DNA甲基化
DNA甲基化
DNA甲基化IDNA甲基化：在DNA甲基化转移酶的作用下将甲基选择性地添加到胞嘧啶上形成5-甲基胞嘧啶的过程；刚被发现时被定义为第五种碱基，实际上它是一种重要的表观遗传学标记；、X染基因印记、在调控基因表达、维持染色质结构、色体失活以及胚胎发育等生物学过程中发挥看重大的作用。它就像DNA的一顶最神奇的“帽子
DNA甲基化
eNH2NHDNMTSAMSAHCytosine5-MethylcytosineCH,MBPgenegeneActiveTranscriptionInactiveTranscriptionDNA甲基化修饰和对基因表达的转录调控作用
检测方法(1)1）甲基化特异性的PCR(Methylation-specificPCR，MSP）亚硫酸氢盐处理基因组DNA，所有未发生甲基化的胞密啶被转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变；随后设计针对甲基化和非甲基化序列的引物进行PCR。通过电泳检测MSP扩增产物，如果用针对处理后甲基化DNA链的引物能得到扩增片段，则说明该位点存在甲基化；反之，说明被检测的位点不存在甲基化定性研究
检测方法(1)
检测方法(2)2）亚硫酸氢盐处理+测序Gbisulfite1UGPCRAAAG
检测方法(2)
检测方法(3)3)焦磷酸测厚序(Pyrosequencing）焦磷酸测序技术作为一种新的序列分析技术，能够快速地检测甲基化的频率，对样品中的甲基化位点进行定性及定量检测，为甲基化研究提供了新的途径通过准确定量单个连续的CpG位点上的甲基化频率，能够检测并定量甲基化水平上的细微改变在序列延伸过程中，根据C和T的掺入量来定量确定单个位点的C-T比例因此，不同位点的甲基化变异就能被准确检测，由于焦磷酸测序提供了真实的序列数据，甲基化状态也就以序列形式呈现
检测方法(3)
小检测方法(4)联合亚硫酸氢钠的限制性内切酶分析法荧光定量法(Methylight)甲基化敏感性高分瓣辨率熔解曲线分析基于芯片的甲基化图谱分析高通量测序飞行质谱
联合亚硫酸氢钠的限制性内切酶分析法 荧光定量法(Methylight) 甲基化敏感性高分辨率熔解曲线分析 基于芯片的甲基化图谱分析 高通量测序 飞行质谱 检测方法(4)
3PolymeraseAGGATCTGAGGATINY5TCCTAGACCCPPiCSulfurylaseApFraseCATPCCLuciferaseLightQiagenQ96IDTime
4焦磷酸测序的技术原理（1）焦磷酸测序技术是由4种酶（DNA聚合酶、ATP硫酸化酶荧光素酶和三磷酸腺苷双磷酸酶）催化的同一反应体系中的酶级联化学发光反应。具体过程如下：>仪器向待检测样品中每次只加入一个核苷酸碱基(dNTP）；>互补的碱基结合在模板上时，会释放出焦磷酸基(PPi）；Polymerase+(DNA)n+f+PPi(DNA),+dNTP
4焦磷酸测序的技术原理（2）>PPi在ATP硫酸化酶（ATPDSulfurylase)作用下，合成ATP；PolymeraseAGGATCTACGAGTINY5>ATP作为能量分子，驱动荧光素TCCTAGACAC在荧光素酶的催化下转化为氧化荧光素，并发出与ATP能量成正Ppi比的荧光信号；CSulfurylaseAPraseATPC>信号被CCD数码相机捕捉，形成CCLuciferase峰形PyrogramTM ;Light>未与模板结合的碱基将被三磷酸腺苷双磷酸酶（Apyrase）降解，加入下一种dNTPTime