实数五生物化学需氧量的测定—0D5 一、目的和要求 1,了解00测定的意义及稀释法测0的基本原理。 2、握本方法操作技能。如解释水的制备、桶释信数选择、稀释水的校核和溶解氧的 测定等。 二，原理 生物化学需氧量是指在好氧条件下，微生物分解有机物质的生物化学过程中所需的溶解 氧量。 微生物分解有机物是一个缓慢的过程，要把可分解的有机物全部分解掉常需要20时以上 的时何。微生物的活动与温度有关，所以测定生化需氧量时，常以0℃作为测定的标准温 度。一般来说，在第5天清耗的氧量大约是总需氧量的%，为便于测定，目前国内外普遍 采用20℃培养5动所香氧作为指标，以氧的g/L表示，简称B05。 水体发生生物化学过程经须具备： 1,水体中存在能降解有机物的好气微生物。对易降解的有机物，如碳水化合物、脂防 酸、油脂等，一般微生物均能将其降解，如硝基或硫酸取代芳烃等，则必须进行生物两种明 化。 2、有足够的溶解氧。为此，实验用的稀释水要充分暴气以达到氧的饱和或接近饱和。 稀释还可以降低水中有机污染物的浓度，使整个分解过程在有足够的溶解氧的条件下进行。 3、有微生物生长所需的营养物质。本实检如入了一定量的无机营养物物顺，如磷盐酸、 钙盐、镁盐和铁盐等。 4、稀释法测定BD是将水样经过适当稀释后，使其中含有足够的溶解氧供微生物5d 生化需氧的要求，将此水样分成两份。一份测定培养前的溶解氧：另一份做入0℃恒温箱 内培养5d后测定溶解氧。两者的差值即为5， 5、水中有机污染物的含量越高，水中溶解氧消耗意多，0值也惠高，水质寒差。C0 是一种量度水中可敲生物降解部分有机物（包括某生无机物）的综合指标，常用米评价水体 有机物的污染程度，并已成为污水处理过程中的一项基本指标。 三、仪器与试剂 1,恒温培养箱[(20+1)℃】. 2、20L细玻璃瓶
实验五 生物化学需氧量的测定---BOD5 一、目的和要求 1、了解 BOD 测定的意义及稀释法测 BOD 的基本原理。 2、掌握本方法操作技能，如稀释水的制备、稀释倍数选择、稀释水的校核和溶解氧的 测定等。 二、原理 生物化学需氧量是指在好氧条件下，微生物分解有机物质的生物化学过程中所需的溶解 氧量。 微生物分解有机物是一个缓慢的过程，要把可分解的有机物全部分解掉常需要 20d 以上 的时间，微生物的活动与温度有关，所以测定生化需氧量时，常以 20℃作为测定的标准温 度。一般来说，在第 5 天消耗的氧量大约是总需氧量的 70%，为便于测定，目前国内外普遍 采用 20℃培养 5d 所需氧作为指标，以氧的 mg/L 表示，简称 BOD5。 水体发生生物化学过程必须具备： 1、水体中存在能降解有机物的好气微生物。对易降解的有机物，如碳水化合物、脂肪 酸、油脂等，一般微生物均能将其降解，如硝基或硫酸取代芳烃等，则必须进行生物菌种驯 化。 2、有足够的溶解氧。为此，实验用的稀释水要充分曝气以达到氧的饱和或接近饱和。 稀释还可以降低水中有机污染物的浓度，使整个分解过程在有足够的溶解氧的条件下进行。 3、有微生物生长所需的营养物质。本实验加入了一定量的无机营养物物质，如磷盐酸、 钙盐、镁盐和铁盐等。 4、稀释法测定 BOD 是将水样经过适当稀释后，使其中含有足够的溶解氧供微生物 5d 生化需氧的要求，将此水样分成两份。一份测定培养前的溶解氧；另一份放入 20℃恒温箱 内培养 5d 后测定溶解氧，两者的差值即为 BOD5。 5、水中有机污染物的含量越高，水中溶解氧消耗愈多，BOD 值也愈高，水质愈差。BOD 是一种量度水中可被生物降解部分有机物（包括某些无机物）的综合指标，常用来评价水体 有机物的污染程度，并已成为污水处理过程中的一项基本指标。 三、仪器与试剂 1、恒温培养箱[（20+1）℃]。 2、20L 细玻璃瓶
