案例四 复方吡啦西坦片中部分组分的鉴别方法的建立。 处方分析与问题提出 复方吡啦西坦片剂由吡啦西坦、脑蛋白水解物、硫酸软骨素、谷氨酸、维生素B1、B2、 B6和维生素E等8种药物加适量辅料制成。各成分含量差异悬殊,对鉴别方法的专属性和 灵敏度提出了挑战。如何排除干扰,选择灵敏的方法进行分别鉴别呢? Q设计思路: 首先应了解各组成的理化性质、各原料药物及单方制剂的鉴别方法,经分析比较不同鉴 别试验的专属性,选取其中一种方法进行试验,同时进行阳性对照和阴性对照试验。通常取 被测组分的原料药或纯品作为阳性对照,取缺被测组分的复方制剂作为阴性对照,与复方制 剂同法操作,比较试验结果。 举例说明 以复方吡啦西坦片剂中吡啦西坦和维生素B1的鉴别为例,说明鉴别方法的建立过程。 、吡啦西坦的鉴别: 查阅《中囯药典》吡啦西坦及其制剂的鉴别方法有HPLC法和高锰酸钾法,考虑到 制剂组成复杂,化学鉴别法的干扰因素多,故选择具有分离分析功能、专属性强的HPLC 法作为吡啦西坦的鉴别方法 (1)溶液配制 供试品溶液:取本品细粉适量(约相当于吡拉西坦01g),置100ml量瓶中,加水 适量,超声使溶解,用水稀释至刻度,摇匀,滤过。精密量取续滤液适量,用水稀释10倍, 摇匀,作为供试品溶液(0.1mgm 阳性对照液:取吡拉西坦对照品适量,精密称定,加水溶解井定量稀释成每1ml中约含 o.lmg的溶液,作为吡拉西坦阳性对照液 阴性对照液:按处方量配制缺吡拉西坦的空白制剂,照供试品溶液制备方法制备,作 为阴性对照液。 (2)测定方法 色谱条件:ODS色谱柱(250mm×46mm,5um),以甲醇水(10:90)为流动相,流速 为1.0ml/min,检测波长为210nm。 测定:取上述三种溶液各20μL,注入液相色谱仪,记录各溶液的HPLC色谱图 供试品溶液的色谱图中吡拉西坦主峰的保留时间应与阳性对照液中吡拉西坦峰的保留 时间一致,在吡拉西坦色谱峰处,阴性对照液的HPLC图中无色谱峰出现 维生素B1的鉴别 维生素B1有个特殊反应——硫色素反应,具有很高的专属性和灵敏度,因此,可用来 作为鉴别方法 (1)溶液配制:取本品5片(约相当于维生素B12.5mg),置研钵中,加水25mL, 充分研黁,滤过,取滤液作为供试品溶液。另取维生素B1适量,加水溶解并稀释至0. 1mg/ml 的溶液,作为阳性对照液。按处方量配制缺维生素B1的空白制剂,照供试品溶液制备方法 制备,作为阴性对照液。 (2)测定方法:取上述三种溶液各10mL,分别加氢氧化钠试液15mL,铁氰化钾试 液0.5mL,正丁醇5mL,强力振摇2分钟,放置使分层,置紫外灯下观察,供试品溶液和阳 性对照液的上层显蓝色荧光,加盐酸使成酸性,荧光即消失;再加氢氧化钠试液使成碱性, 荧光又出现;阴性对照液无此现象。 该案例说明的主要问题 如何建立药物的鉴别试验方法,进行方法的专属性考察
案例四 复方吡啦西坦片中部分组分的鉴别方法的建立。 处方分析与问题提出： 复方吡啦西坦片剂由吡啦西坦、脑蛋白水解物、硫酸软骨素、谷氨酸、维生素B1、B2、 B6 设计思路： 和维生素E 等 8 种药物加适量辅料制成。各成分含量差异悬殊，对鉴别方法的专属性和 灵敏度提出了挑战。如何排除干扰，选择灵敏的方法进行分别鉴别呢？ 首先应了解各组成的理化性质、各原料药物及单方制剂的鉴别方法，经分析比较不同鉴 别试验的专属性，选取其中一种方法进行试验，同时进行阳性对照和阴性对照试验。通常取 被测组分的原料药或纯品作为阳性对照，取缺被测组分的复方制剂作为阴性对照，与复方制 剂同法操作，比较试验结果。 举例说明： 以复方吡啦西坦片剂中吡啦西坦和维生素B1 一、吡啦西坦的鉴别： 的鉴别为例，说明鉴别方法的建立过程。 查阅《中国药典》吡啦西坦及其制剂的鉴别方法有 HPLC 法和高锰酸钾法，考虑到 制剂组成复杂，化学鉴别法的干扰因素多，故选择具有分离分析功能、专属性强的 HPLC 法作为吡啦西坦的鉴别方法。 （1） 溶液配制 供试品溶液：取本品细粉适量（约相当于吡拉西坦 0.1g），置 100ml 量瓶中，加水 适量，超声使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，滤过。精密量取续滤液适量，用水稀释 10 倍， 摇匀，作为供试品溶液（0.1mg/ml）。 阳性对照液：取吡拉西坦对照品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释成每 1ml 中约含 0.1mg 的溶液，作为吡拉西坦阳性对照液。 阴性对照液：按处方量配制缺吡拉西坦的空白制剂，照供试品溶液制备方法制备，作 为阴性对照液。 （2） 测定方法 色谱条件：ODS 色谱柱（250mm×4.6mm，5um），以甲醇-水（10:90）为流动相，流速 为 1.0ml/min，检测波长为 210nm。 测定：取上述三种溶液各 20µL，注入液相色谱仪，记录各溶液的 HPLC 色谱图。 供试品溶液的色谱图中吡拉西坦主峰的保留时间应与阳性对照液中吡拉西坦峰的保留 时间一致，在吡拉西坦色谱峰处，阴性对照液的 HPLC 图中无色谱峰出现。 二、维生素B1 维生素B 的鉴别： 1 （1） 溶液配制：取本品 5 片（约相当于维生素B 有个特殊反应——硫色素反应，具有很高的专属性和灵敏度，因此，可用来 作为鉴别方法。 1 2.5mg），置研钵中，加水 25mL， 充分研磨，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取维生素B1 适量，加水溶解并稀释至 0.1mg/ml 的溶液，作为阳性对照液。按处方量配制缺维生素B1 （2） 测定方法：取上述三种溶液各 10mL，分别加氢氧化钠试液 15mL，铁氰化钾试 液 0.5mL，正丁醇 5mL，强力振摇 2 分钟，放置使分层，置紫外灯下观察，供试品溶液和阳 性对照液的上层显蓝色荧光，加盐酸使成酸性，荧光即消失；再加氢氧化钠试液使成碱性， 荧光又出现；阴性对照液无此现象。 的空白制剂，照供试品溶液制备方法 制备，作为阴性对照液。 该案例说明的主要问题： 如何建立药物的鉴别试验方法，进行方法的专属性考察