《动物细胞培养》实验大纲 Animal Cell Culture 课程基本信息 课程编码：4161021000 课程性质：必修 先修课程：警通生物学，基础生物化学、细胞生物学 适用专业：生物技术和生物科学 总学分：2 总学时：32 理论学时：12 实验/实践学时：20 自修：0 开课院系：生命科学学院 课程负责人：孟风艳 课程师资：韩兴发 一、课程简介 动物铜胞培养是以动物细胞为对象，应用生命科学理论，有目的地利用或改 造其生物遗传性状，以获得目的产物的技术。动物细胞培养作为细阻工程的重要 组成部分，为生物技术专业的必修课程，生物科学专业的推荐选修课。需先修主 要基础深程有普通生物学，基础生物化学和细胞生物学。 二、课程目标 要求学生通过本课程的学习，掌握动物细胞培养的基本概念、基本知识、准 备工作、基本技术和方法、应用研究，以及干细胞技术等。通过强化实验教学， 要求学生掌握动物细胞培养的相关基础技术，并能运用这些知识和手段解决生产 中的理论问题和实际问题，同时，为学好相关专业课程莫定必要的基础， 三、实验内容及学时安挂 项目1：培养基配制及细胞观察(4学时) 11实验性质：认知性实验、验证性实验 12实验目的：熟悉掌握培养基DMEM(低糖)的配制，了解其他培养基 的配制方法；掌捏倒置显微镜的使用操作；学会观察并评判辅乳动物细胞生长状
《动物细胞培养》实验大纲 Animal Cell Culture 课程基本信息 课程编码：4161021000 课程性质：必修 先修课程：普通生物学，基础生物化学、细胞生物学 适用专业：生物技术和生物科学 总学分：2 总学时：32 理论学时：12 实验/实践学时：20 自修：0 开课院系：生命科学学院 课程负责人：孟风艳 课程师资：韩兴发 一、课程简介 动物细胞培养是以动物细胞为对象，应用生命科学理论，有目的地利用或改 造其生物遗传性状，以获得目的产物的技术。动物细胞培养作为细胞工程的重要 组成部分，为生物技术专业的必修课程，生物科学专业的推荐选修课。需先修主 要基础课程有普通生物学，基础生物化学和细胞生物学。 二、课程目标 要求学生通过本课程的学习，掌握动物细胞培养的基本概念、基本知识、准 备工作、基本技术和方法、应用研究，以及干细胞技术等。通过强化实验教学， 要求学生掌握动物细胞培养的相关基础技术，并能运用这些知识和手段解决生产 中的理论问题和实际问题，同时，为学好相关专业课程奠定必要的基础。 三、实验内容及学时安排 项目 1：培养基配制及细胞观察（4 学时） 1.1 实验性质：认知性实验、验证性实验 1.2 实验目的：熟悉掌握培养基 DMEM（低糖）的配制，了解其他培养基 的配制方法；掌握倒置显微镜的使用操作；学会观察并评判哺乳动物细胞生长状
况：练习铜胞计数，并掌握测定细胞活力的方法。 13实验内容： 1.3.1细胞培养液的配制 1.3.2细胞形态观察 1.3.3细胞计数及活力测定 1.4主要试材及仪器设备：试剂：DMEM培养基-低糖（液体）、胎牛血 清FBS)、青霉素-链霉素双抗（青霉素10,000UmL,10,000ugmL链霉素溶于 0.83%NaC),0.4%胎盘兰染液： 仪器设备：篱操作台，倒置显微镜，血球计数板。 项目2：细甩传代培养(3学时) 21实验性质：认知性实验、验证性实验 22实验目的：建立严格的无菌操作观念：掌握细胞传代培养的方法。 23实验内容： 2.3.1细胞观察 2.3.2吸取旧培养基 2.3.3胰蛋白静消化 2.3.4细胞稀释培养 2.4主要试材及仪器设备：试剂：消化液(025%胰蛋白傅+0.02%EDTA)、 DMEM-L培养基（含5%胎牛血清）、0.4%台盼蓝： 仪器设备：倒置显微镜、CO培养箱、超净工作台、离心机，血球计数板。 项目3：细甩冻存与复苏(4学时) 31实验性质：认知性实验、验证性实验 32实验目的：掌握细胞冻存的方法，熟练进行细胞冻存与复苏操作。 33实验内容： 3.3.1细胞的冻存 3.3.2细胞复苏
况；练习细胞计数，并掌握测定细胞活力的方法。 1.3 实验内容： 1.3.1 细胞培养液的配制 1.3.2 细胞形态观察 1.3.3 细胞计数及活力测定 1.4 主要试材及仪器设备：试剂：DMEM 培养基-低糖（液体）、胎牛血 清(FBS)、青霉素-链霉素双抗（青霉素 10,000 U/mL，10,000 μg/mL 链霉素溶于 0.85% NaCl )，0.4%胎盘兰染液； 仪器设备：菌操作台，倒置显微镜，血球计数板。 项目 2：细胞传代培养（3 学时） 2.1 实验性质：认知性实验、验证性实验 2.2 实验目的：建立严格的无菌操作观念；掌握细胞传代培养的方法。 