3、抽气泵（减无油压缩系泵）。 4、特制视并棒。在玻璃下端安装一个2国厚，大小和量筒相匹配的有孔橡皮片。 5,250300L碘量瓶。 6、氯化钙溶流。称取27,5g无水氯化钙。溶于水中，稀释至1儿 7、三氯化铁溶液.称取0.25g三氯化铁(FC13·620),溶千水中，稀释至1L。 8,硫酸模溶液，称取22,5g硫酸镁(S04·720),溶于水中，稀释至1儿： 9、南酸盐溶液。称取85g磷酸二氢钾(K204)、21.75g辆酸氧二甲(K201)、33.起 磷酸氢二钠(N蜃04·720)和1.7g氯化氨(NMC1),溶于水中，稀释至1L,此溶液的pH 应为7.2. 10,葡萄糖-谷氨酸溶液。分别称取150g管密椰和谷氨酸（均于130℃旗过1h),溶于 水中，稀释至1L 11、1ol盐酸溶液。 12,1ol氢氧化销溶液。 13、稀释水。在20L藏璃瓶内加入18L水，用抽气或无油压缩机通入清洁空气28h, 使水中溶解氧饱和或接近饱和(2D℃时溶解氧大于8g/八)，使川前，每升水中加入氯化钙 溶液、三氯化铁溶液、硫酸溶液和磷酸盐溶液各1L,混合。稀释水叶应为7,2,6值 应小于0.2/八 14、接种稀释水。取适量生活污水于20C故置24广36h,上层清液即为接种液。每升稀 释水中加入13L接种液即为接种1稀释水，对某生特殊工业废水最好加入专门培养明化过 的南种。 15,其他溶液。与碘量法测定溶解氧实数相同的硫酸摆溶液、碘性确化钾溶液，浓硫酸， 0.0251硫化硫酸钠标准溶液和1的淀粉溶液（详见实验3“水中常解氧的测定”）. 四、实验步露 1、水样的采集、存储和预处理 2、采集水样于适当大小的玻胸瓶中（根据水质情况而定），用藏璃喜塞紧，且不面气泡。 采样后。需在h内测定：香则，应在4℃或4℃以下保存，且应在采集后10h内测定。 3,用1ol氢氧化钠暖1l盐酸溶液测节H为7.2。 4、游离氯大于0.10阳/L的水样，如亚硫酸钠或硫代硫酸钠除区[见注意事项1】： 5、确定解释倍数[见注意事项2]， 6,水样的稀释
3、抽气泵（或无油压缩泵）。 4、特制搅拌棒。在玻璃下端安装一个 2mm 厚，大小和量筒相匹配的有孔橡皮片。 5、250~300mL 碘量瓶。 6、氯化钙溶液。称取 27.5g 无水氯化钙，溶于水中，稀释至 1L。 7、三氯化铁溶液。称取 0.25g 三氯化铁（FeCl3·6H2O），溶于水中，稀释至 1L。 8、硫酸镁溶液。称取 22.5g 硫酸镁（MgSO4·7H2O）,溶于水中，稀释至 1L。 9、磷酸盐溶液。称取 8.5g 磷酸二氢钾（KH2PO4）、21.75g 磷酸氢二钾（K2HPO4）、33.4g 磷酸氢二钠（NaHPO4·7H2O）和 1.7g 氯化氨（NH4Cl），溶于水中，稀释至 1L，此溶液的 pH 应为 7.2。 10、葡萄糖-谷氨酸溶液。分别称取 150mg 葡萄糖和谷氨酸（均于 130℃烘过 1h），溶于 水中，稀释至 1L。 