江大学网络教育精品资源共享课 第7章色谱法测定药物的含量 ①教学要求 1.掌握色谱法的系统适用性试验、含量测定方法和含量计算。掌握高效液相法的常用 固定相、流动相、检测器,以及《中国药典》对仪器的要求。掌握常用气相色谱柱、检测器 与适用范围,以及《中国药典》对色谱条件和仪器的要求。 2.熟悉毛细管电泳法、分子排阻法和离子色谱法的原理与应用。 3.了解手性高效液相法、超高效液相色谱法和常用色-质联用技术的原理与应用。 Q关键词 系统适用性试验;高效液相法;气相色谱法;毛细管电泳法;分子排阻法;离子色谱法; 色-质联用 召学习重点 高效液相色谱法 1.分类——正相色谱( NP-HPLO)、反相色谱( RP-HPLO)、反相离子抑制色谱 (RP-SC)、反相离子对色谱(RP-|PC) 2.系统适用性试验与要求 理论板数(n):n=16(tW2或n=554(8-)2(应符合规定) 分离度(R):R=2-1n)或R=2%-)(R1.5) W1+W2 1.70(W1hn2+W2.m2) 拖尾因子(T):T=100sh(峰高定量,T=095~1.05 2d1 重复性:连续进样5针,峰面积的RSD应≤2.0% 为符合系统适用性试验要求,可适当改变柱长度、内径、牌号、粒度、流动相流速、流 动相各组成的比例、柱温、进样量、检测器灵敏度等。但不得改变固定相种类、流动相组成、 检测器类型。 3.定量方法——内标法、外标法 4.应用示例——炔诺孕酮(内标法);青霉素钠、阿司匹林泡腾片(外标法);注射用
浙江大学网络教育精品资源共享课 第 7 章 色谱法测定药物的含量 教学要求 1. 掌握色谱法的系统适用性试验、含量测定方法和含量计算。掌握高效液相法的常用 固定相、流动相、检测器，以及《中国药典》对仪器的要求。掌握常用气相色谱柱、检测器 与适用范围，以及《中国药典》对色谱条件和仪器的要求。 2. 熟悉毛细管电泳法、分子排阻法和离子色谱法的原理与应用。 3. 了解手性高效液相法、超高效液相色谱法和常用色-质联用技术的原理与应用。 关键词 系统适用性试验；高效液相法；气相色谱法；毛细管电泳法；分子排阻法；离子色谱法； 色-质联用 学习重点 一、高效液相色谱法 1. 分类——正相色谱（NP-HPLC）、反相色谱（RP-HPLC）、反相离子抑制色谱 （RP-ISC）、反相离子对色谱（RP-IPC）。 2. 系统适用性试验与要求 理论板数（n）：n＝16（tR/W）2 2 / 2 5.54( ) h R W t 或 n = （应符合规定） 分离度（R）： W W t t R R R 1 2 2( ) 2 1 + − = 或 1.70( ) 2( ) 1, / 2 2, / 2 2 1 h h R R W W t t R + − = （R≥1.5） 拖尾因子（T）： 1 0.05 h 2d W T = （峰高定量，T=0.95～1.05） 重复性：连续进样 5 针，峰面积的 RSD 应≤2.0％ 为符合系统适用性试验要求，可适当改变柱长度、内径、牌号、粒度、流动相流速、流 动相各组成的比例、柱温、进样量、检测器灵敏度等。但不得改变固定相种类、流动相组成、 检测器类型。 3. 定量方法——内标法、外标法。 4. 应用示例——炔诺孕酮（内标法）；青霉素钠、阿司匹林泡腾片（外标法）；注射用
