第二章 菌种的保藏与复壮 • 菌种衰退的基本原因是变异， 变异是不可避免的，而减缓变异速 度则是可能的。变异速度与菌种所 处的环境有密切的关系，不良环境 条件能促进变异，频繁或过多传代 也是造成衰退变异的重要原因。为 菌种创造良好条件，减缓菌种衰退， 这就是菌种保藏与复壮工作
第二章 菌种的保藏与复壮 • 菌种衰退的基本原因是变异， 变异是不可避免的，而减缓变异速 度则是可能的。变异速度与菌种所 处的环境有密切的关系，不良环境 条件能促进变异，频繁或过多传代 也是造成衰退变异的重要原因。为 菌种创造良好条件，减缓菌种衰退， 这就是菌种保藏与复壮工作
第二章 菌种的保藏与复壮 • 一、菌种保藏 • 二、菌种的提纯与复壮
第二章 菌种的保藏与复壮 • 一、菌种保藏 • 二、菌种的提纯与复壮
一、菌种保藏 •工业微生物菌种保藏与其他目的 的菌种保藏要求有所不同。工业 微生物菌种保藏，是要使菌种生 产能力和与生产工艺相适应的优 良性状保持稳定，当然做不到绝 对不变，只是力求把这种衰退现 象推迟减缓到最低限度
一、菌种保藏 •工业微生物菌种保藏与其他目的 的菌种保藏要求有所不同。工业 微生物菌种保藏，是要使菌种生 产能力和与生产工艺相适应的优 良性状保持稳定，当然做不到绝 对不变，只是力求把这种衰退现 象推迟减缓到最低限度
菌种保藏 • 菌种保藏有许多的方法，其共同的目标是 把菌株的优良性状保存下来，防止退化、 死亡或杂菌污染。保藏的一般程序是选取 优良的纯菌种，最好是用其分生孢子或芽 孢等休眠体，在其休眠和停止生长的条件 下保藏。微生物生长要求适宜的温度、水 分、空气和营养物质等，如将菌种处于低 温、干燥、无氧和缺乏营养的条件下，就 可以使菌种暂时处于休眠状态
菌种保藏 • 菌种保藏有许多的方法，其共同的目标是 把菌株的优良性状保存下来，防止退化、 死亡或杂菌污染。保藏的一般程序是选取 优良的纯菌种，最好是用其分生孢子或芽 孢等休眠体，在其休眠和停止生长的条件 下保藏。微生物生长要求适宜的温度、水 分、空气和营养物质等，如将菌种处于低 温、干燥、无氧和缺乏营养的条件下，就 可以使菌种暂时处于休眠状态
菌种保藏 其中低温是保藏菌种的重要因素，也是常用 的一种简单易行的方法。在作低温保藏时，注意 尽量不损伤细胞。在缓慢冷冻时，胞外基质一般 较快结冰而形成冰晶使基质浓度增高，造成细胞 水分外渗而大量脱水，可能使细胞死亡。如快速 降温，胞内也很快形成冰晶，胞内外渗透压基本 平衡，同时胞内冰晶较小，对细胞及原生质膜的 损伤也较小，菌株不易死亡，影响也较小。与低 温相关的保藏方法，如冷冻干燥法、超低温保藏 法等，都是利用低温条件下细胞与环境的特殊平 衡原理而设计的
菌种保藏 其中低温是保藏菌种的重要因素，也是常用 的一种简单易行的方法。在作低温保藏时，注意 尽量不损伤细胞。在缓慢冷冻时，胞外基质一般 较快结冰而形成冰晶使基质浓度增高，造成细胞 水分外渗而大量脱水，可能使细胞死亡。如快速 降温，胞内也很快形成冰晶，胞内外渗透压基本 平衡，同时胞内冰晶较小，对细胞及原生质膜的 损伤也较小，菌株不易死亡，影响也较小。与低 温相关的保藏方法，如冷冻干燥法、超低温保藏 法等，都是利用低温条件下细胞与环境的特殊平 衡原理而设计的
