时间安排1、讲解SNP基因分型实验步骤（10分钟）；2、讲解westernblotting配制聚丙烯酰胺凝胶步骤（20分钟）；3、配制聚丙烯酰胺凝胶之分离胶（15分钟）；4、讲解DNA甲基化实验步骤（25分钟）；5、DNA亚硫酸盐转化实验操作（35分钟）；6、配制聚丙烯酰胺凝胶之浓缩胶（15分钟）；7、 讲解western blotting电泳、转膜、封闭、孵育一抗及二抗等实验步骤；（15分钟）8、westernblotting结果扫描及分析（25分钟）
时间安排 1、讲解SNP基因分型实验步骤（10分钟）； 2、讲解western blotting配制聚丙烯酰胺凝胶步骤（20分钟）； 3、配制聚丙烯酰胺凝胶之分离胶（15分钟）； 4、讲解DNA甲基化实验步骤（25分钟）； 5、 DNA亚硫酸盐转化实验操作（35分钟）； 6、配制聚丙烯酰胺凝胶之浓缩胶（15分钟）； 7、 讲解western blotting电泳、转膜、封闭、孵育一抗及二抗等实 验步骤；（15分钟） 8、western blotting结果扫描及分析（25分钟）
SNP（单核苷酸多态性)基因分型
SNP（单核苷酸多态性） 基因分型
SNP基因分型技术TaqMan探针SNP基因分型步骤
SNP基因分型技术 TaqMan探针 SNP基因分型步骤
SNP分型技术3基于电泳的检测方法基于荧光定量PCR其他检测方法的检测方法PCR-RELP直接测序法质谱分析TaqMan探针法PCR-SSCPHRMSNaPshotAS-PCRLDR
TaqMan荧光探针是一种寡核苷酸探针，荧光基团连接在探针的5'末端，而率灭剂则在3末端。针对染色体上的不同SNP位点分别设计PCR引物和TaqMan探针，通常用于少量SNP位点分析。1.Reporter (R)2QuencherQProbe5'?3
TaqMan荧光探针是一种寡核苷酸探针，荧光基团连接在探针的5’末 端，而淬灭剂则在3’末端。针对染色体上的不同SNP位点分别设计 PCR引物和TaqMan探针，通常用于少量SNP位点分析
PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被萍灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'一3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步
PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，探 针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时， Taq酶的5'－3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭 荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一 条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR 产物形成完全同步
TaqManprobePolymerizationB=RopcrtoQaQuencherForwardProbePrimer5*3'535ReversePrimerStrandDisplacementQProb53353'515CleavageS35635CycleComplete535635
常用的荧光基团是FAM，TET，VIC，HEX。而新型TaqMan-MGB探针使该技术既可进行基因定量分析，又可分析基因突变（SNP），有望成为基因诊断和个体化用药分析的首选技术平台。>TaqMan探针检测的是积累荧光。当探针完整的时候，由于3端的荧光萍灭集团在吸收5端报告基团所发射的荧光能量，本身会发射波长不同的荧光而导致本底高；>MGB探针的淬灭基团采用非荧光萍灭进团，本身不产生荧光，可以大大降低本底信号的强度。同时探针上还连接有MGB修饰基团，可以将探针的Tm提高10C左右。因此为了获得同样的Tm值，MGB探针可以比普通TaqMan探针设计得更短，既降低了合成成本，也使得探针设计的成功率大为提高一一因为在模板的DNA碱基组成不理想的情况下，短的探针比长的更容易设计。实验证明，TaqManMGB探针对于富含A/T的模板可以区分得更为理想
常用的荧光基团是FAM，TET，VIC，HEX。而新型TaqMan-MGB 探针使该技术既可进行基因定量分析，又可分析基因突变（SNP）， 有望成为基因诊断和个体化用药分析的首选技术平台。 TaqMan探针检测的是积累荧光。当探针完整的时候，由于3’端的荧光淬灭集 团在吸收5’端报告基团所发射的荧光能量，本身会发射波长不同的荧光而导致 本底高； MGB探针的淬灭基团采用非荧光淬灭进团，本身不产生荧光，可以大大降低 本底信号的强度。同时探针上还连接有MGB修饰基团，可以将探针的Tm提高 10℃左右。因此为了获得同样的Tm值，MGB探针可以比普通TaqMan探针设 计得更短，既降低了合成成本，也使得探针设计的成功率大为提高——因为 在模板的DNA碱基组成不理想的情况下，短的探针比长的更容易设计。实验 证明，TaqMan MGB探针对于富含A/T的模板可以区分得更为理想
SNP基因分型组织SNP位点探针订RNA的QPCR结果分析购的确定提取
QPCR 结果分析 组织 RNA的 提取 探针订 购 SNP位点 的确定 SNP基因分型
0oSamplePrep:PCR5minutes;AnalysisAbout60minutesMultiplesampletypes(Actualgenotypingdatafromcrudelysatefromwholeblood)