废门大子生物化学实验XiamenUniversitySDS一聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳(SDS-PAGE)Sodium Dodecyl SulfatePolyAcrylamide Gel Electrophoresis杨春燕厦门大学生命科学学院
杨春燕 厦门大学 生命科学学院 生命科学学院 SDS－聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳 （SDS－PAGE） Sodium Dodecyl Sulfate PolyAcrylamide Gel Electrophoresis 生物化学实验
纲要背景介绍SDS-PAGE介绍、碱性磷酸酶实验模块实验目的和原理电泳原理、SDS-PAGE原理实验流程H实验流程、操作演示、注意事项A思考题
纲要 背景介绍 SDS-PAGE介绍、碱性磷酸酶实验模块 1 2 3 4 实验目的和原理 电泳原理、SDS-PAGE原理 实验流程 实验流程、操作演示、注意事项 思考题
背景介绍
背景介绍
SDS-PAGESDS-PAGE是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介SampleSample质的一种常用电泳技术，用于分离蛋白质。wellsCathodeBufferkDaMFTW1W2W3E1E2E3Plastic210framece110Anode8047Buffer322516.5蛋白质的赛跑2011DaeguzonEVTB-VTB
SDS－PAGE 蛋白质的奔跑 SDS-PAGE是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介 质的一种常用电泳技术，用于分离蛋白质。 蛋白质的赛跑
2017/2018生物化学实验学时安排实验实验类普通班周数内容提要实验地点拔尖班（周三）型时数（周四用五）石艳1 (9/20)绪论5号楼石艳讲投6分组、玻璃仪器清洗及试剂配制周化民周化民，杨存B-514,516学习常用仅器使用王勤王勤2 (9/27)（移液器、高心机、分光光度计n同上综合左正发刘敏，徐庆妍（高锰酸钾测定）等4刘敏刘数网上糖的定量分析综合左正宏石艳、除庆妍(1011)蛋白质的定量分析、周化民周化民同上分离和提4+4综合杨春燕杨春蒸、王融粗脂肪的测定(10/18)取61V徐庆妍徐庆妍茶多糖的制备5同上王勤，周化民综合(10/25NOP+HODNP4HPO王勤F徐庆妍徐庆妍6同上茶多糖的结构鉴定（配试剂）综合石艳石艳、杨春燕(11/1)比活力测酶促反应酶的底物专一性8周化民。pH对酶活性影响周化民定动力学同上5刘数综合湿度对酶活性影响刘敏、石胆(11/8)碱性磷微活剂与抑制剂对酶活力的影响9刘敏，刘，氨基酸纸层析同上6综合杨春糕杨春熟，主勋pH计使用及缓冲液的配制酸酶(11/15)10或性磺酸酶的制备王勤王勤同上6综合杨春燕杨春燕、左正宏(11/22)（pNP标准曲线制作）11碱性磷酸酶比活力测定石艳石艳同上4+4综合周化民周化民、刘收城性特酸酶米氏常数测定(11/29)12石艳石艳SDS-同上离子交换柱层析（2-4人一组）8综合左正宏、主勋左正宏、王勋(12/6)精纯化AKTA蛋白纯化系统的使用（旋13杨春蒸杨春燕PAGE网上股过滤）（2-4人/）（我尖班）5综合刘敏化民，刘取，SDS-PAGE分离蛋白质（鲁通班）(12/13)14(12/20)SDS一PAGE分离蛋白质（自选实验试剂配制》（我类班）杨春燕杨春燕同上综合AKTA蛋白纯化系统的使用（6人周化民、刘收刘敏、除庆妍/组），自选实验试剂配制（普通班）13(127口：主历自选实验网上石佗、王勤8综合化民16(1/3)学期总结汇报同上6全体综合全体
碱性磷 酸酶 分离和提 取 酶促反应 动力学 精纯化 SDSPAGE 比活力测 定
碱性磷酸酶实验模块粗纯化分离和提取制备精纯化离子交换柱层析比活力碱性磷酸酶米氏常数性质研究纯度SDS-PAGE分子量
碱性磷酸酶 制备 粗纯化 分离和提取 精纯化 离子交换柱层析 性质研究 比活力 米氏常数 纯度 分子量 SDS-PAGE 碱性磷酸酶实验模块
实验目的和原理
实验目的和原理
实验目的1．理解电泳技术的基本原理2.3理解SDS-PAGE检测蛋白质分子量的原理3．掌握SDS-PAGE的实验技术及结果分析4.以碱性磷酸酶为例，进一步提高分析鉴定蛋白质的思维能力建立SDS-PAGE应用的基本概念
实验目的 1. 理解电泳技术的基本原理 2. 理解SDS-PAGE检测蛋白质分子量的原理 3. 掌握SDS-PAGE的实验技术及结果分析 4. 以碱性磷酸酶为例，进一步提高分析鉴定蛋白质的思维能力， 建立SDS-PAGE应用的基本概念
电泳技术的基本原理·电泳：带电粒子在电场中的定向移动。电泳技术就是根据各种带电粒子在电场中迁移速度（泳动率）的不同而对物质进行分离的一类实验技术影响迁移速度的因素A内因：1.净电荷（电荷多，泳动速度快）2.质点大小（质点大，泳动速度慢）Samp3.质点形状（球形分子比纤维状分子快）Piasti外因：1.电场强度（电场强度高，泳动速度快）2.缓冲液的pH (pH恒定)（影响净电荷）3.离子强度[1]最适：0.02-0.24.电渗：液体对固体支持物的相对移动
电泳技术的基本原理 l电泳：带电粒子在电场中的定向移动。电泳技术就是根据各种带电粒子在 电场中迁移速度（泳动率）的不同而对物质进行分离的一类实验技术。 l影响迁移速度的因素 内因：1.净电荷 （电荷多，泳动速度快） 2.质点大小 （质点大，泳动速度慢） 3.质点形状 （球形分子比纤维状分子快） 外因：1.电场强度 （电场强度高，泳动速度快） 2.缓冲液的pH (pH恒定) （影响净电荷） 3.离子强度[I] 最适:0.02-0.2 4.电渗：液体对固体支持物的相对移动 A B
SDS-PAGE电泳原理聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺（Acr）和交联剂N，N一亚甲基双丙烯酰胺（Bis）在催化剂（过硫酸铵）和加速剂（四甲基乙二胺TEMED）作用下聚合交联而成的具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳。聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同将蛋白质分离成若干条带。SDS（十二烷基硫酸钠）与蛋白质结合，掩盖各种蛋白分子间天然的电荷差异。因此，各种蛋白质-SDS复合物在电泳时的迁移速率，不再受原有电荷和分子形状的影响而只与分子大小相关。推力：电荷（E）吸引；阻力：凝胶（PAG）阻碍物质运动
SDS－PAGE电泳原理 聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺 (Acr) 和交联剂N，N’—亚甲基双丙烯酰胺 （Bis）在催化剂（过硫酸铵）和加速剂（四甲基乙二胺TEMED）作用下， 聚合交联而成的具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳。 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分 子大小的不同将蛋白质分离成若干条带。 SDS（十二烷基硫酸钠）与蛋白质结合, 掩盖各种蛋白分子间天然的电荷差 异。因此，各种蛋白质-SDS 复合物在电泳时的迁移速率，不再受原有电荷 和分子形状的影响，而只与分子大小相关。 推力：电荷（E）吸引；阻力：凝胶（PAG）阻碍物质运动