mol/min 比活力(specific activity) 比活力：每毫克酶蛋白所含的酶活力单位。U/mg (或 mol/min/mg) 比活力反应酶的纯度，比活力越大，酶纯度越高
科命生景（Alkalinephosphatase，简称为口碱性磷酸酶ALPase)广泛存在于微生物界和动物界。ALPase能催化几乎所有的磷酸单酯的水解反应，产生无机磷酸和相应的醇、酚或糖。ALPasePi磷酸单酯+H20羟基化合物+如何测定ALPase的活力？门大子自强不息止于至善
自强不息 止于至善 碱性磷酸酶 (Alkaline phosphatase ，简称为 ALPase)广泛存在于微生物界和动物界。ALPase能 催化几乎所有的磷酸单酯的水解反应，产生无机磷 酸和相应的醇、酚或糖。 磷酸单酯+H2O ALPase 羟基化合物 + Pi 如何测定ALPase 的活力？
命生对-硝基苯磷酸二钠法口碱性磷酸酶催化对硝基苯磷酸钠盐(pNPP)水解反应以对-硝基苯磷酸二钠（pNPP）为底物，在pH1O.f的碳酸盐缓冲液（含2mmol/LMg2+）的测活体系中检测酶催化pNPP水解产生黄色的对硝基苯酚（pNP）的量。产物pNP在405nm处有最大的吸收峰，可以根据OD405 nm值的增加计算酶活力的大小。碱性磷酸酶口反应式：pNPP+HOpNP+HPO42无色黄色（中性碱性条件下可通过分光光度法测定产物pNP的含量，求出反应速度v废门大学自强不息止于至善
自强不息 止于至善 对-硝基苯磷酸二钠法 碱性磷酸酶催化对硝基苯磷酸钠盐(pNPP)水解反应， 以对-硝基苯磷酸二钠（pNPP）为底物，在pH10.1的 碳酸盐缓冲液（含2 mmol/L Mg2+）的测活体系中检 测酶催化pNPP水解产生黄色的对硝基苯酚（pNP）的 量。产物pNP在405 nm处有最大的吸收峰，可以根据 OD405 nm 值的增加计算酶活力的大小。 反应式：pNPP+H2O pNP+HPO4 2- 无色 黄色（中性碱性条件下） 可通过分光光度法测定产物pNP的含量，求出反应速度v。 碱性磷酸酶
科命生家碱性磷酸酶酶活力单位定义为：在37℃下，以0.5mmol/LpNPP为底物，在pH10.1的碳酸盐缓冲液含2mmol/LMg2+的测活体系中每分钟催化产生1μmol pNP的酶量定为1个酶活力单位。酶的比活力定义为每mg蛋白所具有的酶活力单位数度门大子自强不息止于至善
自强不息 止于至善 碱性磷酸酶酶活力单位定义为：在37℃下，以0.5 mmol/L pNPP为底物，在pH10.1的碳酸盐缓冲液 含2 mmol/L Mg2+的测活体系中每分钟催化产生1 mol pNP的酶量定为1个酶活力单位。酶的比活力 定义为每mg蛋白所具有的酶活力单位数