江大学网络教育精品资源共享课 普鲁卡因青霉素、重酒石酸去甲肾上腺素注射液(离子对色谱,外标法);庆大霉素C组分 测定(蒸发光散射检测器检测) 二、气相色谱法 1.气相色谱仪——由载气(如氮气)、色谱柱(填充柱、毛细管柱)、检测器(如FID)、 温控系统(进样口、柱温箱、检测器)等组成 2.测定方法与应用——内标法(维生素E测定)、外标法、标准溶液加入法。 三、毛细管电泳法 1原理—带电粒子在一定介质中,因电场作用而发生定向运动,根据带电粒子所带电 荷数、形状、解离度不同,使迁移速度不同而分离,并在电渗流驱动下,以不同速度向同· 方向(检测器方向)移动而被检出 2分离模式——毛细管区带电泳、毛细管凝胶电泳、毛细管等速电泳、毛细管等电聚焦 电泳、胶束电动毛细管色谱、毛细管电色谱。 四、其它色谱 1.分子排阻色谱法——为分子筛机制,被测物按分子尺寸由大至小先后被洗脱。用于蛋 白质多肽的分子量测定生物大分子聚合物分子量与分子量分布的测定、高分子杂质测定(采 用自身对照外标法计算供试品中高分子杂质的相对百分含量)。 2.离子色谱法——离子交换原理,固定相为阴、阳离子交换树脂使用pH范围为1-14, 流动相为酸碱溶液,以电导检测器检测,用于亲水性阴、阳离子的测定。 3.手性高效液相色谱法——手性试剂衍生化法(CDR)、手性流动相添加剂法(CMPA, 如酮康唑拆分)、手性固定相法(CSP) 4.色-质联用技术与应用——质谱仪由真空系统、进样系统(直接进样、接口技术) 离子源(El、Cl、FAB、APl、 MALDI、CP等)、质量分析器(四极杆、离子阱、飞行时间 傅里叶变换等)、检测器(光电倍增器或电子倍增器)组成。常用联用技术:GC-MS、LCMS
浙江大学网络教育精品资源共享课 普鲁卡因青霉素、重酒石酸去甲肾上腺素注射液（离子对色谱，外标法）；庆大霉素 C 组分 测定（蒸发光散射检测器检测）。 二、气相色谱法 1. 气相色谱仪——由载气（如氮气）、色谱柱（填充柱、毛细管柱）、检测器（如 FID）、 温控系统（进样口、柱温箱、检测器）等组成。 2. 测定方法与应用——内标法（维生素 E 测定）、外标法、标准溶液加入法。 三、毛细管电泳法 1.原理——带电粒子在一定介质中，因电场作用而发生定向运动，根据带电粒子所带电 荷数、形状、解离度不同，使迁移速度不同而分离，并在电渗流驱动下，以不同速度向同一 方向（检测器方向）移动而被检出。 2.分离模式——毛细管区带电泳、毛细管凝胶电泳、毛细管等速电泳、毛细管等电聚焦 电泳、胶束电动毛细管色谱、毛细管电色谱。 四、其它色谱 1.分子排阻色谱法——为分子筛机制，被测物按分子尺寸由大至小先后被洗脱。用于蛋 白质多肽的分子量测定、生物大分子聚合物分子量与分子量分布的测定、高分子杂质测定（采 用自身对照外标法计算供试品中高分子杂质的相对百分含量）。 2. 离子色谱法——离子交换原理，固定相为阴、阳离子交换树脂，使用 pH 范围为 1~14， 流动相为酸碱溶液，以电导检测器检测，用于亲水性阴、阳离子的测定。 3. 手性高效液相色谱法——手性试剂衍生化法（CDR）、手性流动相添加剂法（CMPA， 如酮康唑拆分）、手性固定相法（CSP）。 4. 色-质联用技术与应用——质谱仪由真空系统、进样系统（直接进样、接口技术）、 离子源（EI、CI、FAB、API、MALDI、ICP等）、质量分析器（四极杆、离子阱、飞行时间、 傅里叶变换等）、检测器（光电倍增器或电子倍增器）组成。常用联用技术：GC-MS、LC-MS