案例——吩噻嗪类药物的含量测定方法设计 查阅有关书籍、文献,设计2~3种测定吩噻嗪类药物含量的方法,并说明反应原理, 主要试剂和实验条件,以及含量计算方法。 ①结构分析 吩噻嗪类药物具有硫氮杂蒽母核,代表性药物有:异丙嗪、氯丙嗪、奋乃静、氟奋乃静、 三氟拉嗪、硫利达嗪等。结构通式如下: R 母核为共轭三环π系统,10位R取代基为具有2~3个碳链的二甲或二乙氨基,或含氮 杂环,2位R取代基通常为H、Cl、CF3、SCH3等。分析其结构,主要具有如下特征:①多 个吸收峰的紫外吸收光谱;②10位R取代基上N原子具有碱性;③环上硫原子易被氧化成 亚砜和砜,未被氧化的硫原子可与某些金属离子(如钯离子)形成有色配位化合物。因此, 该类药物的含量测定可以采用紫外分光光度法、非水碱量法、比色法,以及HPLC法 非水碱量法: (1)方法原理:非水碱量法是本类原料药的主要含量测定方法。利用本类药物10位R 取代基上N原子的碱性,在非水溶液中,用高氯酸滴定剂进行滴定。一般R取代基上有n 个氮原子,消耗n摩尔高氯酸,如奋乃静、盐酸三氟拉嗪等消耗2摩尔高氯酸;盐酸氯丙嗪 仅消耗1摩尔高氯酸。 CH3 HCI Cl 奋乃静 盐酸氯丙嗪 盐酸异丙嗪 (2)主要试剂与指示终点方法:采用的非水溶剂有冰醋酸、冰醋酸-醋酐、醋酐-甲酸等。 指示终点的方法有结晶紫指示剂法、电位滴定法。 3)注意事项:①本类药物临床上应用的多为盐酸盐,由于盐酸酸性较强,影响滴定
案例——吩噻嗪类药物的含量测定方法设计 查阅有关书籍、文献，设计 2～3 种测定吩噻嗪类药物含量的方法，并说明反应原理， 主要试剂和实验条件，以及含量计算方法。 结构分析： 吩噻嗪类药物具有硫氮杂蒽母核，代表性药物有：异丙嗪、氯丙嗪、奋乃静、氟奋乃静、 三氟拉嗪、硫利达嗪等。结构通式如下： N S R' R 2 1 3 6 5 4 7 8 9 10 母核为共轭三环系统，10 位 R 取代基为具有 2～3 个碳链的二甲或二乙氨基，或含氮 杂环，2 位 R取代基通常为 H、Cl、CF3、SCH3等。分析其结构，主要具有如下特征：①多 个吸收峰的紫外吸收光谱；②10 位 R 取代基上 N 原子具有碱性；③环上硫原子易被氧化成 亚砜和砜，未被氧化的硫原子可与某些金属离子（如钯离子）形成有色配位化合物。因此， 该类药物的含量测定可以采用紫外分光光度法、非水碱量法、比色法，以及 HPLC 法。 非水碱量法： （1）方法原理：非水碱量法是本类原料药的主要含量测定方法。利用本类药物 10 位 R 取代基上 N 原子的碱性，在非水溶液中，用高氯酸滴定剂进行滴定。一般 R 取代基上有 n 个氮原子，消耗 n 摩尔高氯酸，如奋乃静、盐酸三氟拉嗪等消耗 2 摩尔高氯酸；盐酸氯丙嗪 仅消耗 1 摩尔高氯酸。 N N OH S N Cl S N N CH3 CH3 Cl . HCl S N N CH3 H3C CH3 . HCl 奋乃静 盐酸氯丙嗪 盐酸异丙嗪 （2）主要试剂与指示终点方法：采用的非水溶剂有冰醋酸、冰醋酸-醋酐、醋酐-甲酸等。 指示终点的方法有结晶紫指示剂法、电位滴定法。 （3）注意事项：①本类药物临床上应用的多为盐酸盐，由于盐酸酸性较强，影响滴定
