浙江大学出版社 Zhe ji ang University Press http://www.zjupress.com 药物分析 mma0e0aa06%° 姚彤炜 第8章第3,4,5节第2讲-鉴别、检査、含量测定
药物分析 pharmaceutical analysis 姚彤炜 第8章第3,4,5节第2讲-鉴别、检查、含量测定 1
第8章中药与天然药物的分析(2) 主要内容 1.概述 2.前处理方法 3.鉴别试验 4.杂质检查 5.含量测定 第8章第3,4,5节第2讲-鉴别、检査、含量测定
2 第8章 中药与天然药物的分析(2) 1. 概 述 2. 前处理方法 3. 鉴别试验 4. 杂质检查 5. 含量测定 主要内容 第8章第3,4,5节第2讲-鉴别、检查、含量测定
·本章学习要求 熟悉:中药分析的特点、前处理方法、药物的 鉴别、色谱法测定药效成分含量 了解:中药指纹图谱和DNA条形码分子鉴定法 药物的杂质检查项目和测定方法,以及其 它含量测定方法 第8章第3,4,5节第2讲-鉴别、检査、含量测定
3 本章学习要求 熟悉：中药分析的特点、前处理方法、药物的 鉴别、色谱法测定药效成分含量 了解：中药指纹图谱和DNA条形码分子鉴定法， 药物的杂质检查项目和测定方法，以及其 它含量测定方法 第8章第3,4,5节第2讲-鉴别、检查、含量测定
3.4指纹图谱特征图谱的鉴别 2010年版《中国药典》首次采用中药色谱指纹图谱对 植物油脂和提取物,以及少数制剂进行鉴别。2015年 版《中国药典》扩大了应用品种 ③目的——通过对中药整体特性的图谱识别,提供一种 比较全面的控制中药质量的方法 在《中国药典》的相关药物的质量标准中【指纹图谱/ 特征图谱】单独列项 用相似度表达的称为“指纹图谱”,用相对保留值表 达的称为“特征图谱” ③中药指纹图谱建立的内容—分析方法的建立与认证 方法验证、数据处理和分析 第8章第3,4,5节第2讲-鉴别、检査、含量测定
4 3.4 指纹图谱/特征图谱的鉴别 2010年版《中国药典》首次采用中药色谱指纹图谱对 植物油脂和提取物，以及少数制剂进行鉴别。2015年 版《中国药典》扩大了应用品种 目的——通过对中药整体特性的图谱识别，提供一种 比较全面的控制中药质量的方法 在《中国药典》的相关药物的质量标准中【指纹图谱/ 特征图谱】单独列项 用相似度表达的称为“指纹图谱”，用相对保留值表 达的称为“特征图谱” 中药指纹图谱建立的内容——分析方法的建立与认证、 方法验证、数据处理和分析 第8章第3,4,5节第2讲-鉴别、检查、含量测定
·应用 ChP收载的薄荷素油、三七总皂苷、丹参酮提取物 山楂叶提取物、人参总皂苷等植物油脂和提取物, 以及制剂银黄口服液、三七通舒胶囊等,均采用指 纹图谱或特征图谱进行鉴定 ●例:丹参酮提取物的指纹图谱测定 ⑧色谱条件:○DS柱(25cm×4.6mm,5μum);乙腈 为流动相A,0.026%磷酸嵱液为流动相B,梯度洗 脱;检测波长270nm;柱温25℃C;流速0.8m/min 理论板数按隐丹参酮峰计算应不低于20000 参照物:隐丹参酮和丹参酮Ⅲ!对照品混合溶液 第8章第3,4,5节第2讲-鉴别、检査、含量测定
5 应用 ChP收载的薄荷素油、三七总皂苷、丹参酮提取物、 山楂叶提取物、人参总皂苷等植物油脂和提取物， 以及制剂银黄口服液、三七通舒胶囊等，均采用指 纹图谱或特征图谱进行鉴定 ⚫ 例：丹参酮提取物的指纹图谱测定 色谱条件：ODS柱(25cm×4.6mm，5m)；乙腈 为流动相A，0.026%磷酸溶液为流动相B，梯度洗 脱；检测波长270nm；柱温25℃；流速0.8ml/min 理论板数按隐丹参酮峰计算应不低于20000 参照物：隐丹参酮和丹参酮IIA对照品混合溶液 第8章第3,4,5节第2讲-鉴别、检查、含量测定
●丹参酮提取物的指纹图谱 的要求:供试品指纹图 谱中应分别呈现与参 参照物峰 照物色谱峰保留时间 220 相同的色谱峰 011 105 供试品指纹图谱与对 123416/8c 113 照指纹图谱的相似度 007214.521.729036243.550.7min 不得低于0.90 对照指纹图谱 隐丹参酮(10号)峰 13个共有峰中,8号峰为15,16 二氢丹参酮l;10号峰为隐丹参 高值不得低于丹参醐酮;11号峰为丹参酮!;13号峰 (11号)的峰高值为丹参酮Ⅲ 第8章第3,4,5节第2讲-鉴别、检査、含量测定
对照指纹图谱 6 ⚫丹参酮提取物的指纹图谱 要求：供试品指纹图 谱中应分别呈现与参 照物色谱峰保留时间 相同的色谱峰 供试品指纹图谱与对 照指纹图谱的相似度 不得低于0.90 隐丹参酮（10号）峰 高值不得低于丹参酮I （11号）的峰高值 13个共有峰中，8号峰为15,16- 二氢丹参酮I；10号峰为隐丹参 酮；11号峰为丹参酮I；13号峰 为丹参酮IIA 参照物峰 第8章第3,4,5节第2讲-鉴别、检查、含量测定