2.3 实验内容： 2.3.1 细胞观察 2.3.2 吸取旧培养基 2.3.3 胰蛋白酶消化 2.3.4 细胞稀释培养 2.4 主要试材及仪器设备：试剂：消化液（0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA）、 DMEM-L 培养基（含 5%胎牛血清）、0.4%台盼蓝； 仪器设备：倒置显微镜、CO2培养箱、超净工作台、离心机，血球计数板。 项目 3：细胞冻存与复苏（4 学时） 3.1 实验性质：认知性实验、验证性实验 3.2 实验目的：掌握细胞冻存的方法，熟练进行细胞 冻存与复苏操作。 3.3 实验内容： 3.3.1 细胞的冻存 3.3.2 细胞复苏
3.4主要试材及仪器设备：试剂：DMEM-L培养基、FBS、消化液，DMSO 0.4%台酚蓝： 仪器设备：倒置显微镜、CO培养箱、超净工作台、离心机，血球计数板， 冰箱、超低温冰箱(-80℃)、液氨罐。 项目4：细甩转染(4学时) 4.1实验性质：认知性实验、验证性实验 42实验目的：掌握细胞转染的基本方法和技术。 43实验内容： 4.3.1细胞接种 4.3.2转染泥合液配制 4.3,3镜检观察 4.4主要试材及仪器设备：HEK293T细胞、EGFP表达质粒、DMEM-H 培养基（含双抗和FBS)、胰酶/EDTA消化液、转染试剂(JetPRIME)。 仪器设各：微量移液器，吸头，酒精灯，废液缸、血球计数板、涡旋报荡器， 高心机、35mm培养皿、0.6mL离心管、1SmL离心管、倒置显微镜、倒置荧光 显微镜、无菌操作台、巴氏吸管等 项目5：鸡胚成纤维细胞的培养(5学时) 51实验性质：认知性实验、验证性实验 52实验目的：掌捏无简操作技术：掌捏原代细胞培养的一般方法和 步骤，熟器原代培养细胞的观察方法。 5.3实验内容： 5.3.1鸡胚获得 5.3.2组织剪切 5.3.3组织块消化 5.3.4鈿胞清洗 5.3.5细胞培养
3.4 主要试材及仪器设备：试剂：DMEM-L 培养基、FBS、消化液、DMSO、 0.4%台盼蓝； 仪器设备：倒置显微镜、CO2培养箱、超净工作台、离心机，血球计数板， 冰箱、超低温冰箱（-80℃）、液氮罐。 项目 4：细胞转染（4 学时） 4.1 实验性质：认知性实验、验证性实验 4.2 实验目的：掌握细胞转染的基本方法和技术。 4.3 实验内容： 4.3.1 细胞接种 4.3.2 转染混合液配制 4.3.3 镜检观察 4.4 主要试材及仪器设备：HEK 293T 细胞、EGFP 表达质粒、DMEM-H 培养基（含双抗和 FBS）、胰酶/EDTA 消化液、转染试剂（JetPRIME ®）。 仪器设备：微量移液器、吸头、酒精灯、废液缸、血球计数板、涡旋振荡器、 离心机、35 mm 培养皿、0.6mL 离心管、15mL 离心管、倒置显微镜、倒置荧光 显微镜、无菌操作台、巴氏吸管等。 项目 5：鸡胚成纤维细胞的培养（5 学时） 5.1 实验性质：认知性实验、验证性实验 5.2 实验目的：掌握无菌操作技术；掌握原代细胞培养的一般方法和 步骤，熟悉原代培养细胞的观察方法。 5.3 实验内容： 5.3.1 鸡胚获得 5.3.2 组织剪切 5.3.3 组织块消化 5.3.4 细胞清洗 5.3.5 细胞培养
5.4主要试材及仪器设备：试剂：M199培养基、FBS、消化液、PB5缓冲 液、青霉素链香素、台盼蓝、PE: 仪器设备：CO培养箱、倒置显養镜、无菌操作台、恒湿水浴锅、培养皿， 烧杯、离心机、巴氏吸管、血细胞计数板、手术器板，微量加样器 四、教材及主要参考资料 (一)教材 刘小玲，孙鹏，吴宝金主编，《动物细胞培养技术》北京：化学工业出版社 2013 (二)主要参考书目 1]李志勇主编，《细胞工程学》第一版北京：高等教育出板社，2008 2]安利国主编，《细胞工程》第二版北京：科学出版社，2015 [3R1甫雷谢尼主编，《动物细胞培养一基本技术指南》第五版，北京：科 学出版社，2008
5.4 主要试材及仪器设备：试剂：M199 培养基、FBS、消化液、PBS 缓冲 液、青霉素-链霉素、台盼蓝、PEI； 仪器设备：CO2培养箱、倒置显微镜、无菌操作台、恒温水浴锅、培养皿、 烧杯、离心机、巴氏吸管、血细胞计数板、手术器械，微量加样器。 四、教材及主要参考资料 （一）教材 刘小玲，孙鹂，吴宝金主编，《动物细胞培养技术》.北京：化学工业出版社， 2013 （二）主要参考书目 [1]李志勇主编，《细胞工程学》第一版.北京：高等教育出版社，2008 [2]安利国主编，《细胞工程》第二版.北京：科学出版社，2015 [3]R.I.甫雷谢尼主编，《动物细胞培养—基本技术指南》第五版，北京：科 学出版社，2008