反应,故在滴定前需加入足够量醋酸汞,使与盐酸酸根形成氯化汞而消除干扰。②非水溶剂 对温度较敏感,若滴定温度与标定标准液时温度不一致,则需按校正公式对标准液浓度进行 校正(温差在10℃以内),或重新标定(温差超过10℃)。③非水滴定应避免水分引入,所 用仪器均应干燥。若用电位法指示终点,必须将甘汞电极内盛有的饱和氯化钾水溶液改换成 饱和氯化钾的无水甲醇溶液。 (4)含量计算:采用滴定度法计算 xT×F 6紫外分光光度法 (1)方法原理:本类药物在紫外光区205nm、254nm、300nm附近有三个吸收峰值, 最强峰在254nm附近,一般选择254nm附近的峰进行测定,但当制剂中辅料对测定有干扰 时,则可选用30onm附近的波长进行测定。也可采用计算光谱法,如双波长法、导数光谱 法等来消除制剂中其他成分的干扰,以及氧化产物的干扰。 (2)含量计算:本法主要用于本类药物的制剂分析,以对照品比较法或E=法计算含量。 相当于标示量(%) A样×C对稀释倍数平均单剂质量 A 取样量 或,相当于标示量(%)=4x稀释倍数x平均单剂质量×100% 取样量 规格 比色法 利用环上硫原子可与某些金属离子形成有色配位化合物的性质,可采用钯离子比色法测 定含量,本法可以消除氧化产物的影响,因后者不与钯离子反应。在pH2的缓冲溶液中, 吩噻嗪药物分子结构中的二价硫与钯离子形成红色配位化合物,在500nm波长附近有最大 吸收,测定供试液和对照品溶液在最大吸收波长处的吸光度,以对照品比较法计算含量 5高效液相色谱法 (1)测定方法:用反相高效液相色谱法测定盐酸异丙嗪制剂含量,一般以ODS柱为分 析柱;甲醇-水(用冰醋酸调pH至2~-3)为流动相;检测波长254nm 取样品适量,用盐酸溶液溶解并稀释至一定浓度的溶液,作为供试品溶液。另取盐酸异 丙嗪对照品,同法制成一定浓度的溶液,作为对照品溶液。分别取供试品溶液和对照品溶液 定量(如2oμ〕进样测定,按外标法以峰面积计算盐酸异丙嗪制剂含量
反应，故在滴定前需加入足够量醋酸汞，使与盐酸酸根形成氯化汞而消除干扰。②非水溶剂 对温度较敏感，若滴定温度与标定标准液时温度不一致，则需按校正公式对标准液浓度进行 校正（温差在 10℃以内），或重新标定（温差超过 10℃）。③非水滴定应避免水分引入，所 用仪器均应干燥。若用电位法指示终点，必须将甘汞电极内盛有的饱和氯化钾水溶液改换成 饱和氯化钾的无水甲醇溶液。 （4）含量计算：采用滴定度法计算。 含量（%）= 100% W V T F 紫外分光光度法： （1）方法原理：本类药物在紫外光区 205nm、254nm、300nm 附近有三个吸收峰值， 最强峰在 254nm 附近，一般选择 254nm 附近的峰进行测定，但当制剂中辅料对测定有干扰 时，则可选用 300nm 附近的波长进行测定。也可采用计算光谱法，如双波长法、导数光谱 法等来消除制剂中其他成分的干扰，以及氧化产物的干扰。 （2）含量计算：本法主要用于本类药物的制剂分析，以对照品比较法或 1% E1cm 法计算含量。 相当于标示量（%）= 对 样 对 A A C 100% 标示量 平均单剂质量 取样量 稀释倍数 或，相当于标示量（%）= 规格 平均单剂质量 取样量 稀释倍数 100 1% E1 L A cm ×100% 比色法： 利用环上硫原子可与某些金属离子形成有色配位化合物的性质，可采用钯离子比色法测 定含量，本法可以消除氧化产物的影响，因后者不与钯离子反应。在 pH 2 的缓冲溶液中， 吩噻嗪药物分子结构中的二价硫与钯离子形成红色配位化合物，在 500nm 波长附近有最大 吸收，测定供试液和对照品溶液在最大吸收波长处的吸光度，以对照品比较法计算含量。 高效液相色谱法： （1）测定方法：用反相高效液相色谱法测定盐酸异丙嗪制剂含量，一般以 ODS 柱为分 析柱；甲醇-水（用冰醋酸调 pH 至 23）为流动相；检测波长 254nm。 取样品适量，用盐酸溶液溶解并稀释至一定浓度的溶液，作为供试品溶液。另取盐酸异 丙嗪对照品，同法制成一定浓度的溶液，作为对照品溶液。分别取供试品溶液和对照品溶液 一定量（如 20l）进样测定，按外标法以峰面积计算盐酸异丙嗪制剂含量