●三七通舒胶囊的指纹图谱 色谱条件:0Ds689 相A,水为流动 365.17 七皂苷R1与邻近4 Rg1与人参皂苷中2 5 ③参照物:人参皂00 0.00070174026.1034804350522060.90 对照指纹图谱 5个共有峰中峰2:三七皂苷R1峰3:人参皂苷Rg1 峰4:人参皂苷Re 的要求:供试品指纹图谱中应分别呈现与参照物峰保留 时间相同的色谱峰,供试品与对照指纹图谱的相似度 不得低于0.90 第8章第3,4,5节第2讲-鉴别、检查、含量测定 7
⚫三七通舒胶囊的指纹图谱 色谱条件：ODS柱(25cm×4.6mm，5m)；乙腈为流动 相A，水为流动相B，梯度洗脱；检测波长210nm。三 七皂苷R1与邻近峰的分离度应不低于1.5，人参皂苷 Rg1与人参皂苷Re的分离度应不低于1.3 参照物：人参皂苷Rg1、Re和三七皂苷R1混合对照液 第8章第3,4,5节第2讲-鉴别、检查、含量测定 7 要求：供试品指纹图谱中应分别呈现与参照物峰保留 时间相同的色谱峰，供试品与对照指纹图谱的相似度 不得低于0.90
●银黄口服液的特征图谱 ③色谱条件:ODS柱;以乙腈为 4434 流动相A,0.4%磷酸溶液为流 295.60 动相B,梯度洗脱;检测波长 327nm;理论板数按绿原酸峰 计算应不低于2000 1304 19.56 26.08 对照特征图谱 参照物:绿原酸对照品溶液 峰1:新绿原酸峰2:绿原酸峰3:隐绿原酸 峰4:3,4O-二咖啡酰奎宁酸峰5:3,50二咖啡酰奎宁酸 要求:供试品色谱中应呈现7个 峰6:4,5O-二咖啡酰奎宁酸峰7黄芩苷 特征峰,与参照物峰相对应的峰观定值:峰17的相对 分别为 :0.76、1.00、 为S峰,计算各特征峰与S峰的105、180、1.87 相对呎,应在规定值5%之内201、2.33 第8章第3,4,5节第2讲-鉴别、检査、含量测定 8
⚫银黄口服液的特征图谱 色谱条件：ODS柱；以乙腈为 流动相A，0.4%磷酸溶液为流 动相B，梯度洗脱；检测波长 327nm；理论板数按绿原酸峰 计算应不低于2000 参照物：绿原酸对照品溶液 要求：供试品色谱中应呈现7个 特征峰，与参照物峰相对应的峰 为S峰，计算各特征峰与S峰的 相对tR，应在规定值5%之内 第8章第3,4,5节第2讲-鉴别、检查、含量测定 8 规定值：峰17的相对tR 分别为：0.76、1.00、 1.05、1.80、1.87、 2.01、2.33
3.5DNA条形码分子鉴定法 ⑧即聚合酶链式反应法——利用基因组中一段公认 的相对较短的DNA序列进行物种鉴定的一种分子 生物学技术,用于中药材及基原物种的鉴定,是 传统形态鉴别方法的有效补充 ⑧测定步骤——主要有:供试品处理、DNA提取、 DNA条形码序列PCR扩增、电泳检测(PCR产物) 和序列测定、序列拼接(通过专业软件获得中药 材DNA条形码序列)及结果判定(与国家认可的 中药材DNA条形码标准序列比对) 第8章第3,4,5节第2讲-鉴别、检査、含量测定
9 3.5 DNA条形码分子鉴定法 即聚合酶链式反应法——利用基因组中一段公认 的相对较短的DNA序列进行物种鉴定的一种分子 生物学技术，用于中药材及基原物种的鉴定，是 传统形态鉴别方法的有效补充 测定步骤——主要有：供试品处理、DNA提取、 DNA条形码序列PCR扩增、电泳检测（PCR产物） 和序列测定、序列拼接（通过专业软件获得中药 材DNA条形码序列）及结果判定（与国家认可的 中药材DNA条形码标准序列比对） 第8章第3,4,5节第2讲-鉴别、检查、含量测定
应用 320bp ③乌梢蛇饮片的鉴别 川贝母的鉴别 取供试品和对照药材,取供试品和对照药材同 同法分别进行模板DNA法分别提取DNA 提取→PCR反应→电°进行 PCR-RFLP(聚合 泳检测 酶链式反应限制性内切 酶长度多态性)反应 供试品凝胶电泳图中, 电泳检测—供试品电 在与对照药材凝胶电泳 泳图谱中在与对照药材 图相应的位置上,在 电泳图相应的位置上, 300~400bp应有单 在100~250b应有两条 DNA条带 DNA条带 第8章第3,4,5节第2讲-鉴别、检查、含量测定 10
应用 乌梢蛇饮片的鉴别 ⚫ 取供试品和对照药材， 同法分别进行模板DNA 提取→ PCR反应→电 泳检测 ⚫ 供试品凝胶电泳图中， 在与对照药材凝胶电泳 图相应的位置上，在 300～400bp应有单一 DNA条带 川贝母的鉴别 ⚫ 取供试品和对照药材同 法分别提取DNA ⚫ 进行PCR-RFLP（聚合 酶链式反应-限制性内切 酶长度多态性）反应 ⚫ 电泳检测——供试品电 泳图谱中在与对照药材 电泳图相应的位置上， 在100～250bp应有两条 DNA条带 第8章第3,4,5节第2讲-鉴别、检查、含量测定 10