11、1mol 盐酸溶液。 12、1mol 氢氧化钠溶液。 13、稀释水。在 20L 玻璃瓶内加入 18L 水，用抽气或无油压缩机通入清洁空气 2~8h， 使水中溶解氧饱和或接近饱和（20℃时溶解氧大于 8mg/L）。使用前，每升水中加入氯化钙 溶液、三氯化铁溶液、硫酸溶液和磷酸盐溶液各 1mL，混合。稀释水 pH 应为 7.2，BOD5 值 应小于 0.2mg/L。 14、接种稀释水。取适量生活污水于 20C 放置 24~36h，上层清液即为接种液，每升稀 释水中加入 1~3mL 接种液即为接种 1 稀释水。对某些特殊工业废水最好加入专门培养驯化过 的菌种。 15、其他溶液。与碘量法测定溶解氧实验相同的硫酸锰溶液、碘性碘化钾溶液、浓硫酸、 0.025mol 硫化硫酸钠标准溶液和 1%的淀粉溶液（详见实验 3“水中溶解氧的测定”）。 四、实验步骤 1、水样的采集、存储和预处理 2、采集水样于适当大小的玻璃瓶中（根据水质情况而定），用玻璃塞塞紧，且不留气泡。 采样后，需在 2h 内测定；否则，应在 4℃或 4℃以下保存，且应在采集后 10h 内测定。 3、用 1mol 氢氧化钠或 1mol 盐酸溶液调节 pH 为 7.2。 4、游离氯大于 0.10mg/L 的水样，加亚硫酸钠或硫代硫酸钠除区[见注意事项 1]。 5、确定稀释倍数[见注意事项 2]。 6、水样的稀释
根据确定的稀释倍数，用虹吸法把一定量的污水引入1L量简中，再沿壁慢慢如入所需 稀释水（接种稀释水），用特制授拌棒在水面以下慢慢授匀（不应产生气泡），然后沿瓢壁慢 侵领入两个预先编号、体机相同的250)的确量瓶中，直到充满后溢出少许为止，盖严并 水封，注意瓶内不能有气泡。 用同样方法配置另两份稀释比水样。 7、对照样的配置 另取两个有编号的碘量氛加入稀释水成接种作为空白， 8,培养 将各稀释比的水群，稀释水（接种稀释水）空白各取一瓶放入〔20+1)℃的培养箱内培 养。培养过程中需每天添加封口水。 9,溶解氧的测定 参见附录“水中溶解氧的测定”。 1、用确量法测定未经培养的各份稀释比的水样和空白水样中的剩余溶解氧。 2,用同样方法测定经培养后，各份稀释水样和溶解水样中的剩余溶解氧。 五、数据处理 根据公式计算6，并以表格形式表示测定数据和结果。 Bm5浓度（以02计）(a1)-[D1-2)-B12]×方 式中：D1一稀释水样培养前的溶解氧量，/八： 2一稀释水样培养5d后残留溶解氧量，g/1 B1一稀释水（或接种稀释水》培养前的溶解氧量，暖/儿： 2一稀释水（或接种解释水》经培养5d后残留溶解氧量，照/八： 1一稀释水（成接种稀释水》在培养溶液中所占的比例： 2一水样在培养液中所古的比例。 六，注意事项 1、为除去水样中游离氯而加入亚硫酸钠的量可用实验方法得到。取10心0L待测水样 于确量瘤中，加入1止1硫酸溶液，1L1%确化钾溶液，松匀，以淀粉为带示剂，用标准德 代硫酸钠或亚硫酸钠溶液滴定，计算L水样所需硫代硫酸钠的量，推算所用水样应加入 的量。 2、稀释比应根据水中有机物的含量案确定。 3、较为清洁的水样，不需稀释