(2)注意问题: ①高效液相色谱法色谱条件可以参考中国药典方法,但色谱法与容量法不同,色谱条 件在实际样品测定中是可以进行适当调整的,只要在药典允许的范围内(色谱柱种类、检测 器类型、流动相成分不得更改)。 ②oDS柱为非极性柱,是高效液相色谱中最常用的色谱柱,其填料为十八烷基硅烷 键合硅胶,流动相pH应控制在2~8以内 ③一定比例的甲醇水是反相色谱最常用的流动相,药典规定的醇水比例可根据色谱 分离情况作适当调整;水相pH用醋酸调节至2~3,可根据实际色谱峰分离情况调整至一定 值,但不能超出ODS柱使用范围。 ④制剂分析测定前需进行适当处理。如片剂测定,一般取10片或20片,精密称定, 研细,取片粉适量,相当于被测物一定量,此处要根据片剂规格和平均片重进行计算,求出 片粉理论称量,控制实际称量在理论称量的±1⑩0%以內,然后用适当溶剂溶解并稀释至一定 浓度 (3)计算 ①片粉取样量计算:假如10片重35675g,规格0.3g,要求取相当于被测物045g,则 应取片粉(X): 根据: 平均片重 规格 相当于被测物量 3.5675/10 0.3 可称取片粉的范围=X±10% ②片剂含量计算:首先用外标法计算供试品溶液浓度。根据供试品溶液和对照品溶液的 An×C 峰面积(A)和对照品溶液的浓度(C),供试品溶液的浓度C ,然后根据稀释 倍数(F)和所取片粉重量(W)、片剂规格、平均片重,计算相当于标示量的百分含量: 相当于标示量(%)=C、F、平均片重 W标示×100% ③注射剂含量计算:相当于标示量(%)=C样x 100% 取样体积(m)标示量 6该案例说明的主要问题 药物结构-理化性质-分析方法选择之间的关系
（2）注意问题： ① 高效液相色谱法色谱条件可以参考中国药典方法，但色谱法与容量法不同，色谱条 件在实际样品测定中是可以进行适当调整的，只要在药典允许的范围内（色谱柱种类、检测 器类型、流动相成分不得更改）。 ② ODS 柱为非极性柱，是高效液相色谱中最常用的色谱柱，其填料为十八烷基硅烷 键合硅胶，流动相 pH 应控制在 28 以内。 ③ 一定比例的甲醇-水是反相色谱最常用的流动相，药典规定的醇-水比例可根据色谱 分离情况作适当调整；水相 pH 用醋酸调节至 23，可根据实际色谱峰分离情况调整至一定 值，但不能超出 ODS 柱使用范围。 ④ 制剂分析测定前需进行适当处理。如片剂测定，一般取 10 片或 20 片，精密称定， 研细，取片粉适量，相当于被测物一定量，此处要根据片剂规格和平均片重进行计算，求出 片粉理论称量，控制实际称量在理论称量的10% 以内，然后用适当溶剂溶解并稀释至一定 浓度。 （3）计算： ①片粉取样量计算：假如 10 片重 3.5675g，规格 0.3g ，要求取相当于被测物 0.45g，则 应取片粉（X）： 根据: 可称取片粉的范围=X10% ②片剂含量计算：首先用外标法计算供试品溶液浓度。根据供试品溶液和对照品溶液的 峰面积（A）和对照品溶液的浓度（C），供试品溶液的浓度 C 样= 对 样 对 A A C ，然后根据稀释 倍数（F）和所取片粉重量（W）、片剂规格、平均片重，计算相当于标示量的百分含量： 相当于标示量（%）=C 样 100% 标示量 平均片重 W F ③注射剂含量计算：相当于标示量（%）=C 样 100% 1 ml 取样体积（ ） 标示量 F 该案例说明的主要问题： 药物结构-理化性质-分析方法选择之间的关系。 3.5675/10 0.3 X 0.45 = 平均片重 规格 X 相当于被测物量 =