一、菌种保藏 • (一)低温保藏法 • (二)低温定期移植法 • (三)石蜡油低温保藏法 • (四)干燥保藏 • (五)甘油管保藏法 • (六)真空冷冻干燥法 • (七)液氮超低温保存 现行的菌种保藏方法有下列诸种:
一、菌种保藏 • (一)低温保藏法 • (二)低温定期移植法 • (三)石蜡油低温保藏法 • (四)干燥保藏 • (五)甘油管保藏法 • (六)真空冷冻干燥法 • (七)液氮超低温保存 现行的菌种保藏方法有下列诸种:
(一)低温保藏法 • 这是一种常用的简便方法。一般的斜面孢 子、液态孢子、斜面种子以及用麸皮、大 米、小米或碎玉米制成的孢子，可以放在 4℃冰箱内保藏，这种温度条件下不能使 菌体进入休眠，而仅是抑制微生物的生命 活动。因此，保藏时间不宜过长，一般不 超过1～2个月为宜。本方法虽然简便，但 由于菌株处于较高的水平活性下，这对保 藏株的生产性状是不利的，因此，生产菌 种一般不采用此法保藏
(一)低温保藏法 • 这是一种常用的简便方法。一般的斜面孢 子、液态孢子、斜面种子以及用麸皮、大 米、小米或碎玉米制成的孢子，可以放在 4℃冰箱内保藏，这种温度条件下不能使 菌体进入休眠，而仅是抑制微生物的生命 活动。因此，保藏时间不宜过长，一般不 超过1～2个月为宜。本方法虽然简便，但 由于菌株处于较高的水平活性下，这对保 藏株的生产性状是不利的，因此，生产菌 种一般不采用此法保藏
(二)低温定期移植法 • 把培养好的斜面菌种放在低温干燥处保存， 定期移植，一般3～6个月移植一次(视菌种 特征而定)。也可以用穿刺培养，定期移植 法保藏细菌，其效果也较好。穿刺培养是 将含0.6％～0.8％的琼脂培养基装试管灭 菌后直立冷凝后，用接种针尖挑取少量菌 体，垂直刺入琼脂培养基中心，放在适当 温度下培养，待菌长好后即可放低温保存， 此法较斜面保存有利，大肠杆菌可保藏2年 以上不发生明显变异
(二)低温定期移植法 • 把培养好的斜面菌种放在低温干燥处保存， 定期移植，一般3～6个月移植一次(视菌种 特征而定)。也可以用穿刺培养，定期移植 法保藏细菌，其效果也较好。穿刺培养是 将含0.6％～0.8％的琼脂培养基装试管灭 菌后直立冷凝后，用接种针尖挑取少量菌 体，垂直刺入琼脂培养基中心，放在适当 温度下培养，待菌长好后即可放低温保存， 此法较斜面保存有利，大肠杆菌可保藏2年 以上不发生明显变异
(二)低温定期移植法 • 斜面定期移植与穿刺移植法有其缺陷， 即容易发生遗传变异；连续传代可使一 些生产性状丢失或减弱，也易于污染杂 菌。因此，一些贵重菌株及生产优良菌 株不宜用此法保藏
(二)低温定期移植法 • 斜面定期移植与穿刺移植法有其缺陷， 即容易发生遗传变异；连续传代可使一 些生产性状丢失或减弱，也易于污染杂 菌。因此，一些贵重菌株及生产优良菌 株不宜用此法保藏
(三)石蜡油低温保藏法 • 本方法的原理是在长好的斜面菌上覆盖 灭菌的液体石蜡，达到菌体与空气隔绝， 使菌处于生长和代谢停止状态，同时石 蜡油还防止水分蒸发，在低温下达到较 长期的保藏菌种的目的。保藏温度要求 在-4～4℃下。液体石蜡法适用于不产孢 子的菌种
(三)石蜡油低温保藏法 • 本方法的原理是在长好的斜面菌上覆盖 灭菌的液体石蜡，达到菌体与空气隔绝， 使菌处于生长和代谢停止状态，同时石 蜡油还防止水分蒸发，在低温下达到较 长期的保藏菌种的目的。保藏温度要求 在-4～4℃下。液体石蜡法适用于不产孢 子的菌种