二代测序Next-Generation Sequencing
二代测序 Next-Generation Sequencing
NGS应用DNATargetedDNARNA and Regulation身T复TTTTEE复更?育育
NGS应用
Illumina Seguencing WorkflowIlumina测序流程福LibraryPreparation文库制备cBotCluster GenerationMiSeq簇生成NextSeqHiSeq2500-RapidHiSeqSequencingHiScanSQ测序GAIlxMiSeqNextSeqICS/RTADataAnalysisCASAVA数据分析MSRBaseSpace
0/1文库制备
0 1 文库制备
TruSeqDNAPCRFree文库制备实验流程用荧光染料法定量DNA起始DNA质检及定量利用Covaris仪器中的设定打断DNA至两种不同插入片段DNA打断大小350bp或550bpDNA打碎后立即进行一次纯化（磁珠法）末端修复片段筛选磁珠法片段筛选（磁珠法）该步骤对片段大小分布和文库产出至关重要加A尾加完A尾后必须进行酶的热失活减少接头二聚体的形成接头连接连接反应的效率与起始输入DNA量是否准确密切相关只能用gPCR法进行定量文库质检及定量
31de2山dexP5P7Rd1SPDNAInsertRd2SP5双端标签文库与流动槽（FlowCell）结合的区域Read1和Read2测序引物结合的区域插入片段323标签序列区域（Index）单边index6个碱基；双边index8个碱基，最多可以做384个samples文库制备的目的是在需要测序的DNA片段两端加上能够与测序仪配合的接头序列（Multiplexed，SR，PE）
86122310Qubit2.0DynaMag"-96Sidetume8-20H.PE-miPCRsi5852614AONRNAWarning!Covan
02簇生成、测序
0 2 簇生成、测序
What is aFlow Cell?流动槽（FlowCell）是什么？Aflow cellisa thickglass slidewithchannelsorlanes一种含有通道的厚玻璃片Cluster generation occurs on aflowcell生成在流动槽（flowcell）上完成Each lane is randomlycoated withalawnofoligosthatarecomplementarytolibraryadapters每条通道中都随机植入了能与文库接头互补结合的大量短DNA片段
（单个荧光太弱无法捕提，故需要簇生成增强荧光）簇生成AmplifiedSingle DNAClonal ClusterLibrary扩增后的单个DNA文库DNA克隆簇分子cBotSequencercBo