根据确定的稀释倍数，用虹吸法把一定量的污水引入 1L 量筒中，再沿壁慢慢加入所需 稀释水（接种稀释水），用特制搅拌棒在水面以下慢慢搅匀（不应产生气泡），然后沿瓶壁慢 慢倾入两个预先编号、体积相同的(250mL)的碘量瓶中，直到充满后溢出少许为止。盖严并 水封，注意瓶内不能有气泡。 用同样方法配置另两份稀释比水样。 7、对照样的配置 另取两个有编号的碘量瓶加入稀释水或接种作为空白。 8、培养 将各稀释比的水样，稀释水（接种稀释水）空白各取一瓶放入（20+1）℃的培养箱内培 养 5d，培养过程中需每天添加封口水。 9、溶解氧的测定 参见附录“水中溶解氧的测定”。 1、用碘量法测定未经培养的各份稀释比的水样和空白水样中的剩余溶解氧。 2、用同样方法测定经培养 5d 后，各份稀释水样和溶解水样中的剩余溶解氧。 五、数据处理 根据公式计算 BOD5，并以表格形式表示测定数据和结果。 BOD5 浓度（以 O2 计）（mg/L）=[(D1-D2)-(B1-B2)]× 式中：D1—稀释水样培养前的溶解氧量，mg/L； D2—稀释水样培养 5d 后残留溶解氧量，mg/L B1—稀释水（或接种稀释水）培养前的溶解氧量，mg/L； B2—稀释水（或接种稀释水）经培养 5d 后残留溶解氧量，mg/L； f1—稀释水（或接种稀释水）在培养溶液中所占的比例； f2—水样在培养液中所占的比例。 六、注意事项 1、为除去水样中游离氯而加入亚硫酸钠的量可用实验方法得到。取 100.0mL 待测水样 于碘量瓶中，加入 1mL1%硫酸溶液，1mL10%碘化钾溶液，摇匀，以淀粉为指示剂，用标准硫 代硫酸钠或亚硫酸钠溶液滴定，计算 100mL 水样所需硫代硫酸钠的量，推算所用水样应加入 的量。 2、稀释比应根据水中有机物的含量来确定。 3、较为清洁的水样，不需稀释
4,污染严重的水样，稀释1001000倍。 5、常规沉淀过污水，稀释20100倍， 6、受污染的河水。稀释0^4倍。 7、性质不了解的水样，稀帮倍数从0值估算，取大于假性高猛盐指数值的1/4，小 于00cr值的1/5，原则上，是以培养后减少的溶解氧占培养前溶解氧的40%70作为宜， 8,本实验操作最好在20℃左右室温下进行，实数用稀释水和水样应保持在0℃左右。 9、所用试剂和稀释水如发现挥浊有细菌生长时，应弃去重新配制，或用葡萄糖一谷氨 酸标准溶液校核。当测定2%解释度的葡萄糖一谷氨酸标准溶液时，若305超过(200士37) g/儿范围，则说明试剂成稀释水有问题成操作技术有问恩。 七、思考圈 1、本实验谈差的主要米源是什么？如何使实险结果较准确？ 2,003在环境评价中有何作用？有何局限性？
4、污染严重的水样，稀释 100~1000 倍。 5、常规沉淀过污水，稀释 20~100 倍。 6、受污染的河水，稀释 0~4 倍。 7、性质不了解的水样，稀释倍数从 COD 值估算，取大于酸性高锰盐指数值的 1/4，小 于 CODcr 值的 1/5。原则上，是以培养后减少的溶解氧占培养前溶解氧的 40%~70%为宜。 8、本实验操作最好在 20℃左右室温下进行，实验用稀释水和水样应保持在 20℃左右。 9、所用试剂和稀释水如发现浑浊有细菌生长时，应弃去重新配制，或用葡萄糖—谷氨 酸标准溶液校核。当测定 2%稀释度的葡萄糖—谷氨酸标准溶液时，若 BOD5 超过（200±37） mg/L 范围，则说明试剂或稀释水有问题或操作技术有问题。 七、思考题 1、本实验误差的主要来源是什么？如何使实验结果较准确？ 2、BOD5 在环境评价中有何作用？有何局限性？